[课件]HIV抗体检测及检测要点PPT
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HIV抗体检测及检测要点
HIV简介
• HIV是HIV感染者及艾滋病（AIDS）的病原 体，主要通过性接触和体液传播，HIV主要 侵犯和破坏辅助性T淋巴细胞（CD4+T淋巴 细胞），使机体细胞免疫功能受损，最后 并发各种严重的机会性感染和肿瘤。 • HIV可分为HIV-1和HIV-2两个型，均为单链 RNA病毒。前者分布广泛，后者主要局限 于非洲某些国家和地区。
其他简便快速的HIV检测方法
• 斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验： 与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。 区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色 的胶体金（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作 为洗涤方法。试剂稳定，可室温长期保存。 试验时不需任何设备，迅速、简便、特异 性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA， 适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目 前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口 试剂和国内产品。一般可在1030min内判 读结果。
HIV抗体检测的目的
• HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 • 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染 率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括 各类高危人群和一般人群。 • 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状 况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、 术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 • 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播 HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆 筛查。
HIV抗体检测的要点
• • • • 筛查试验阳性不能出阳性报告。 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 严格按照试剂盒说明书操作。 注意防止样品间交叉污染。
常规HIV抗体检测的方法
• HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检） 和确认试验。 • HIV抗体检测筛查试验 • 筛查试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注 册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐 使用经临床质量评估敏感性高和特异性强的试剂。 • 筛查方法：常用的筛查方法是酶联免疫试验 （ELISA）。目前国内外主要使用第三代（双抗 原夹心法）试剂，第四代ELISA HIV抗原抗体联 合测定试剂已在有些国家和地区用于血源筛查， 同时检测抗原抗体，可将检出时间提前4~9.1d， 有利于降低血源筛查的残余危险度。
HIV简介
• 人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原， 然后很快消失直到疾病后期才重新出现。 几周后出现IgM抗体并很快消失，此后IgG 抗体出现并一直存在。HIV感染的实验室诊 断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检 测为辅，后者要求高，仅限于某些研究实 验室中进行。
HIV简介
• HIV-抗体检测分为筛查试验和确认试验两 种，筛查试验为阳性的血清必须进一步确 认，确认为阳性的方可报告HIV抗体阳性。 • 筛查试验的要求是敏感性高，理论上要求 达到100%（97%--99%），尽可能避免漏 掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性 （99%）要求不是太高，允许有少量假阳 性，这些假阳性可以通过重复检测和确认 试验排除。
几种常规HIV抗体检测方法的比较
• 在感染早期，IgM抗体出现时第三代、第四 代ELISA、PA、胶体硒方法优于WB，而在 方法学上，硒标的敏感性要低于第三代、 第四代ELISA和PA。 • 因此，当两种筛查试验均阳性或一阴一阳 而WB阴性时，不能轻易报告阴性，要同 WB不确定反应一样，至少随访6个月，以 防漏检。建议将WB和胶体硒法检测的“窗 口期”至少定为6个月。
第三代 ELISA 第四代 ELISA PA 胶体硒 WB
检测的是总抗体， 第四代ELISA可同 时检测P24抗原 P24抗原 感染早期 消失、抗 P24抗原 体产生时 出现时敏 敏感性高 感性高
主要包括IgM、 IgG抗体 操作方便 易行，敏 感性特异 性均可
Biblioteka Baidu
IgG抗体
敏感性低 IgG抗体 于第三代、 出现时特 异性高 第四代 ELISA和 PA
HIV抗体检测适用范围
• 适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制 机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生 保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS病人 的诊断、报告和处理的实验室依据。
HIV抗体检测实验室
• 应符合《全国艾滋病检测工作规范（2004 年第二检测版）》中对检测实验室人员、 建筑设施和设备等条件的要求。 • 应符合《实验室 生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室 （BSL-2）的各项要求。 • 实验室的质量保证和实验室安全防护按 《全国艾滋病检测技术规范》规定执行。
HIV抗体筛查检测流程
样 品 筛查试剂
初筛检测
阳性反应 阴性反应
原有试剂加另外一种筛查试剂
重复检测
均阳性反应
一阴一阳
均阴性反应
送确认实验室确认
报告阴性
HIV抗体初筛试验
• 实验准备：将试剂和样品放置在室温(20℃)平衡, 按实验室SOP做好试剂准备。 • 实验操作 ：按试剂盒说明书以及质控和安全防护 要求进行筛查检测。 • 实验结果 ：NC、PC符合试剂盒实验成立的条件， Cut off值 = 阴性对照均值 + C，小于Cut off为阴 性，大于或等于Cut off为阳性。 • 报告：对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实 验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样 品，须进行复检，不能出阳性报告。
其他简便快速的HIV检测方法
• 明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检 测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒 作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般 为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原 致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据 明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。HIV-1和 HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFD HIV-1/2 PA），已经我国食品药品监督管理局（SFDA） 注册批准。 • 斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）：以硝酸纤 维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为 固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应 时间在10 min以内，使用抗原量少。
其他简便快速的HIV检测方法
• 艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜上
包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原， 可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体， 原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的 HIV IgA与IgG抗体，敏感性特异性与ELISA 相近，可避免静脉穿刺。
几种常规HIV抗体检测方法的比较
HIV简介
• HIV是HIV感染者及艾滋病（AIDS）的病原 体，主要通过性接触和体液传播，HIV主要 侵犯和破坏辅助性T淋巴细胞（CD4+T淋巴 细胞），使机体细胞免疫功能受损，最后 并发各种严重的机会性感染和肿瘤。 • HIV可分为HIV-1和HIV-2两个型，均为单链 RNA病毒。前者分布广泛，后者主要局限 于非洲某些国家和地区。
其他简便快速的HIV检测方法
• 斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验： 与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。 区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色 的胶体金（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作 为洗涤方法。试剂稳定，可室温长期保存。 试验时不需任何设备，迅速、简便、特异 性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA， 适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目 前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口 试剂和国内产品。一般可在1030min内判 读结果。
HIV抗体检测的目的
• HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 • 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染 率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括 各类高危人群和一般人群。 • 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状 况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、 术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 • 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播 HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆 筛查。
HIV抗体检测的要点
• • • • 筛查试验阳性不能出阳性报告。 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 严格按照试剂盒说明书操作。 注意防止样品间交叉污染。
常规HIV抗体检测的方法
• HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检） 和确认试验。 • HIV抗体检测筛查试验 • 筛查试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注 册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐 使用经临床质量评估敏感性高和特异性强的试剂。 • 筛查方法：常用的筛查方法是酶联免疫试验 （ELISA）。目前国内外主要使用第三代（双抗 原夹心法）试剂，第四代ELISA HIV抗原抗体联 合测定试剂已在有些国家和地区用于血源筛查， 同时检测抗原抗体，可将检出时间提前4~9.1d， 有利于降低血源筛查的残余危险度。
HIV简介
• 人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原， 然后很快消失直到疾病后期才重新出现。 几周后出现IgM抗体并很快消失，此后IgG 抗体出现并一直存在。HIV感染的实验室诊 断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检 测为辅，后者要求高，仅限于某些研究实 验室中进行。
HIV简介
• HIV-抗体检测分为筛查试验和确认试验两 种，筛查试验为阳性的血清必须进一步确 认，确认为阳性的方可报告HIV抗体阳性。 • 筛查试验的要求是敏感性高，理论上要求 达到100%（97%--99%），尽可能避免漏 掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性 （99%）要求不是太高，允许有少量假阳 性，这些假阳性可以通过重复检测和确认 试验排除。
几种常规HIV抗体检测方法的比较
• 在感染早期，IgM抗体出现时第三代、第四 代ELISA、PA、胶体硒方法优于WB，而在 方法学上，硒标的敏感性要低于第三代、 第四代ELISA和PA。 • 因此，当两种筛查试验均阳性或一阴一阳 而WB阴性时，不能轻易报告阴性，要同 WB不确定反应一样，至少随访6个月，以 防漏检。建议将WB和胶体硒法检测的“窗 口期”至少定为6个月。
第三代 ELISA 第四代 ELISA PA 胶体硒 WB
检测的是总抗体， 第四代ELISA可同 时检测P24抗原 P24抗原 感染早期 消失、抗 P24抗原 体产生时 出现时敏 敏感性高 感性高
主要包括IgM、 IgG抗体 操作方便 易行，敏 感性特异 性均可
Biblioteka Baidu
IgG抗体
敏感性低 IgG抗体 于第三代、 出现时特 异性高 第四代 ELISA和 PA
HIV抗体检测适用范围
• 适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制 机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生 保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS病人 的诊断、报告和处理的实验室依据。
HIV抗体检测实验室
• 应符合《全国艾滋病检测工作规范（2004 年第二检测版）》中对检测实验室人员、 建筑设施和设备等条件的要求。 • 应符合《实验室 生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室 （BSL-2）的各项要求。 • 实验室的质量保证和实验室安全防护按 《全国艾滋病检测技术规范》规定执行。
HIV抗体筛查检测流程
样 品 筛查试剂
初筛检测
阳性反应 阴性反应
原有试剂加另外一种筛查试剂
重复检测
均阳性反应
一阴一阳
均阴性反应
送确认实验室确认
报告阴性
HIV抗体初筛试验
• 实验准备：将试剂和样品放置在室温(20℃)平衡, 按实验室SOP做好试剂准备。 • 实验操作 ：按试剂盒说明书以及质控和安全防护 要求进行筛查检测。 • 实验结果 ：NC、PC符合试剂盒实验成立的条件， Cut off值 = 阴性对照均值 + C，小于Cut off为阴 性，大于或等于Cut off为阳性。 • 报告：对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实 验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样 品，须进行复检，不能出阳性报告。
其他简便快速的HIV检测方法
• 明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检 测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒 作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般 为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原 致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据 明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。HIV-1和 HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFD HIV-1/2 PA），已经我国食品药品监督管理局（SFDA） 注册批准。 • 斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）：以硝酸纤 维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为 固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应 时间在10 min以内，使用抗原量少。
其他简便快速的HIV检测方法
• 艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜上
包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原， 可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体， 原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的 HIV IgA与IgG抗体，敏感性特异性与ELISA 相近，可避免静脉穿刺。
几种常规HIV抗体检测方法的比较