活体生物发光成像技术PPT课件

collected lung, brain, heart, liver and ovaries on D30. HE
staining.
.
4
实验过程
结果1：裸鼠皮下移植瘤模型的建立
.
5
实验过程
结果2：SCID鼠静脉移植瘤模型的建立
.
6
实验过程
结果3： A549及A549-luc细胞原位成瘤及转移 能力的病理形态学观察
标记原理
➢ 氧化反应：Fluc基因整合到细胞染色体DNA上以表达荧光 素酶，当 外源（腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素 (luciferin)，即可在几分钟内产生发光现象。
➢ 反应条件：ATP, O2。 ➢ 光的强度与标记细胞的数目线性相关。 ➢ 分子生物学克隆技术：基因插入——单克隆细胞筛选——
稳定表达细胞株。
建立移植瘤模型 (A549/A549-luc)
➢裸鼠皮下移植瘤模型：nude mice, 6-7 w, 20±2 g, female;
5×106 /200 μl PBS; n=3; 150 μl /只(30 mg/ml), i.p., 10-25
min 后活体成像;QWK, 4 w。
➢SCID鼠尾静脉移植瘤模型：SCID mice, 6-7 w, 20±2 g,
活体生物发光成像技术
——A549-luc小鼠肺癌移植瘤模型
武烨
2011.06.16
.
1
活体生物发光成像技术 (Optical in vivo Imaging)
生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence); 荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA; 荧光报告集团(GFP, RFP, Cyt及dyes等)进行标记。
荧光照相机(charge coupled device camera, CCD camera) 及其分析软件和作为报告子的荧光素酶(lsuciferae)和 荧光素(luciferin)组成。
优点： • 无创性； • 可多次重复在不同时间点检测； • 快速扫描成像； • 实验动物整体成像。
.
2
技术原理
皮下瘤HE(20×)
.
7
实验过程
结果3： A549及A549-luc细胞原位成瘤及转移
能力的病理形态学观察
尾静脉接种模型脏器HEwenku.baidu.com20×)
.
8
谢谢
.
9
female.; 5×106 /200 μlPBS; n=3; 150 μl /只(30 mg/ml), i.p.,
10-25 min 后活体成像;Q3D, 4 w。
➢原位成瘤及转移观察：S.C. mice will be euthanized and
collected tumor on D26; i.v. mice will be euthanized and
光学原理
➢ 检测波长范围：400-950 nm荧光 ➢ 最少可检测到皮下500个细胞 ➢ 相同深度检测到发光强度和细胞的数量有较好的线性关
系
.
3
实验过程
构建单克隆细胞株A549-luc
➢Pgl4.17[luc2/neo]质粒转染人非小细胞肺癌细胞株A549 ➢筛选抗性细胞及单克隆化 ➢获得稳定表达荧光素酶的A549-luc细胞