金霉素工艺

金霉素的生产

摘要： 本文主要是阐述金霉素的生产过程 以及其结构和性质 和一些金霉素在生产过程中的工艺控制要点。关键词 金霉素 氯四环素 金色链霉菌 发酵 发酵液预处理 精制本品抗菌谱与四环素相似 对革兰氏阳性球菌 特别是葡萄球菌、肺炎球菌有效。因为副作用大 目前只外用 用于治疗结膜炎、沙眼。又称氯四环素。【英文/拉丁名称】Chlortetracycline 氯四环素 Aureomycin

【化学名】6一甲基-4-(--甲氨基)-3 6 10 12 12a-五羟基一1 11一二氧代一7一氯一1 4 4a 5 5a 6 ii 12a-八氢一2 并四苯甲酰胺酸酸盐。

【分子量】478.89

【分子式】C22H23ClN2O8

【性状】本品为金黄色或黄色结晶 无臭 味苦 遇光色渐变暗。

【药理作用】★本品属四环素类药物 主要抑制敏感微生物的蛋白质合成。其抗菌谱广 对革兰阳性菌、阴性菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体、部分原虫等均可抑制。★金霉素主要与微生物的30S小亚基A位结合 进而干扰氨基酰tRNA 与30S小亚基结合 使氨基酰tRNA不能进入mRNA上的受位 抑制了蛋白质合成时肽链的延长 金霉素还可以阻止已合成的蛋白质肽链释放。★金霉素对70S 核蛋白体的作用更为敏感 因此 金霉素能够选择性抑制敏感微生物 具有良好的安全性能。

【药代动力学】本品为局部用药 全身很少吸收。

【禁忌证】有金霉素药物过敏史者 有四环素类药物过敏史者禁用本品。

【不良反应】轻微刺激感。偶见过敏反应 出现结膜充血、眼痒、水肿等症状。应用时耐药菌株可过度生长。

【注意事项】①对本品过敏者禁用 过敏体质者慎用 ②本品不宜长期连续使用 使用5日症状未缓解 应停药 ③若出现充血、眼痒、水肿等症状 应停药。

【贮藏】密闭 在干燥阴凉处保存。

1.生产菌种

金色链霉菌9647

斜面及平板分离培养基（%）： 麸皮3.0。琼脂2.0 磷酸氢二铵0.05 磷酸氢二钾0.02 硫酸镁0.03 消前ph6.3~6.5。种子培养基 % 玉米淀粉4.0 花生饼粉2.0 蛋白胨0.5 酵母粉0.6 硫酸镁0.03 硫酸铵0.03 氯

化钠0.4 碳酸钙0.4 磷酸二氢钾0.03 淀粉酶0.5 油0.1消前ph6.3~6.5 发酵培养基 % 玉米淀粉6.5 玉米粉2.0 花生饼粉3.5 蛋白胨0.5 酵母粉0.5 硫酸镁0.03 硫酸铵0.03 氯化钠0.3 碳酸钙0.6 磷酸二氢钾0.01 淀粉酶0.5 油0.1消前ph6.3~6.5 斜面及平板培养条件 培养温度33，相对湿度45%~65% 培养4~5d

2.种子制备

种子培养条件：培养温度31，相对湿度45%~65%，摇瓶装量30ml/250m 三角瓶，摇床转速280r/min，培养28h 。

发酵培养条件：培养温度31，相对湿度45%~65%，摇瓶装量30ml/250ml 三角瓶，摇床转速280r/min，接种量25%，培养5d 。

3.发酵

30L小试发酵罐培养条件：培养温度29~31，通气1:1（vvm）， 罐压0.03Mpa 搅拌转速400 r/min，接种量25%，培养5d

100立方米发酵罐培养条件：培养温度29~31 通气1:0.8（vvm） 罐压0.03Mpa 搅拌转速125r/min 接种量25% 培养5d

补料控制：在发酵培养12h左右，当总糖低于5.5%时开始补料，发酵培养12h~48h，控制总糖浓度 5.5%~3.5%，发酵培养49h~100h，控制总糖浓度3.5%~2.0%，发酵培养49h~100h，放罐控制总糖浓度2.0%~1.5%。当ph在5.8时自动补入氨水，控制ph在5.8左右。

流加补料：依据发酵液中还原糖的含量和补料糖的浓度 设定每小时的补料量 以匀速自动补入 控制还原糖浓度1.0%以上。

分批补料：依据发酵液中还原糖的含量和补料糖的浓度 采取每隔6h补料一次 控制还原糖浓度1.0%以上。

总糖和还原糖的测定：菲林试剂发

氨基氮的测定：甲醛法

菌丝浓度的测定：去发酵液10ml于离心沉淀管中，在2500r/mi测沉淀物在发酵液中的比例即得菌丝浓度

发酵效价的测定：分光光度法

ph的测定：用ph电极测定

生产工艺流程

孢子培养孢子培养种子培养

沙土孢子——————> 母瓶斜面孢子——————> 生产斜面孢子—————> 36摄氏度，5d–7d36摄氏度，5d–7d 30–32摄氏度，

1:15V/（V*min）

24–28摄氏度发酵

种子培养液—————> 发酵液

1:0.5V/（V*min）

155—180h

4.提取与精制

可采用沉淀法 溶剂萃取法或离子交换法提取。

发酵液预处理

酸化过滤成复盐

发酵液———————————> 酸性滤液———————————> 加2﹪草酸，再用Hcl调加CaCl2 0.07﹪，MgCl20.16﹪—0.3﹪，PH1.2，硫酸、黄血盐各加用氨水调PH7.5—7.8/CaCO3

0.1﹪—0.2﹪

一次转盐酸盐

金霉素钙镁复盐——————————— > 粗品

20﹪乙醇，11﹪Hcl，

47—49摄氏度，保湿1h

精制

溶解二次转盐酸盐

粗品——————————> ——————————> 金霉素盐酸盐结晶加8 氯化镁的乙醇 加18﹪—24﹪Hcl

氨水调PH6.7 40—45摄氏度 保湿1h

效价10万u∕ml

分离洗涤气流干燥

——————————> 湿晶体————————— > 金霉素盐酸盐成品

用1：2热水（40摄氏度） 进风湿度100摄氏度一下

洗涤 再用1:2乙醇洗涤出风湿度40摄氏度以下

60目过筛

参考文献

陈电容 朱照静主编.生物制药工艺学.人民卫生出版社,2009.02. 顾觉奋主编.抗生素.上海科学技术出版社,2001年09月第1版. 宋金春等主编.抗微生物药物学科学出版社,2010.10. 唐仕波 唐细兰编著.眼科药物治疗学.人民卫生出版社,2010.04. 俞俊棠 唐孝宣。生物工艺学（上下册）。上海华东工学院出版社1991,82（下）53（上）