脱病毒植株检测技术

酶联免疫鉴定法（ELISA）
含义：酶联免疫法是指采用酶标记抗原或抗体的定 量测定法(过氧化物酶或碱性磷酸酶) 。 间接法、双抗体夹心法、抗原竞争法 捕获包被法
间接法
⑴将特异性抗原与固 相载体连接，形成固 相抗原 ⑵加稀释的受检血清 ⑶加酶标抗抗体 ⑷加底物显色
四、核酸检测法
1.双链RNA法 通过提取纯纯化待测植物RNA，并对其进行 电泳分析，可确定双链RNA存在，从而判断待检 植物是否带病毒。 2.互补DNA（c DNA）检测法 也叫DNA分子杂交法，核酸分子杂交（用放射 性同位素（如32P）或生物素标记分子探针）。
汁液涂抹法
①采取汁液 在被鉴定植物上取1－3g幼叶， 在研钵中加入水及少量0.1mol/L磷酸缓冲 液（PH7.0），研碎过滤，再在汁液中加 入少量的金钢砂（摩擦剂）。 ②接种 用棉球蘸取汁液在指示植物叶面 上轻轻涂沬2－3次，后用清水冲洗叶面。 ③培养 在防蚜虫温室内培养，15－25 ℃ ，2－6天观察病症。
木本指示植物鉴定方法
木本多年生果树及草莓等无性繁殖的草本植物， 采用汁液接种法比较困难，则通常采用嫁接接种 的方法。以指示植物作砧木，被鉴定植物作接穗， 可采用劈接、靠接、芽接等方法嫁接，其中以劈 接法为多。
三、抗血清鉴定法
植物病毒作为抗原，给动物注射后会在血 清之中产生的抗体称抗血清。抗原与抗体间能 发生高度专一性的血清学反应（免疫反应）。 这样就可用已知抗血清可以鉴定未知病毒的种 类，是目前最有用的方法之一。 特点：特异性高，测定速度快。 方法： 1）抗原的制备 2）抗血清的采收，分离 3）将抗血清与待测植物组织液混合。 4）鉴定 凝聚反应。（酶联免疫法最常用）
五、电镜观察法
借助于电子显微镜能分辨0.5μm大小的病毒 颗粒,采用电子显微镜既可以直接观察病毒，检 查出有无病毒存在，病毒颗粒的大小、形状和 结构，又可以鉴定病毒的种类。这是一种较为 先进的方法。 优点:是灵敏度高和能在植物粗提取液中定 量测定病毒 超薄切片技术 负染色技术 免疫电镜技术
脱病毒植株的检测技术
一、直接观察法（非潜隐性病毒的鉴定）
二、指示植物法
概念：指示植物法就是利用病毒在其他植物 上产生枯斑作为鉴别病毒种类的方法。 特点：条件简单，操作方便，经济而有效， 它只能鉴定靠汁液传染的病毒，只能测出病毒的 相对感染力。
(1)草本指示植物鉴定方法 1）汁液涂沫法 ）小叶嫁接法 (2)木本指示植物鉴定方法 1）直接在指示植物上嫁接待检植株的芽片 2）双重芽接法 3）双重切接法