培养基制备的基本方法和注意事项 (2)
实验一 培养基的制备
实验一培养基的制备一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。
（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。
二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。
牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。
三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
(二)其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，台称。
四、操作步骤（一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。
（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。
加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。
溶好后，补足所需水分。
（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。
（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。
（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。
1．液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。
2．固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。
分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。
3．半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。
培养基的制备
注意事项：1、压力适当； 2、无菌条件下进行； 3、防止渗透现象。
辐射灭菌：
原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以
265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可 产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成 正比。
曲霉属
青霉属
几种常见霉菌
主要特征
分布
作用与用途
菌丝无隔,单细胞 常长在淀粉类食 迅速蔓延,有假根, 品上如馒头、面 孢子囊呈黑色,产 包、甘薯等
生孢子囊和接合 孢子
能将淀粉转化为 糖，用于生产糖 化酶，酿造甜酒
等
菌丝分隔，分生 空气、谷物、土
孢子梗顶端膨大， 壤和各种有机物
顶囊上生辐射状
上
小梗菌落疏松、
步骤： 1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查氏 培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养 基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。 2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在三 角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中， 以此类推，制成不同稀释度。 3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用 无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸 取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。 4、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养35days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。
观察菌落形态并记录
序号 来源 大小 形状 边缘 颜色 表面 代谢物 种 类
制备培养基的操作要点和注意事项
制备培养基的操作要点和注意事项制作培养基就像微生物实验室的家常便饭，培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，培养基由于富含营养物质，易被污染或变质，配制过程中有多个注意事项和操作要点需要我们掌握。
一、什么是培养基？培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
二、培养基的种类。
培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。
三、培养基配制须知。
培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。
培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。
配好后不宜久置，最好现配现用。
四、玻璃器皿的清洗在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。
这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。
有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。
1新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。
2用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。
微生物培养及实验基本操作技术
微生物培养及实验基本操作技术一、培养基配制培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。
配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。
注意事項–灭菌锅的使用①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門進入灭菌锅之物品，蓋子不可關太緊或太鬆拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套培养基中的主要成分及其作用：营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油）水：用蒸馏水，不能用自来水凝固剂：琼脂、明胶、血清等抑制剂：1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率2、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素指示剂1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。
2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。
培养基的类型：●根据培养基的物理状态来区分：1、液体培养基：主要用于增菌培养、鉴别性培养2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。
●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。
●根据培养基的用途来区分：➢增殖培养基选择培养基鉴别培养基1、增殖培养基：在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。
培养基制备
一、玻璃器皿的清洗在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。
这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。
有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用1、新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。
2、用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。
若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。
洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。
洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。
二、培养基的类型在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media).由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。
我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分，可以将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
1天然培养基天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。
用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。
用这些物质配成的培养基虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛，而且来源广泛，配制方便，所以较为常用，尤其适合于配制实验室常用的培养基。
培养基的配制 (2)
培养基的配制简介培养基是在实验室中广泛使用的一种生物学培养材料，它提供了生长微生物和其他细胞的所需营养物质和理想的环境条件。
培养基的配制是制备培养基的过程，通过合理的配比和操作，可以获得高质量的培养基。
培养基的组成培养基的组成是根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求来确定的。
一般来说，培养基由以下几个组分组成：1.碳源：提供微生物或细胞生长所需的碳质物质，常见的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等。
2.氮源：提供微生物或细胞生长所需的氮质物质，常见的氮源有氨基酸、尿素、氯化铵等。
3.磷源：提供微生物或细胞生长所需的磷质物质，常见的磷源有磷酸二氢盐、磷酸氢二钠等。
4.硫源：提供微生物或细胞生长所需的硫质物质，常见的硫源有硫酸铵、硫酸钠等。
5.微量元素：为微生物或细胞提供必需的微量元素，如铁、锰、锌等。
6.维生素：提供微生物或细胞生长所需的维生素，如维生素B群。
7.pH调节剂：维持培养基的理想pH值，如磷酸盐缓冲液。
8.凝胶剂：使液态培养基凝固成凝胶状，常用的凝胶剂有琼脂和洋菜。
培养基的配制步骤1. 准备所需实验器材和试剂在开始培养基的配制之前，需要准备好所需的实验器材和试剂。
常见的实验器材包括量筒、烧杯、移液管、培养皿等；试剂包括碳源、氮源、磷源、硫源、微量元素、维生素等。
2. 确定培养基组成根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求，确定培养基的组成，并计算各组分的配比。
3. 配制培养基按照确定的配比，依次称取所需试剂并溶解于适量的去离子水中，然后使用量筒或烧杯调整总体积。
4. 调节pH值使用pH计测量培养基的pH值，并根据需要使用适当的酸碱溶液进行调节，直到达到理想的pH值。
5. 凝胶化培养基（可选）如果需要制备凝胶状的培养基，可以在配制好的液态培养基中加入适量的凝胶剂，并在加热过程中充分混合，待其冷却凝固。
6. 灭菌配制好的培养基需要进行灭菌处理，常见的方法有高温灭菌和滤过灭菌。
高温灭菌通常使用高压高温的压力罐进行，滤过灭菌则需要使用0.22微米的滤膜进行过滤。
培养基的制备注意事项
培养基的制备注意事项培养基是细菌、真菌、植物等在实验室中生长繁殖的基础，制备好的培养基质量的优劣直接关系到后续实验的效果。
下面是制备培养基时需要注意的几个方面：1.原料选择：培养基的原料应选择优质的，可能污染的原料要经过严格的消毒处理。
一般情况下，培养基的基本成分有蛋白质源、碳源、氮源、矿物质盐和水。
一般可以选择酪蛋白、蛋白胨、肉蔻蛋白、玉米粉、葡萄糖、蔗糖、硝酸铵等。
2.无菌操作：培养基制备的过程中需要进行无菌操作，以免杂菌的污染。
在实验室的流水槽和工作台上进行消毒，使用一次性无菌胶手套、面罩和无菌吸管等。
还需要准备好高压蒸汽锅和高压反应釜来进行高温高压灭菌，以杀死培养基中可能存在的微生物。
3.配制方法：按照实验要求，将不同的成分按照一定比例配制成培养基。
在配制过程中，需要掌握好各种成分的化学性质和操作方法，在配制过程中遵循标准的步骤和操作规程，严格控制各种成分的加量和质量，确保培养基的稳定性和可靠性。
4.调节pH值：培养基pH值的调节是培养基制备中必不可少的一个步骤。
不同的微生物对pH值有不同的要求，一般细菌和真菌的培养基pH值在6-8之间比较适宜。
可以使用pH计或酸碱滴定法来进行准确的pH值测定和调节。
5.灭菌方法：经过上述步骤制备好的培养基需要进行灭菌处理，以杀死培养基中可能存在的微生物。
常用的灭菌方法有高温高压灭菌、滤器灭菌、化学灭菌等。
灭菌的时间和温度要掌握好，以避免对培养基成分的破坏。
制备培养基需要严格按照操作规程进行，注意消毒、无菌操作、配制比例、pH调节和灭菌等环节。
只有优质的培养基才能够提供良好的生长环境，确保实验的准确性和可靠性。
实验教案 培养基的制备
实验一培养基的制备一目的要求1 明确培养基的配制原理2 通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤二基本原理不同培养基中含有不同的微生物生长所需要的营养物质，其可供微生物生长繁殖用，为微生物提供C源、能源、N源和维生素。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96度溶化，实际应用时，一般在沸水中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免烧焦，琼脂在40度时凝固，通常不被微生物分解利用，固体培养基中琼脂含量根据琼脂的质量和气温的不同有所不同。
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏：3.0g,蛋白胨10.0g,NACl5.0g,水1000ml,pH 7.2-7.4.马铃薯培养基是霉菌的基本培养基，培养基配方如下：马铃薯100g 蔗糖10g 琼脂10g 水500ml pH 自然三器材：1试剂或溶液：马铃薯、蔗糖、琼脂、蒸馏水。
2仪器或其它用具：试管、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平、牛角勺，纱布、麻绳、牛皮纸、高压灭菌锅四操作步骤1称量：依次称取马铃薯块、蔗糖、，切碎的琼脂放入三角瓶中并加入500ml蒸馏水2 把三角瓶放入锅中，锅盖好后放在电热炉上加热，等琼脂溶解后取出三角瓶3过滤：趁热用多层纱布过滤，去除里面的杂质4分装：将配制好的培养基分装入试管。
5加塞：分装完后在试管口塞上塞子，以阻止外界微生物进入培养基造成污染，并保证有良好的勇气性能。
6包扎：用牛皮纸再包扎瓶口，以防灭菌时弄湿棉塞。
7灭菌：用高压蒸汽锅在0.1MP下灭菌20min8搁置斜面：趁热将试管里的培养基斜面，注意斜面的长度大约为试管长度的1/29无菌检查五：注意事项1培养基配制后，必须立即灭菌2分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾在塞子上而引起污染实验二革兰氏染色法一目的要求1学习并初步掌握革兰氏染色法2了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性二基本原理革兰氏染色法是1884年丹麦病理学家christain Gram 创立的而后作了些改进，革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
常用细菌培养基制备及注意事项
常用细菌培养基制备及注意事项细菌培养是生物学研究中一种重要的实验技术。
精准的细菌培养技术，可以让我们快速、准确地获得细菌样品，方便细菌的种类鉴定和活性测定。
因此，熟练掌握细菌培养基制备及其使用方法及注意事项，对于生物学研究来说是非常重要的。
一、常用细菌培养基的分类常用的细菌培养基可以分为两大类：标准培养基和特殊培养基。
标准培养基由四种基础成分构成，即营养源、碳源、离子源和碱源，重点是碱培养基。
标准培养基可以满足一般细菌的培养需求，但对于某些特殊细菌而言，可能不够充分，这时就需要特殊培养基。
特殊培养基是根据细菌的特殊需求而设计的，它可以弥补标准培养基的不足。
二、细菌培养基的制备1、准备培养基的原料首先，我们需要根据配方准备好必要的原料，比如，营养源、碳源、离子源，以及其他必要的调味料。
2、将原料进行混合然后，将所有原料放入容器中，使用搅拌器混合成细菌培养基溶液，以防止原料结块。
3、细菌培养基灭菌接下来，需要对混合好的细菌培养基进行灭菌处理，以杀灭所有混入的细菌菌株，避免对样品的污染。
一般采用蒸馏水或甲醛的方法进行灭菌处理。
4、灭菌后的细菌培养基存储至此，细菌培养基制备完毕，需要将其存放在室温下，避免阳光直射，以防菌种被破坏。
如果长期不用，应将细菌培养基冷藏或冷冻保存。
三、细菌培养基使用注意事项1、实验室清洁卫生实验室在使用细菌培养基时，应当保持良好的清洁卫生，以免在实验过程中污染样品。
2、实验前样品处理在实验前，应对样品进行必要的处理：将溶液过滤，以去除杂质；对固体样品进行消毒，以免被细菌污染。
3、避免污染在使用细菌培养基时，要谨慎操作，以避免被污染；操作过程中，应尽量避免气流，以减少培养基中的细菌数量；在使用细菌培养基后，要及时将容器盖好，以免空气中的微生物进入容器。
四、总结细菌培养基是实验研究中一种重要的实验技术，需要科学准确地进行制备和使用。
常用的细菌培养基可以分为标准培养基和特殊培养基。
细菌培养基的制备包括准备原料、混合、灭菌和存储等步骤。
培养基制备的基本方法和注意事项
培养基制备的基本方法和注意事项培养基是一种供细胞、微生物或生物组织生长和繁殖的营养物质，其质量和配方对于实验结果和研究成果具有重要影响。
因此，制备培养基需要遵循一定的基本方法和注意事项，以确保培养基的质量和稳定性。
制备培养基的基本方法如下：1.选择适当的培养基配方：根据所需培养的生物种类和特性选择相应的培养基基础配方。
培养基的基础配方包括有机质（例如葡萄糖）、无机成分（例如氮源和磷源）、微量元素（例如铁、锌）和水。
此外，还可以根据具体需求添加其他成分，如胶凝剂（例如琼脂）以增加培养基的凝固性。
2.准备培养基底液：根据配方计算所需的各种成分和浓度，称取适量的试剂或粉末，并将之溶解于蒸馏水或去离子水中，得到培养基底液。
在溶解试剂时，需要使用无菌的器皿，并严格遵守操作无菌的原则。
3.调节pH值：使用pH计测量底液的pH值，根据所需的pH值，可添加酸或碱溶液调节pH值至目标范围。
在添加酸碱溶液时，需要慢慢滴加并充分搅拌，以确保底液的均匀混合。
4.高温高压灭菌：将调节好pH值的底液倒入无菌容器中，并用瓶塞或锡纸密封，然后进行高温高压灭菌，一般为121摄氏度下压力为15磅/平方英寸的条件下加热15-20分钟。
5.加入敏感成分：准备好的底液冷却后，再添加一些抗生素、酶、激素或其他敏感成分，以满足特定实验或培养要求。
注意事项如下：1.操作无菌：制备培养基的过程中，必须严格遵守无菌的操作规范，使用已经通过高温高压灭菌的器皿和工具，以防止细菌、真菌或其他微生物的污染。
2.准确称量：选择可靠的称量器具，准确称取各种试剂和粉末的重量，以确保培养基的配方准确。
3.避免污染：在进行培养基制备时，避免将细菌或其他微生物污染带入培养基中。
为此，需要在制备前彻底清洁和消毒培养器具和工具。
4.及时凝固：当培养基底液制备好后，应尽快将其灌装入无菌容器中并密封，以免受到外界微生物的污染。
5.合理储存：制备好的培养基应放置在干燥、阴凉、避光的地方，并储存在无菌容器中。
制备培养基的操作要点和注意事项
制备培养基的操作要点和注意事项一、制备培养基的操作要点：1.熟化培养基：将适量的培养基用蒸馏水溶解，装入宽口烧瓶或容器中，用布覆盖并进行高压灭菌。
熟化培养基时需要使用高压灭菌器，确保培养基中的细菌等微生物被完全杀灭。
2.添加营养物质：根据所培养的微生物需要的营养物质，将适量的蛋白胨、葡萄糖、矿物盐等溶解于培养基中，并用蒸馏水调整pH值。
注意在添加营养物质时，要根据目标微生物对其需求的了解，以确保培养基中包含了所有必需营养物质。
3.混匀均匀：搅拌培养基时要保持匀速和均匀，避免产生泡沫和液面的震荡。
混匀均匀有助于营养物质的均匀分布，提高细菌等微生物的生长率。
4.测定pH值：培养基的pH值是细菌生长的重要因素之一，通常在6.5-7.5之间。
使用酸碱度计准确测定培养基的pH值，并根据需要进行调整。
过高或过低的pH值都可能影响细菌生长。
5.灭菌：培养基中的细菌、真菌等微生物会影响到目标微生物的生长和繁殖。
因此，在熟化后要进行灭菌处理，常用的方法有高压灭菌、过滤灭菌和化学灭菌等。
在灭菌的过程中要注意操作的严谨，确保培养基中不存在任何的污染源。
6.储存：制备好的培养基在灭菌后，应放置于干燥、阴凉通风处，避免阳光直射。
同时要注意储存方式，避免出现倒置、倾斜等情况，防止培养基发生泄漏。
二、制备培养基的注意事项：1.空气污染：在制备培养基的过程中，要保持操作地点的清洁和物品的无菌状态，避免空气中的细菌、真菌等污染源进入到培养基中。
2.器皿消毒：使用前需要对容器、烧杯、移液器等器皿进行充分消毒，避免残留有杂菌或有机物质。
3.营养物质选择：根据目标微生物的需要，选择合适的营养物质添加到培养基中。
要了解目标微生物对营养物质的需求，合理添加。
4.pH值调整：细菌对pH值的敏感度较高，因此需要精确调整培养基的pH值。
同时，注意pH值的稳定性，避免因为培养条件不合适而引起pH值的变化。
5.消毒处理：在制备培养基、添加营养物质等操作中，要对使用的器械进行彻底的消毒处理，以保证培养基的无菌状态。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项培养基是细菌、真菌、细胞等微生物进行繁殖和培养的营养地，广泛应用于微生物学和生物技术领域。
下面将介绍几种常用的培养基的制备方法及注意事项。
1.琼脂培养基：琼脂培养基是最常见的一种培养基，它以琼脂凝胶为基质，通过加入不同的营养成分，满足微生物的生长需求。
制备方法如下：1）称取适量琼脂，加入适量蒸馏水中搅拌均匀。
2）加入适量皂液，加热融化琼脂。
3）待琼脂溶液冷却至40°C左右时，加入已经制备好的培养基成分，如碳源、氮源、维生素等。
4）搅拌均匀，调整pH值，加热煮沸。
5）倒入装有适量培养基的培养皿中，使其凝胶化。
注意事项：1）使用较干燥的琼脂可减少湿润时间。
2）煮沸或加热时间不宜太长，以免过度加热导致一些营养成分失活。
3）制备过程中要注意无菌操作，避免细菌等微生物污染。
2.液体培养基：液体培养基适用于微生物的扩大培养、动态研究等实验。
制备方法如下：1）称取适量蒸馏水，加热至沸腾。
2）加入培养基成分，如碳源、氮源、维生素等，搅拌均匀。
3）调整pH值，加热至沸腾。
4）倒入试管或烧杯中，用胶塞或铝箔盖好。
注意事项：1）加热过程中要注意及时搅拌，避免成分沉积或变色。
2）制备前要将试管或烧杯等容器进行高温灭菌处理。
3）使用培养基前要进行菌液均匀混合，避免因成分沉积而导致的营养不均匀。
3.固体选择性培养基：固体选择性培养基是指根据微生物对特定组分的感受性选择性地制备的培养基。
制备方法如下：1）制备好的琼脂培养基加热至融化，放置冷却至40°C左右。
2）加入特定的抗生素、色素或指示剂等，搅拌均匀。
3）倒入装有适量培养基的培养皿中，等待凝胶化。
注意事项：1）特定抗生素或其他抑菌剂的添加量需要谨慎，过量添加可能抑制需要培养的微生物。
2）搅拌均匀时，应快速且均匀，以避免导致混合不均。
3）固体选择性培养基凝胶化后，尽量避免暴露于空气中，以免细菌等微生物的污染。
以上所述的常用培养基只是其中的一部分，不同微生物的培养要求不同，制备方法也有所差异。
配制培养基的注意事项
配制培养基的注意事项原料选择：1.选用优质的原料：建议使用经过质量检测并有良好口碑的产品。
原料的质量直接影响培养基的成分和性能。
2.蒸馏水：使用纯净的蒸馏水或高纯度的去离子水来制备培养基。
这些水源要经过过滤和消毒，以消除灰尘、微生物和有机物质的污染。
3.试剂保存：培养基试剂应储存在干燥、阴凉、避光的地方，并按照说明书上的要求保存。
称量与配制：1.精确称量：使用准确的天平和干净的容器称量试剂。
误差不超过0.01克。
避免直接用手接触试剂，以免造成污染。
2.排出氧气：气泡会影响培养基成分的配制。
将粉末媒体慢慢添加到容器中时，应避免产生大气泡。
可以采用研磨或过筛的方法，确保试剂均匀分散。
3.温度控制：一些试剂与水（或其他试剂）反应时会生成热量，可能导致培养基的温度升高。
在制备过程中需密切关注培养基温度，避免过热或局部沸腾。
消毒与灭菌：1.装瓶消毒：将培养基装入瓶中之前，瓶子和瓶盖必须进行高压蒸汽灭菌或干热灭菌。
瓶子和盖子的灭菌时间和温度根据需要的培养基配方和规范而定。
2.单独装瓶：每瓶装培养基时，要采取严格的无菌操作。
避免培养基的交叉污染，每瓶装培养基前，对瓶口用酒精消毒，待酒精挥发后再装。
3.培养基灭菌：装瓶后，将培养基高压灭菌（121°C，15分钟）或蒸汽灭菌（121°C，20分钟）确保培养基的无菌性。
贮存与使用：1.不超时：配制好的培养基应在规定的时间范围内使用，避免过期使用，以确保培养基的质量和无菌状态。
2.适当储存：未用的培养基应储存在低温干燥的地方，通常为4°C。
避免阳光直射和潮湿环境，以防止培养基的变质。
3.温度适宜：在培养细菌或其他微生物时，应根据菌种的需求，在适宜的温度下保存和孵育培养基。
温度过高或过低可能导致微生物的生长受限。
以上是配制培养基的一些注意事项。
合理遵守这些注意事项能够提高培养基配制的成功率和培养实验的可靠性。
同时，无菌操作也非常重要，以防止培养基的污染和实验结果的干扰。
微生物实验
实验一、培养基的制备和消毒灭菌培养基的配制1.培养基：人工配制的供微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的营养基质。
2.培养基的配制原则（1）目的明确：不同微生物所需营养基质不同，配制培养基的目的也有不同。
（2）营养协调：营养成分的比例和浓度要适当。
（3）理化适宜：渗透压、pH和氧化还原电位。
（4）经济节约。
实验步骤---斜面培养基的制备和灭菌计算→称量→加热溶化→调pH →过滤（可省略）→分装→加塞（附棉塞制作）→包扎(皮筋或绳子)→灭菌→摆斜面→无菌检查。
1.称量按照配方，准确称量各成份放于烧杯中。
对于不是粉状药品（如牛肉膏），应用烧杯和玻璃棒称量。
2.配制（1）向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。
（2）如果配制固体培养基，在琼脂熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
一般要求琼脂沸腾3次，完全熔化后，补足所失水分。
3.调节pH值培养基溶解后，用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1M HCl和1M NaOH），要缓慢少量且多加搅拌。
培养基配方为自然pH时，不用调节。
4.过滤用滤纸或多层纱布，无特殊要求时可省去。
5.分装（1）将培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。
固体培养基要趁热装。
（2）分装量①斜面：装量为管长的1/5。
②液体培养基：装量为管长的1/4。
③半固体培养基：装载量为管长的1/3。
（3）注意分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。
6.灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。
培养基做完后，要求在2-4小时内灭菌，否则会被污染。
7.摆斜面灭菌完毕，冷却到60℃左右再摆斜面，以免产生过多冷凝水。
配制培养基时注意事项1.称量要准确，取药品的角匙不能混用。
2.加热融化时要不断搅拌，以免糊底和溢出,（每加热30s关掉电源，开盖看一次）。
3.蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速。
5.节约药品。
实验二细菌的简单染色和革兰氏染色革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。
培养基制作过程中的注意事项
培养基制作过程中的注意事项一、介绍培养基是微生物学实验中必不可少的一种实验用品，其制作过程需要注意许多细节。
本文将从培养基配方的选择、制备前的准备工作、制备过程中的注意事项以及制备后的保存和使用等方面进行详细介绍。
二、培养基配方选择在选择培养基配方时，应根据所需菌种的生长特性和营养需求来确定。
通常情况下，菌种的生长条件包括温度、氧气含量、PH值等，而其营养需求则包括碳源、氮源、矿物质等元素。
因此，在确定配方时需要考虑到这些因素。
三、制备前的准备工作1.清洗容器：在制备培养基之前，应首先将所有用具和容器进行清洗，并消毒处理。
2.称量材料：根据所选配方，按照比例准确地称取所需材料。
3.准备水：在制备过程中使用的水应为去离子水或蒸馏水，并进行消毒处理。
四、制备过程中的注意事项1.加热溶解：将所有材料加入容器中后，在加热过程中应注意不要让溶液沸腾，以免影响培养基的质量。
2.调节PH值：在制备过程中需要根据所选配方的要求来调节PH值，一般情况下，PH值应为7.0左右。
3.灭菌处理：在制备完成后，需要对培养基进行灭菌处理。
这可以通过高温高压灭菌或者紫外线照射等方式进行。
五、制备后的保存和使用1.存储条件：制备好的培养基应放置在避光、防潮、干燥的地方，并保持适宜的温度。
2.使用前检查：在使用之前需要先检查培养基是否有异常现象，如变色、凝固等情况。
3.使用时注意事项：在使用培养基时需要注意无菌操作，避免污染。
同时还需根据所选配方来控制好温度、湿度等因素，以保证菌种能够正常生长。
总之，在制备培养基时需要注意到许多细节问题。
只有将这些问题都考虑到并加以解决才能保证培养出健康的微生物菌群。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物培养提供保障。
二、实验原理1. 培养基的制备方法：（1）选用适当的基质：如蛋白胨、肉汤、蔗糖等；（2）添加必需元素：如氮源、碳源、矿物质盐等；（3）调节pH值：使其接近微生物生长最适pH值；（4）加入琼脂：使液态培养基凝固成固态培养基。
2. 灭菌技术：灭菌是指将微生物及其孢子全部杀灭或去除，以保证培养基无菌。
常用的灭菌方法有高温灭菌法和化学药剂灭菌法。
三、实验材料和设备材料：蛋白胨、肉汤、琼脂、氧化钠等。
设备：量筒、天平、自动移液器、恒温水浴器等。
四、实验步骤1. 制备液态培养基：（1）称取所需的蛋白胨和肉汤，按比例混合加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀；（2）调节pH值至7.0-7.2，若pH值过高可加入适量的氧化钠溶液；（3）将制好的液态培养基分装到不锈钢培养皿中，每个培养皿约20ml；（4）将分装好的液态培养基在恒温水浴器中加热至沸腾，持续煮沸10分钟。
2. 制备固态培养基：（1）按照液态培养基制备方法制备好液态培养基；（2）将琼脂加入到液态培养基中，搅拌均匀；（3）将制好的固态培养基分装到无菌试管或无菌平板中；（4）在恒温水浴器中加热至琼脂完全溶解。
3. 灭菌：将制备好的液态和固态培养基放入高压灭菌锅中进行灭菌处理，温度和时间根据不同材料和设备而定。
五、实验结果经过灭菌处理后，制备好的液态和固态培养基均无菌，可以用于微生物培养。
六、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守无菌操作规范，以保证培养基无菌。
2. 制备液态培养基时，要注意加入必需元素的比例和pH值的调节。
3. 制备固态培养基时，要注意琼脂的加入量和溶解度。
4. 灭菌处理时，要根据实验材料和设备选择合适的灭菌方法和时间。
5. 实验结束后，要对实验器材进行消毒处理。
七、实验结论本实验通过制备液态和固态培养基以及灭菌处理等操作，掌握了培养基制备和灭菌技术。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项制备常用培养基的步骤：1.准备所需材料和试剂：包括原材料、化学试剂、水质等。
2.按照配方准备培养基的成分，称取所需质量的每种成分，并放入容器中备用。
需要注意的是，成分的配比应严格按照配方比例进行。
3.取一定容积的纯化水，进行加热和搅拌。
加热需注意温度控制，以避免高温引起成分变性和水的蒸发。
4.将加热的纯化水慢慢倒入容器中的培养基成分中，同时用搅拌器搅拌，以保证成分均匀溶解。
5.溶液温度降至室温后，通过过滤器或高温高压灭菌器对培养基进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。
6.消毒后，将培养基分装到适当的容器中，如试管、琼脂培养皿等，并密封好，以免受到外界的污染。
7.对于固体培养基，添加适量的琼脂、琼脂糖或者琼脂葡萄糖固化成体，用压力灭菌器灭菌。
8.储存培养基要注意避光、防潮和防火，并在相关容器上标明名称、配方和制备日期。
1.成分准确：制备培养基时，需要准确称取每种成分的质量，确保配方比例准确。
不同的微生物和细胞需要不同的营养成分，所以要了解不同微生物和细胞的需求，选择适当的配方。
2.水质净化：培养基的制备需要使用纯化水，如去离子水、超纯水等，以确保水质的纯净。
水质若不符合要求，会影响培养基的质量。
同时，加热时要控制温度，以避免成分变性和水的蒸发。
3.消毒杀菌：培养基在制备完成后需进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。
可以通过过滤器或高温高压灭菌器进行消毒。
消毒过程中要做到严格的操作规范，保证培养基的纯度。
4.容器选择：对于不同的培养基，选择合适的容器也非常重要。
常用的容器包括试管、琼脂培养皿、培养瓶等。
选用容器时要考虑到培养的需求，如气体交换、液体混合等。
5.储存注意：制备完成的培养基需要正确储存，避免光照、潮湿和高温。
同时要在容器上标明名称、配方和制备日期，以便管理和使用。
总结：制备常用培养基需要严格按照配方比例进行，控制水质和温度，并进行消毒处理。
在容器选择和储存过程中也要注意一系列的注意事项，以确保培养基的质量和纯度。
实验2-培养基的制备
实验二微生物培养基的制备一、目的要求1、巩固培养基的配制原理及培养基的理论知识2、掌握培养基制作的基本方法3、熟悉2种常用培养基的制作过程二、实验原理培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。
人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。
把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。
自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。
但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。
此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。
根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。
按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。
根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。
培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的选择配制。
固化体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。
琼脂在95℃的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。
因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。
三、实验器材1、药品琼脂，1N NaOH溶液，1N HCl溶液，牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基的配方药品；2、材料具刻度1000毫升塘瓷盅，铝锅，天平，20×200mm试管，量筒，小烧杯，玻璃棒，骨匙，pH试纸，分装漏斗，试管盒，纱布，棉花，报纸，麻绳，标签。
培养基制备的基本方法和注意事项
培养基制备的基本方法和注意事项培养基是微生物学实验研究中必不可少的一部分。
通过适宜的培养基制备，可以提供微生物生长所需的营养物质和环境条件，促进微生物的生长和繁殖。
下面将介绍培养基制备的基本方法和注意事项。
1.选择适当的基质：培养基的基质通常是碳源、氮源和微量元素等。
根据所需要培养的微生物的特点和生活习性，选择适当的基质，例如葡萄糖、蛋白胨、琼脂等。
2.确定培养基性质：根据微生物的需求，调整培养基的酸碱性、温度、湿度等性质，使其符合微生物的生长条件。
3.杀菌处理：使用适当的方法（如高温、紫外线照射、滤过等）杀灭培养基中的有害菌群，使培养基具备无菌状态。
4.添加所需营养物质：根据微生物的需求，向培养基中添加所需的营养物质，如氨基酸、维生素等。
5.调整pH值：根据微生物的需求，调整培养基的pH值，以维持微生物的生长条件。
6.固化培养基：将调整好的培养基倒入培养皿中，待其凝固后，即可用于微生物的培养。
1.严格无菌操作：培养基制备过程中，必须进行严格的无菌操作，避免有害微生物的污染。
2.合理的杀菌方法：为了杀灭培养基中的有害菌群，需要选择合适的杀菌方法，避免对培养基造成不良影响。
3.正确添加营养物质：根据微生物的需求，正确添加营养物质，避免过量或缺乏，影响微生物的生长。
4.注意培养基的保存：制备好的培养基需要保存在干燥、阴凉的环境中，避免潮湿、高温等情况导致其变质。
5.注意培养基的标记：为了方便使用和排查，制备好的培养基应进行明确的标记，标注培养基名称、成分、pH值等信息。
6.根据需求调整培养基：不同的微生物对培养基的要求不同，根据所需要培养的微生物的特点，合理调整培养基的成分和性质。
总结一下，培养基制备是微生物学实验研究中非常重要的一环。
通过选择适当的基质，调整培养基性质，杀菌处理，添加营养物质，调整pH值和固化培养基等步骤，可以得到适合微生物生长的培养基。
在制备培养基时，需要注意严格无菌操作，选择合适的杀菌方法，正确添加营养物质，保存和标记培养基，以及根据微生物的需求调整培养基等因素。
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培养基制备的基本方法和注意事项
1.培养基配方的选定
同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。
因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。
2 ．培养基的制备记录
每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。
最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。
3.培养基成分的称取
培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。
可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。
完全称取完毕后．还应进行一次检查。
4.培养基各成份的混合和溶化
培养基所用化学药品均应是化学纯的。
使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。
最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。
在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。
待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。
如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。
在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。
5.培养塞pH 的初步调整
培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低pH0.2.而肠浸液pH 却会有显著的升高。
因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。
pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。
6．培养基的过滤澄清
液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。
一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应拆叠成折扇成漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。
琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。
亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。
新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。
如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。
即将冷却至55-60℃ 的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/ 2 ，每1000ml 培养基加入1-2个鸡蛋的蛋白．强力振摇3-5 分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。
若能自行沉淀者，亦可静置冰箱中1-2日、吸取其上清液即可。
7.培养基的分装
培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。
分装量不得超过容器装盛量的2/ 3 。
容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还双用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。
分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。
分装琼脂抖面培养基时，分装量应以能形成2 / 3 底层和1/ 3 斜面的量为恰当。
分装容器应予先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。
每批培养基应另外分装20ml 培养基于一小玻瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。
8.培养基的灭菌
一般培养基可采用121℃ 高压蒸汽灭菌15分钟的方法。
在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。
某些畏热成分，如糖类，应另行配成20% 如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。
明胶培养基亦应用较低温度灭菌。
血液、体液和抗生素等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃ 左右的培养基中。
琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60℃时，摆置成适当斜面、待其自然凝固。
9. 培养基的质量测试
每批培养基制备好以后．应仔细检查一遍：如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。
并测定其最终pH。
将全部培养基放入36±1℃ 恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。
用有关的标准菌株接种1-2 管或瓶培养基，培养24- 48 小时，如无菌生长或生长不好。
应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。
10.培养基的保存
培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。
放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过3天。
每批培养基均必须附有该批培养基制各记录副页或明显标签。