肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会
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• 速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点, 防止冰结晶产生。
.
速冻方法
液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织 块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密 封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;
干冰-丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保 温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可 达-70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干 冰-丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入 异戊烷内速冻半分至一分钟。
.
• CD34: HCC型染色 长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布 均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.
.
• CK 18: HCC,ICC, Metastatic carcinoma:100%+ 上皮性肿瘤标志物
.
• CK 19: 胆管型CK: CK19,CK7 肝细胞 － 胆管上皮，ICC：77-100% ICC最好的标志物
.
7. 原发性胆汁性肝硬化（PBC）
3期（间隔期）90%出现自身抗体(A-Mit)，Florid duct lesion+Biliary PN，
纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性
4期（肝硬化） 静止- 纤维间隔内无炎症或轻度炎症 活动 – Fibrous PN.
.
8. 血吸虫性肝纤维化
.
肝癌(LIVER CANCER)
转移性腺癌：100%+
ICC: 92.9%+
HCC: 0% +
胃癌肝转移
.
• HBsAg: HCC: 70-80% +
胞质型，胞核型阳性
胞质型，核周型阳性
.
• 黏液染色：AB/PAS
酸性黏多糖：兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液） 中性黏多糖,糖原：红色（假腺管型HCC)
.
免疫组织化学染色的几点体会
.
免疫组化染色后的衬染
• 常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果 阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!!
• 细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚 固绿(FAST BLUE)染,则保存时间较长
.
封固和保存
• 绝大多数免疫Fra Baidu bibliotek染色后都可用树胶封 固，但如用DAB以外的底物应注意有 色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性 封固物如明胶、甘油缓冲液等。
小叶中央区纤维化
窦周纤维化
.
3. 肝糖原累积病肝纤维
.
4. Wilson病
红氨酸(Rubeanic acid)染色,铜被染成深 绿色.
5. 血色病
穿刺肝组织因含有大量含铁血 黄素沉着呈火焰红色
. 肝细胞普鲁氏蓝染色阳性
6. 自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）
门管区肝细胞呈花环状排列Hepatic Rosette ，表现为数个水样变 性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。
.
• CEA： monoclonal CEA:毛细胆管－ ICC，转移性肝癌：60-75%+ HCC:0-11%+ polyclonal CEA: 毛细胆管＋ HCC特异标志物之一
.
• CK 20: 胃肠道腺癌的主要标志物
转移性腺癌：74-100%+ ICC:10%+ HCC:0%+
.
• MOC31: 抗人上皮相关抗原
常见肝病的病理形态特点及免 疫组化染色的几点体会
主讲人：
.
肝穿刺标本检查和处理原则
1. 肉眼观察 肝穿刺标本呈完整园柱状，长度1－3 cm 典型的慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观 肝硬化的穿刺标本，呈不规则碎块
.
2.石蜡切片 每张玻片上应放置超过6个连续组织切片，有助于肝纤维 化的病理诊断。
.
3. 染色 除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件 和需要作以下特殊染色：
①网状纤维染色， ②Masson三色染色， ③胶原纤维染色(Sirius red或免疫组化 )
.
④ Dm-HSC ⑤ α-SMA-MFb
Dm
α-SMA
.
各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期
1. 慢性肝炎肝纤维化 ( Dr.Scheuer 方案）
S1
S3
S2
.S4
活动性纤维间隔
静止性纤维间隔
.
2. 脂肪性肝病肝纤维化 穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液
•
织交界处，避免选择坏死组织。
• （3）避免挤压：受挤压组织不但影响
•
HE切片的观察，还造成非特异性
•
免疫组化组织着色。
.
2.固定
• 根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定 时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要合适。
• 容器要大,固定液要宽余. • 固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织
块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗 漏,阳性会减弱甚至转阴. • 选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福 尔马林
• HCC • ICC • Combined hepatocellular and
cholangiocarcinoma
.
肝癌病理诊断常用免疫组化和特染
• Hep Par1 线粒体相关抗原，与AFP无关 对胎儿和成人肝细胞高度特异 (HCC:阳性率82-97%）
.
• AFP HCC阳性率：15-82%
一、组织和细胞标本制备 • 目的： • (1)最大限度地保存组织结构。 • (2)最大限度地保存抗原性。
• 注意事项：在选择组织处理方法前，先根据实验 目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻? 石蜡?)。
.
1.取材
• （1）原则：尽可能新鲜，动物标本可选
•
用动脉灌注固定。
• （2）取材部位：尽量包括病灶和正常组
• 酶免疫染色切片可保存数周甚至数月。 • 免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。
.
一.常用免疫组织化学方法
1.免疫荧光:
用于培养细胞效果较好, 石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强,用时要注 意
FITC(异硫氰酸荧光素) 用450～490 nm光激发,515nm 滤片观察, 呈翠绿色 RB200(四乙基罗达明B200) 用570nm光激发, 596 ～600nm滤片观察,呈橘红色 TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明) 用530 ～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色 Texas red 用595nm光激发, 615nm滤片观察,呈红色
.
3.制备蜡块
• 冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采用低 温石蜡包埋,如无低温石蜡,可将组织块尽可 能修薄,以缩短脱水、透明、包埋时间,尽可 能保存组织内抗原稳定。
.
4.制备冰冻切片
• 冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材 料均适合于冷冻包埋、切片。
• ★防止冰结晶!!!
• 预处理:目的是减少组织中的水分以减少冰结晶的 产生,方法是将已固定、冲洗的组织块放入20～ 30%蔗糖缓冲液内,4℃冰箱过夜,再将组织块埋于 OCT包埋剂
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速冻方法
液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织 块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密 封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;
干冰-丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保 温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可 达-70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干 冰-丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入 异戊烷内速冻半分至一分钟。
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• CD34: HCC型染色 长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布 均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.
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• CK 18: HCC,ICC, Metastatic carcinoma:100%+ 上皮性肿瘤标志物
.
• CK 19: 胆管型CK: CK19,CK7 肝细胞 － 胆管上皮，ICC：77-100% ICC最好的标志物
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7. 原发性胆汁性肝硬化（PBC）
3期（间隔期）90%出现自身抗体(A-Mit)，Florid duct lesion+Biliary PN，
纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性
4期（肝硬化） 静止- 纤维间隔内无炎症或轻度炎症 活动 – Fibrous PN.
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8. 血吸虫性肝纤维化
.
肝癌(LIVER CANCER)
转移性腺癌：100%+
ICC: 92.9%+
HCC: 0% +
胃癌肝转移
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• HBsAg: HCC: 70-80% +
胞质型，胞核型阳性
胞质型，核周型阳性
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• 黏液染色：AB/PAS
酸性黏多糖：兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液） 中性黏多糖,糖原：红色（假腺管型HCC)
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免疫组织化学染色的几点体会
.
免疫组化染色后的衬染
• 常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果 阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!!
• 细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚 固绿(FAST BLUE)染,则保存时间较长
.
封固和保存
• 绝大多数免疫Fra Baidu bibliotek染色后都可用树胶封 固，但如用DAB以外的底物应注意有 色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性 封固物如明胶、甘油缓冲液等。
小叶中央区纤维化
窦周纤维化
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3. 肝糖原累积病肝纤维
.
4. Wilson病
红氨酸(Rubeanic acid)染色,铜被染成深 绿色.
5. 血色病
穿刺肝组织因含有大量含铁血 黄素沉着呈火焰红色
. 肝细胞普鲁氏蓝染色阳性
6. 自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）
门管区肝细胞呈花环状排列Hepatic Rosette ，表现为数个水样变 性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。
.
• CEA： monoclonal CEA:毛细胆管－ ICC，转移性肝癌：60-75%+ HCC:0-11%+ polyclonal CEA: 毛细胆管＋ HCC特异标志物之一
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• CK 20: 胃肠道腺癌的主要标志物
转移性腺癌：74-100%+ ICC:10%+ HCC:0%+
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• MOC31: 抗人上皮相关抗原
常见肝病的病理形态特点及免 疫组化染色的几点体会
主讲人：
.
肝穿刺标本检查和处理原则
1. 肉眼观察 肝穿刺标本呈完整园柱状，长度1－3 cm 典型的慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观 肝硬化的穿刺标本，呈不规则碎块
.
2.石蜡切片 每张玻片上应放置超过6个连续组织切片，有助于肝纤维 化的病理诊断。
.
3. 染色 除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件 和需要作以下特殊染色：
①网状纤维染色， ②Masson三色染色， ③胶原纤维染色(Sirius red或免疫组化 )
.
④ Dm-HSC ⑤ α-SMA-MFb
Dm
α-SMA
.
各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期
1. 慢性肝炎肝纤维化 ( Dr.Scheuer 方案）
S1
S3
S2
.S4
活动性纤维间隔
静止性纤维间隔
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2. 脂肪性肝病肝纤维化 穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液
•
织交界处，避免选择坏死组织。
• （3）避免挤压：受挤压组织不但影响
•
HE切片的观察，还造成非特异性
•
免疫组化组织着色。
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2.固定
• 根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定 时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要合适。
• 容器要大,固定液要宽余. • 固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织
块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗 漏,阳性会减弱甚至转阴. • 选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福 尔马林
• HCC • ICC • Combined hepatocellular and
cholangiocarcinoma
.
肝癌病理诊断常用免疫组化和特染
• Hep Par1 线粒体相关抗原，与AFP无关 对胎儿和成人肝细胞高度特异 (HCC:阳性率82-97%）
.
• AFP HCC阳性率：15-82%
一、组织和细胞标本制备 • 目的： • (1)最大限度地保存组织结构。 • (2)最大限度地保存抗原性。
• 注意事项：在选择组织处理方法前，先根据实验 目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻? 石蜡?)。
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1.取材
• （1）原则：尽可能新鲜，动物标本可选
•
用动脉灌注固定。
• （2）取材部位：尽量包括病灶和正常组
• 酶免疫染色切片可保存数周甚至数月。 • 免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。
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一.常用免疫组织化学方法
1.免疫荧光:
用于培养细胞效果较好, 石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强,用时要注 意
FITC(异硫氰酸荧光素) 用450～490 nm光激发,515nm 滤片观察, 呈翠绿色 RB200(四乙基罗达明B200) 用570nm光激发, 596 ～600nm滤片观察,呈橘红色 TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明) 用530 ～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色 Texas red 用595nm光激发, 615nm滤片观察,呈红色
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3.制备蜡块
• 冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采用低 温石蜡包埋,如无低温石蜡,可将组织块尽可 能修薄,以缩短脱水、透明、包埋时间,尽可 能保存组织内抗原稳定。
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4.制备冰冻切片
• 冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材 料均适合于冷冻包埋、切片。
• ★防止冰结晶!!!
• 预处理:目的是减少组织中的水分以减少冰结晶的 产生,方法是将已固定、冲洗的组织块放入20～ 30%蔗糖缓冲液内,4℃冰箱过夜,再将组织块埋于 OCT包埋剂