细菌内毒素检测
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故：不可用湿热灭菌法处理实验器具
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要特性（去除内毒素方法） 去除内毒素方法）
4.滤过性 4.滤过性
原体积很小，约在1 nm之间 之间， 原体积很小，约在1～5 nm之间，故能通过除 菌滤器而进入滤液中，但不能通过石棉滤板， 菌滤器而进入滤液中，但不能通过石棉滤板，也不 能通过半透膜。 能通过半透膜。
5.吸附性 5.吸附性
能被活性炭吸附剂吸附。 能被活性炭吸附剂吸附。内毒素在溶液中带有 一定的电荷，因而可被某些离子交换介质吸附。 一定的电荷，因而可被某些离子交换介质吸附。
细 菌 内 毒 素 简 介
• 热源 内毒素 ？ 热源=内毒素
热原指微生物产生的某些多糖蛋白复合物等使 热原指 微生物产生的某些多糖蛋白复合物等使 人体发热的物质，不仅仅是细菌内毒素。 人体发热的物质，不仅仅是细菌内毒素。 但在药检的范畴， 但在药检的范畴 ， 细菌内毒素是主要的热原物 可以说无内毒素就无热原， 质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控 制热原。
故：灭菌注射用水≠细菌内毒素检查用水 灭菌注射用水≠
光度法： 光度法：
内毒素含量应小于0.005EU/ml； 内毒素含量应小于0.005EU/ml； 0.005EU/ml
细菌内毒素检查法
• 基本概念 —细菌内毒素限值（L） 基本概念1—细菌内毒素限值（ ）
指人对药品中细菌内毒素所能耐受的不致引起热原反应的 某定量限值（ 某定量限值（L）； 计算公式： 计算公式：
影响因素： 影响因素：
—新药检查方法建立； 新药检查方法建立； —鲎试剂批号或来源的改变； 鲎试剂批号或来源的改变； —检品生产工艺，配方，成分的改变； 检品生产工艺，配方，成分的改变； —检品关键成分来源的改变； 检品关键成分来源的改变；
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学验证—供试品干扰试验 方法学验证—
细菌内毒素检查法
• 基本概念 —样品最大有效稀释倍数（MVD） 基本概念2—样品最大有效稀释倍数（MVD）
指供试品溶液被允许稀释的最大倍数， 指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀 释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测； 释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测； 计算公式： 计算公式：
MVD=cL/ λ
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 回顾
L=K/M
K：每公斤体重每小时最大可接受内毒素剂量，注射剂K=5EU/ /(kg.h) 每公斤体重每小时最大可接受内毒素剂量，注射剂K=5EU/ M:每公斤体重每小时的最大供试品剂量； M:每公斤体重每小时的最大供试品剂量； 每公斤体重每小时的最大供试品剂量
以胸腺素α1计算限值为例： 以胸腺素 计算限值为例： 计算限值为例 L=5EU/ (kg.h) ÷(1.6mg÷60kg)=185.19 EU/mg ÷ 药典规定标准：小于 药典规定标准：小于10EU/ml
细 菌 内 毒 素 简 介
• 在药检中的应用
细菌内毒素检查作为控制药品质量的一种方法， 细菌内毒素检查作为控制药品质量的一种方法， 已经广泛的被世界各国药典收载。 已经广泛的被世界各国药典收载。 • 成品检查——药品安全性检查之一 成品检查——药品安全性检查之一 —— • 半成品（生产过程）检查——事前质控手段，避免 半成品（生产过程）检查——事前质控手段， ——事前质控手段 造成药品成批报废
计算样品的内毒素限值（L） 计算样品的内毒素限值（ 选择合适的鲎试剂 计算最大有效稀释倍数 方法学验证实验（灵敏度、干扰试验）（详见后） 方法学验证实验（灵敏度、干扰试验）（详见后） ）（详见后 供试品凝胶法检测
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学验证—鲎试剂灵敏度复核试验（新购） 方法学验证—鲎试剂灵敏度复核试验（新购）
λ：鲎试剂灵敏度
L：供试品的细菌内毒素限值 供试品的细菌内毒素限值 c：供试品溶液的浓度
以胸腺素α1计算最大稀释倍数为例： 以胸腺素 计算最大稀释倍数为例： 计算最大稀释倍数为例
MVD=10EU/mg×1.6mg/ml ÷0.25EU/ml=64（倍） × （
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学建立步骤
细 菌 内 毒 素 简 介
• 与热源对比内毒素检查法优势
• 方便、快捷、经济； 方便、快捷、经济； • 重现性好、灵敏度高； 重现性好、灵敏度高； • 避免抗原的产生，克服生物测定的误差； 避免抗原的产生，克服生物测定的误差；
近年来已经普遍采用细菌内毒素检查法， 近年来已经普遍采用细菌内毒素检查法，逐渐替代了热源法
C
2λ/检查用水 2λ/检查用水
检查用水
D
无/检查用水
—
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学验证—供试品干扰试验 方法学验证—
结果判定： 结果判定：
如果有供试品和无供试品测得的鲎试剂灵敏度（ ） 如果有供试品和无供试品测得的鲎试剂灵敏度（λc）均 范围内时， 在0.5λ-2.0λ范围内时，则认为供试品在该浓度下不干扰试验， 范围内时 则认为供试品在该浓度下不干扰试验， 否则需要对供试品做适当处理。 否则需要对供试品做适当处理。
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学验证—供试品干扰试验 方法学验证—
目的： 目的：
确证产品对方法是否存在干扰（抑制或增强），得到供试 确证产品对方法是否存在干扰（抑制或增强），得到供试 ）， 品的最大不干扰浓度或最小不干扰稀释倍数； 品的最大不干扰浓度或最小不干扰稀释倍数；
• 方法学验证—供试品干扰试验 方法学验证—
细 菌 内 毒 素 简 介
• 热源检查方法简介
《中国药典》热原检查方法是采用家兔升温法进行检查。 中国药典》热原检查方法是采用家兔升温法进行检查。 将一定剂量的供试品， 静脉注入家兔体内， 将一定剂量的供试品 ， 静脉注入家兔体内 ， 在规 定时间内， 定时间内， 观察家兔体温升 高的情况， 高的情况，以判定 供试品中所含热原 的限度是否符合规 定。
• 供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。 供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。 但当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法 但当测定结果有争议时，除另有规定外， 结果为准。 结果为准。 • 本节将着重介绍凝胶法法的操作与有关原理。 本节将着重介绍凝胶法法的操作与有关原理。
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
细菌内毒素检查法
• 名词解释 —国家标准品及工作标准品 名词解释2—
国家标准品： 单位：EU/ml） 国家标准品： （单位：EU/ml）
自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、 自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、 仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的 效价； 效价；
工作标准品： 工作标准品：
目的： 目的：
对试剂、检测者的操作、环境条件、水平条件进行验证。 对试剂、检测者的操作、环境条件、水平条件进行验证。 以证实操作正常无误，准确可靠和结果可信。 以证实操作正常无误，准确可靠和结果可信。
方法： 方法：
将细菌内毒素工作标准品稀释至2 、 、 将细菌内毒素工作标准品稀释至 λ、 λ、0.5 λ、0.25 λ浓 、 浓 加入到鲎试剂中，保温37℃ ，然后观察结果。 度，加入到鲎试剂中，保温 ℃1 h，然后观察结果。
结果判定： 结果判定：
内毒素标准溶液2 、 、 内毒素标准溶液 λ、 λ、0.5 λ管应均为阳性，最小浓度 管应均为阳性， ( 0.25λ)应均为阴性，本批鲎试剂可用。 应均为阴性， 应均为阴性 本批鲎试剂可用。
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
试验结果（ 试验结果（阴、阳性）判定： 阳性）判定：
试验方法： 试验方法：须选择两家以上的鲎试剂进行试验
编号 A B 内毒素浓度/ 内毒素浓度/配制内 毒素的溶液 无/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/供试品溶液 稀释 用液 — 供试品溶液 稀释 倍数 — 1 2 4 8 1 2 4 8 — 所含内毒 素的浓度 — 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ — 平行 管数 2 4 4 4 4 4 4 4 4 2
• 供试品日常细菌内毒素凝胶法检测
检测方法： 检测方法：
编号 A B C D 结果 内毒素浓度/配制内毒素的 内毒素浓度/ 平行管数 判定 溶液 无/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/检查用水 2λ/检查用水 无/检查用水 2 2 2 2
阴性 阳性 阳性 阴性
无干扰浓度供试品溶液； 供试品阳性对照； 阳性对照； 阴性对照。 注：A 无干扰浓度供试品溶液；B 供试品阳性对照；C 阳性对照；D 阴性对照。
2.不耐酸碱性 2.不耐酸碱性
内毒素可被强酸、强碱和氧化剂破坏。 内毒素可被强酸、强碱和氧化剂破坏。
故：玻璃器皿用铬酸洗液浸泡
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要特性（实验器材处理方法） 实验器材处理方法）
3.水溶性与不挥发性 3.水溶性与不挥发性
热原能溶于水，本身不具挥发性，但能随水蒸 热原能溶于水，本身不具挥发性， 气雾滴夹带入蒸馏水中，造成污染。 气雾滴夹带入蒸馏水中，造成污染。
。
细菌内毒素检测
目
录
1 2 3
Fra Baidu bibliotek
细菌内毒素简介 细菌内毒素检查法 需要注意的问题
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要内容
—— 来源 —— 特性 —— 与热源的关系 —— 在药检中应用
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要来源
主要来自于革兰氏阴性杆菌， 主要来自于革兰氏阴性杆菌，当细菌死 亡或自溶后便会释放出内毒素，其化学成分 亡或自溶后便会释放出内毒素， 主要是脂多糖，这是一种大分子物质， 主要是脂多糖，这是一种大分子物质，分子 量约为10 其粒径约在1~ 纳米 量约为 6，其粒径约在 5纳米 。 细菌内毒素广泛存在于自然界中。 细菌内毒素广泛存在于自然界中。如自 来水中含内毒素的量为1至 来水中含内毒素的量为 至100EU/ml。 。
干扰的排除： 干扰的排除：
—对供试品进行更大倍数的稀释； 对供试品进行更大倍数的稀释； 对供试品进行更大倍数的稀释 —选择灵敏度更高的鲎试剂； 选择灵敏度更高的鲎试剂； —其他适宜的方法 如过滤、中和、透析或加热处理等排除干扰。 如过滤、中和、透析或加热处理等排除干扰。
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
经国家标准品稀释用于试验中鲎试剂灵敏度符 复核、干扰试验及各种阳性对照； 复核、干扰试验及各种阳性对照；
细菌内毒素检查法
• 名词解释 —细菌内毒素检查用水 名词解释3—
凝胶法： 凝胶法：
内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水； 内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水； 0.015EU/ml的灭菌注射用水
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要特性（实验器材处理方法） 实验器材处理方法）
1.耐热性 1.耐热性
一般在100℃加热1小时无影响，120℃加热 小时 ℃加热 小时无影响 小时无影响， 一般在 ℃加热4小时 小时或250℃干热半 能破坏98％， ％，180－200℃干热 小时或 能破坏 ％， － ℃干热2小时或 ℃ 小时才能完全破坏 才能完全破坏。 小时才能完全破坏。 注射剂的一般灭菌条件是不能破坏内毒素的。 故：注射剂的一般灭菌条件是不能破坏内毒素的。
细菌内毒素检查法
• 主要内容
——凝胶法原理 ——凝胶法原理 ——名词及基本概念解释 ——名词及基本概念解释 ——方法学建立与验证 ——方法学建立与验证 ——结果判定 ——结果判定
细菌内毒素检查法
• 《中国药典》批准使用方法： 中国药典》批准使用方法：
测定 方法 凝胶法 浊度法 光度测定法 显色基质法
• 基本原理
凝固酶原
内毒素（ 内毒素（LPS） ） 激活
凝固酶
凝固蛋白原 凝固蛋白 溶解状态） 凝胶状态） （溶解状态） （凝胶状态）
细菌内毒素检查法
• 名词解释 —鲎及鲎试剂 名词解释1—
鲎（hòu）是一种海洋节肢动物，其血液 中含有一种有核变形细胞，这种细胞的胞浆 中含有凝固酶原和凝固蛋白原。将此物质进 行提取，经低温冷冻干燥而成的生物试剂即 为鲎试剂，专用于细菌内毒素检测。 鲎试剂灵敏度(λ）：能检测出内毒素标准 能检测出内毒素标准 溶液或供品溶液中的最低内毒素浓度 最低内毒素浓度。 溶液或供品溶液中的最低内毒素浓度。
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要特性（去除内毒素方法） 去除内毒素方法）
4.滤过性 4.滤过性
原体积很小，约在1 nm之间 之间， 原体积很小，约在1～5 nm之间，故能通过除 菌滤器而进入滤液中，但不能通过石棉滤板， 菌滤器而进入滤液中，但不能通过石棉滤板，也不 能通过半透膜。 能通过半透膜。
5.吸附性 5.吸附性
能被活性炭吸附剂吸附。 能被活性炭吸附剂吸附。内毒素在溶液中带有 一定的电荷，因而可被某些离子交换介质吸附。 一定的电荷，因而可被某些离子交换介质吸附。
细 菌 内 毒 素 简 介
• 热源 内毒素 ？ 热源=内毒素
热原指微生物产生的某些多糖蛋白复合物等使 热原指 微生物产生的某些多糖蛋白复合物等使 人体发热的物质，不仅仅是细菌内毒素。 人体发热的物质，不仅仅是细菌内毒素。 但在药检的范畴， 但在药检的范畴 ， 细菌内毒素是主要的热原物 可以说无内毒素就无热原， 质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控 制热原。
故：灭菌注射用水≠细菌内毒素检查用水 灭菌注射用水≠
光度法： 光度法：
内毒素含量应小于0.005EU/ml； 内毒素含量应小于0.005EU/ml； 0.005EU/ml
细菌内毒素检查法
• 基本概念 —细菌内毒素限值（L） 基本概念1—细菌内毒素限值（ ）
指人对药品中细菌内毒素所能耐受的不致引起热原反应的 某定量限值（ 某定量限值（L）； 计算公式： 计算公式：
影响因素： 影响因素：
—新药检查方法建立； 新药检查方法建立； —鲎试剂批号或来源的改变； 鲎试剂批号或来源的改变； —检品生产工艺，配方，成分的改变； 检品生产工艺，配方，成分的改变； —检品关键成分来源的改变； 检品关键成分来源的改变；
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学验证—供试品干扰试验 方法学验证—
细菌内毒素检查法
• 基本概念 —样品最大有效稀释倍数（MVD） 基本概念2—样品最大有效稀释倍数（MVD）
指供试品溶液被允许稀释的最大倍数， 指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀 释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测； 释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测； 计算公式： 计算公式：
MVD=cL/ λ
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 回顾
L=K/M
K：每公斤体重每小时最大可接受内毒素剂量，注射剂K=5EU/ /(kg.h) 每公斤体重每小时最大可接受内毒素剂量，注射剂K=5EU/ M:每公斤体重每小时的最大供试品剂量； M:每公斤体重每小时的最大供试品剂量； 每公斤体重每小时的最大供试品剂量
以胸腺素α1计算限值为例： 以胸腺素 计算限值为例： 计算限值为例 L=5EU/ (kg.h) ÷(1.6mg÷60kg)=185.19 EU/mg ÷ 药典规定标准：小于 药典规定标准：小于10EU/ml
细 菌 内 毒 素 简 介
• 在药检中的应用
细菌内毒素检查作为控制药品质量的一种方法， 细菌内毒素检查作为控制药品质量的一种方法， 已经广泛的被世界各国药典收载。 已经广泛的被世界各国药典收载。 • 成品检查——药品安全性检查之一 成品检查——药品安全性检查之一 —— • 半成品（生产过程）检查——事前质控手段，避免 半成品（生产过程）检查——事前质控手段， ——事前质控手段 造成药品成批报废
计算样品的内毒素限值（L） 计算样品的内毒素限值（ 选择合适的鲎试剂 计算最大有效稀释倍数 方法学验证实验（灵敏度、干扰试验）（详见后） 方法学验证实验（灵敏度、干扰试验）（详见后） ）（详见后 供试品凝胶法检测
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学验证—鲎试剂灵敏度复核试验（新购） 方法学验证—鲎试剂灵敏度复核试验（新购）
λ：鲎试剂灵敏度
L：供试品的细菌内毒素限值 供试品的细菌内毒素限值 c：供试品溶液的浓度
以胸腺素α1计算最大稀释倍数为例： 以胸腺素 计算最大稀释倍数为例： 计算最大稀释倍数为例
MVD=10EU/mg×1.6mg/ml ÷0.25EU/ml=64（倍） × （
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学建立步骤
细 菌 内 毒 素 简 介
• 与热源对比内毒素检查法优势
• 方便、快捷、经济； 方便、快捷、经济； • 重现性好、灵敏度高； 重现性好、灵敏度高； • 避免抗原的产生，克服生物测定的误差； 避免抗原的产生，克服生物测定的误差；
近年来已经普遍采用细菌内毒素检查法， 近年来已经普遍采用细菌内毒素检查法，逐渐替代了热源法
C
2λ/检查用水 2λ/检查用水
检查用水
D
无/检查用水
—
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学验证—供试品干扰试验 方法学验证—
结果判定： 结果判定：
如果有供试品和无供试品测得的鲎试剂灵敏度（ ） 如果有供试品和无供试品测得的鲎试剂灵敏度（λc）均 范围内时， 在0.5λ-2.0λ范围内时，则认为供试品在该浓度下不干扰试验， 范围内时 则认为供试品在该浓度下不干扰试验， 否则需要对供试品做适当处理。 否则需要对供试品做适当处理。
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
• 方法学验证—供试品干扰试验 方法学验证—
目的： 目的：
确证产品对方法是否存在干扰（抑制或增强），得到供试 确证产品对方法是否存在干扰（抑制或增强），得到供试 ）， 品的最大不干扰浓度或最小不干扰稀释倍数； 品的最大不干扰浓度或最小不干扰稀释倍数；
• 方法学验证—供试品干扰试验 方法学验证—
细 菌 内 毒 素 简 介
• 热源检查方法简介
《中国药典》热原检查方法是采用家兔升温法进行检查。 中国药典》热原检查方法是采用家兔升温法进行检查。 将一定剂量的供试品， 静脉注入家兔体内， 将一定剂量的供试品 ， 静脉注入家兔体内 ， 在规 定时间内， 定时间内， 观察家兔体温升 高的情况， 高的情况，以判定 供试品中所含热原 的限度是否符合规 定。
• 供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。 供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。 但当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法 但当测定结果有争议时，除另有规定外， 结果为准。 结果为准。 • 本节将着重介绍凝胶法法的操作与有关原理。 本节将着重介绍凝胶法法的操作与有关原理。
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
细菌内毒素检查法
• 名词解释 —国家标准品及工作标准品 名词解释2—
国家标准品： 单位：EU/ml） 国家标准品： （单位：EU/ml）
自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、 自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、 仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的 效价； 效价；
工作标准品： 工作标准品：
目的： 目的：
对试剂、检测者的操作、环境条件、水平条件进行验证。 对试剂、检测者的操作、环境条件、水平条件进行验证。 以证实操作正常无误，准确可靠和结果可信。 以证实操作正常无误，准确可靠和结果可信。
方法： 方法：
将细菌内毒素工作标准品稀释至2 、 、 将细菌内毒素工作标准品稀释至 λ、 λ、0.5 λ、0.25 λ浓 、 浓 加入到鲎试剂中，保温37℃ ，然后观察结果。 度，加入到鲎试剂中，保温 ℃1 h，然后观察结果。
结果判定： 结果判定：
内毒素标准溶液2 、 、 内毒素标准溶液 λ、 λ、0.5 λ管应均为阳性，最小浓度 管应均为阳性， ( 0.25λ)应均为阴性，本批鲎试剂可用。 应均为阴性， 应均为阴性 本批鲎试剂可用。
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
试验结果（ 试验结果（阴、阳性）判定： 阳性）判定：
试验方法： 试验方法：须选择两家以上的鲎试剂进行试验
编号 A B 内毒素浓度/ 内毒素浓度/配制内 毒素的溶液 无/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/供试品溶液 稀释 用液 — 供试品溶液 稀释 倍数 — 1 2 4 8 1 2 4 8 — 所含内毒 素的浓度 — 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ 2λ 1λ 0.5λ 0.25λ — 平行 管数 2 4 4 4 4 4 4 4 4 2
• 供试品日常细菌内毒素凝胶法检测
检测方法： 检测方法：
编号 A B C D 结果 内毒素浓度/配制内毒素的 内毒素浓度/ 平行管数 判定 溶液 无/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/供试品溶液 2λ/检查用水 2λ/检查用水 无/检查用水 2 2 2 2
阴性 阳性 阳性 阴性
无干扰浓度供试品溶液； 供试品阳性对照； 阳性对照； 阴性对照。 注：A 无干扰浓度供试品溶液；B 供试品阳性对照；C 阳性对照；D 阴性对照。
2.不耐酸碱性 2.不耐酸碱性
内毒素可被强酸、强碱和氧化剂破坏。 内毒素可被强酸、强碱和氧化剂破坏。
故：玻璃器皿用铬酸洗液浸泡
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要特性（实验器材处理方法） 实验器材处理方法）
3.水溶性与不挥发性 3.水溶性与不挥发性
热原能溶于水，本身不具挥发性，但能随水蒸 热原能溶于水，本身不具挥发性， 气雾滴夹带入蒸馏水中，造成污染。 气雾滴夹带入蒸馏水中，造成污染。
。
细菌内毒素检测
目
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细菌内毒素简介 细菌内毒素检查法 需要注意的问题
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要内容
—— 来源 —— 特性 —— 与热源的关系 —— 在药检中应用
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要来源
主要来自于革兰氏阴性杆菌， 主要来自于革兰氏阴性杆菌，当细菌死 亡或自溶后便会释放出内毒素，其化学成分 亡或自溶后便会释放出内毒素， 主要是脂多糖，这是一种大分子物质， 主要是脂多糖，这是一种大分子物质，分子 量约为10 其粒径约在1~ 纳米 量约为 6，其粒径约在 5纳米 。 细菌内毒素广泛存在于自然界中。 细菌内毒素广泛存在于自然界中。如自 来水中含内毒素的量为1至 来水中含内毒素的量为 至100EU/ml。 。
干扰的排除： 干扰的排除：
—对供试品进行更大倍数的稀释； 对供试品进行更大倍数的稀释； 对供试品进行更大倍数的稀释 —选择灵敏度更高的鲎试剂； 选择灵敏度更高的鲎试剂； —其他适宜的方法 如过滤、中和、透析或加热处理等排除干扰。 如过滤、中和、透析或加热处理等排除干扰。
细菌内毒素检查法——凝胶法 凝胶法
经国家标准品稀释用于试验中鲎试剂灵敏度符 复核、干扰试验及各种阳性对照； 复核、干扰试验及各种阳性对照；
细菌内毒素检查法
• 名词解释 —细菌内毒素检查用水 名词解释3—
凝胶法： 凝胶法：
内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水； 内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水； 0.015EU/ml的灭菌注射用水
细 菌 内 毒 素 简 介
• 主要特性（实验器材处理方法） 实验器材处理方法）
1.耐热性 1.耐热性
一般在100℃加热1小时无影响，120℃加热 小时 ℃加热 小时无影响 小时无影响， 一般在 ℃加热4小时 小时或250℃干热半 能破坏98％， ％，180－200℃干热 小时或 能破坏 ％， － ℃干热2小时或 ℃ 小时才能完全破坏 才能完全破坏。 小时才能完全破坏。 注射剂的一般灭菌条件是不能破坏内毒素的。 故：注射剂的一般灭菌条件是不能破坏内毒素的。
细菌内毒素检查法
• 主要内容
——凝胶法原理 ——凝胶法原理 ——名词及基本概念解释 ——名词及基本概念解释 ——方法学建立与验证 ——方法学建立与验证 ——结果判定 ——结果判定
细菌内毒素检查法
• 《中国药典》批准使用方法： 中国药典》批准使用方法：
测定 方法 凝胶法 浊度法 光度测定法 显色基质法
• 基本原理
凝固酶原
内毒素（ 内毒素（LPS） ） 激活
凝固酶
凝固蛋白原 凝固蛋白 溶解状态） 凝胶状态） （溶解状态） （凝胶状态）
细菌内毒素检查法
• 名词解释 —鲎及鲎试剂 名词解释1—
鲎（hòu）是一种海洋节肢动物，其血液 中含有一种有核变形细胞，这种细胞的胞浆 中含有凝固酶原和凝固蛋白原。将此物质进 行提取，经低温冷冻干燥而成的生物试剂即 为鲎试剂，专用于细菌内毒素检测。 鲎试剂灵敏度(λ）：能检测出内毒素标准 能检测出内毒素标准 溶液或供品溶液中的最低内毒素浓度 最低内毒素浓度。 溶液或供品溶液中的最低内毒素浓度。