丝氨酸蛋白酶水解机制(教学课件)
蛋白质的酶促降解及氨基酸代谢教学.ppt
2 氨基酸代谢概况 3 氨基酸降解与转化
（1）脱氨基作用 氧化脱氨基作用：转氨基作用；联合脱氨基
（2）脱羧基作用，脱羧产物—胺类物质的生理功能 （3）氨基酸分解产物的转化
4 氨和氨基酸的生物合成
(1) 自然界的氮循环
（2）生物固氮的生物化学
氨基酸的分解与转化
一、氨基酸代谢概况 二、氨基酸的脱氨基作用 三、氨基酸的脱羧基作用 四、氨基酸分解产物的转化
氨基酸代谢概况
食物蛋白质
体蛋白
氨基酸
特殊途径 （次生物质代谢）
生物固氮 硝酸还原
NH4+
-酮酸 CO2 胺
NH3 糖及其代谢
鸟氨酸 中间产物 循环
脂肪及其代 谢中间产物
NH4+ 尿素
TCA
作用特征
作用于多肽链的N-末端
3、4、13 3、4、14
-羧肽水解酶
(-carboxyl peptide hydrolase)
作用于多肽链的C-末端
二羧肽水解酶 (depeptide
hydrolase)
水解二肽
蛋白酶的种类和专一性
编号
名称
作用特征 实例
3、4、2、1 丝氨酸蛋白酶类
活性中心含
(serine pritelnase)
（2）各族氨基酸的前体及相互关系
非 必 需 氨 基 酸 的 生 物 合 成
各
种
丝氨
氨
酸族
His 和 芳香族
基
酸
的
前
丙氨 酸族
体
及
相
互
关
天冬氨
酸族
系
8-丝氨酸蛋白酶结构与催化机制
丝氨酸蛋白酶结构与催化机制---丝氨酸蛋白酶家族分子结构特点、结构功能适应性及催化反应的机制⏹丝氨酸蛋白酶的催化作用机理●丝氨酸蛋白酶:酶家族，包括胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、凝血酶、枯草杆菌蛋白酶、纤溶酶、组织纤溶酶原激活剂等●消化作用的丝氨酸蛋白酶●胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶◆结构上非常相似，包括一级结构和三维结构。
◆催化部位：完全一样，丝氨酸附近的氨基酸顺序相似，具有共同的催化三联体结构。
在具有消化作用的丝氨酸蛋白酶类，其活性中心Ser、His和Asp相临，相互间通过氢键作用，催化蛋白质水解在无底物时，His57未质子化，当Ser195羟基氧原子对底物进行亲核攻击时，His57接受羟基质子，Asp102的COO-能稳定过渡态中His57的正电荷形式，此外Asp102定向His57并保证从Ser195接受一个质子。
咪唑基成为Ser和Asp间桥梁His57 担当酸碱催化Ser195 通过与肽键的共价结合促使肽键断开Asp102功能是定向His57结合部位专一性差别的原因：分子表面的裂隙和口袋底部有天冬氨酸，非极性口袋可以深入带电荷的赖氨酸和精氨酸有静电非极性口袋提供芳香族大的非极性的脂肪酸较浅的口袋有两个较大的缬氨酸苏氨酸挡住，只能让丙氨酸等小分子进入●第一阶段◆水解反应的酰化阶段◆Ser-OH攻击酰胺键，敏感键断裂，胺氮获得咪唑基氢，羧化部分连到丝氨酸羟基上，胺端释放活性部位羰基氧洞疏水性口袋催化三联体一种多肽底物⏹丝氨酸蛋白酶的催化机制Asp102His57Ser195Catalytic Triad H HN C C N [HOOC ]HO CC N C C [NH 2]O 与底物专一性结合Asp102His57Ser195HH O 第一过渡态HH O Acyl-Enzyme中间物的形成●第二阶段--水解反应的脱酰基阶段◆His与H2O形成氢键，氧电子对亲核攻击Ser相连的羧基碳，酯键断裂释放底物，酶恢复自由状态水(第二底物)进入活性位点H OAcyl-Enzyme 水中间物H O第二过渡态O HH OOH去酰化1st substrate2nd productThe proposed completecatalytic cycle ofChymotrypsin(rate enhancement: 109)A Ping-Pong Mechanism1st product⏹丝氨酸蛋白酶的趋异进化和趋同进化●通过基因突变，从同一个祖先取得不同的专一性，称为趋异进化，如丝氨酸蛋白酶的不同的专一性。
fi 丝氨酸蛋白酶 蛋白水解结构域
Fi蛋白酶：揭秘蛋白水解结构域的奥秘1. 引言fi丝氨酸蛋白酶（以下简称fi蛋白酶）是一种重要的蛋白水解酶，其蛋白水解结构域在生物科学领域备受关注。
本文旨在深入探讨fi蛋白酶及其蛋白水解结构域的特性和功能，以及对生物学研究和医学应用的意义。
2. fi蛋白酶的基本概念fi蛋白酶是一类丝氨酸蛋白酶，它具有特殊的蛋白水解结构域，是一种重要的蛋白水解酶。
在细胞内，fi蛋白酶参与多种生物学过程，如蛋白质降解、信号转导、细胞凋亡等，具有重要的生物学功能。
3. fi蛋白酶的结构特点（1）蛋白水解结构域：fi蛋白酶的蛋白水解结构域具有独特的结构特点，其结构域的构象和催化机制是其功能的关键所在。
通过深入研究蛋白水解结构域的结构特点，可以更好地理解其作用机制。
（2）底物特异性：fi蛋白酶的蛋白水解结构域对底物的特异性具有重要意义。
不同的底物结构和序列会影响fi蛋白酶对其的识别和降解，这也是蛋白水解结构域的重要特点之一。
4. fi蛋白酶在生物学研究中的应用（1）蛋白质研究：fi蛋白酶作为重要的蛋白水解酶，在蛋白质研究中具有重要的应用价值。
利用fi蛋白酶可以对蛋白质进行特异性降解，从而研究其功能和结构。
（2）生物医学研究：fi蛋白酶在生物医学研究中也有重要的应用，特别是在药物设计和疾病治疗方面。
通过深入研究蛋白水解结构域的特性，可以为药物的设计和疾病的治疗提供重要的参考和指导。
5. 个人观点与总结通过对fi蛋白酶及其蛋白水解结构域的深入了解，可以更好地理解其在生物学研究和医学应用中的重要作用。
我个人认为，进一步研究蛋白水解结构域的特性和功能，有助于拓展我们对蛋白质降解和信号转导等生物学过程的认识，也为新药研发和疾病治疗提供了新的思路和方法。
fi蛋白酶及其蛋白水解结构域的研究具有重要的科学意义和应用前景。
希望本文能对读者有所启发，也为相关领域的研究和应用提供一些参考和借鉴。
Fi蛋白酶是一种含有fi丝氨酸蛋白酶结构域的重要蛋白水解酶，在生物科学领域备受关注。
蛋白酶ppt课件
*
*
（1）木瓜蛋白酶（EC 3.4.22.2）
• 在pH5的弱酸性条件下最稳定。底物不同，它 的最适pH也会改变，酪蛋白最适pH为7，明胶 则为5。 • 最适作用温度一般在65℃,在较高温度下仍然保 持活性，例如在中性条件下70℃加热处理 30min，对牛乳的凝结活性仅下降20%； • 商品化的木瓜蛋白酶中，真正的木瓜蛋白酶一 般只占可溶性蛋白质总量的10%，另外的蛋白 酶还有木瓜凝乳酶、溶菌酶以及木瓜肽酶等。 在肉品嫩化、啤酒加工中有应用。
* Ser-Ser-Cys-Met-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Leu-Val-Cys-Lys-Lys-As *
Ser-Gly-Cys-Gln-Gly-Asp-Ser-Gly-GlyPro-Leu-His-Cys-Leu-Val-As
Asp-Ala-Cys-Glu-Gly-Asp-Ser-Gly-Gly-Pro-Phe-Val-Met-Lys-Ser-Pr
• 由三个肽链组成，由双硫键将各部分结 合在一起。胰凝乳蛋白酶原A由245个氨 基酸残基（分子量约为25,000），分子中 有五个双硫键，它没有酶的活性；在胰 蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的作用下，裂解 生成了-胰凝乳蛋白酶。
图
1 Cys
胰凝乳蛋白酶原的激活过程示意图
245 胰凝乳蛋白酶原A 胰蛋白酶 15 Arg 16 胰凝乳蛋白酶 146 Tyr B链 15 147 148 149 Ala C链 Thr Asn 245 胰凝乳蛋白酶 Asp Asp 胰凝乳蛋白酶
蛋白酶
第11问题
蛋白酶的分类、常见的种类
3.1.1、蛋白酶的作用
水解蛋白质或多肽中的酰胺键（肽键）。
COOH R1—CH—N—H + HO—C—CH—R2 H O COOH R1—CH—N—C—CH—R2 + H2O H O NH2 NH2
生物化学8
DIFP能使乙酰胆碱酯酶（一种丝氨酸蛋白水 能使乙酰胆碱酯酶（ 能使乙酰胆碱酯酶 解酶）失活。 解酶）失活。乙酰胆碱酯酶的作用是使乙酰胆 碱水解成乙酸和胆碱。 碱水解成乙酸和胆碱。 乙酰胆碱是一种神经传导物质， 乙酰胆碱是一种神经传导物质，本身具有很高 的毒性， 的毒性，完成传递任务后必须立即被水解成无 毒的乙酸和胆碱。 的存在， 毒的乙酸和胆碱。DIFP的存在，使乙酰胆碱 的存在 酯酶不可逆失活， 酯酶不可逆失活，导致乙酰胆碱在生物体内累 积，引起中毒死亡。 引起中毒死亡。 具有类似DIFB的化合物还包括一些著名的有 具有类似 的化合物还包括一些著名的有 机磷杀虫剂，如对硫磷、马来硫磷(结构式书 机磷杀虫剂，如对硫磷、马来硫磷 结构式书 p112)
4.4.5 丝氨酸蛋白酶水解机制
丝氨酸蛋白酶： 丝氨酸蛋白酶： 酶的活性中心有丝氨酸残基， 酶的活性中心有丝氨酸残基，如胰凝乳 蛋白酶、胰蛋白酶、 蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶 含硫的蛋白酶： 含硫的蛋白酶： 活性中心有半胱氨酸， 活性中心有半胱氨酸，如木瓜蛋白酶 含羧基的蛋白水解酶： 含羧基的蛋白水解酶： 如胃蛋白酶
可逆抑制
竞争性抑制作用（ 竞争性抑制作用（competitive inhibition） ）
E+I EI
例: 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用
琥珀酸
丙二酸
非竞争性抑制作用（ 非竞争性抑制作用（noncompetitive inhibition） ）
I E+S →ES →ESI
S →ESI E+I → EI
反应的第一步： 反应的第一步： 酶中“催化三元区” 酶中“催化三元区”的Ser-195羟基对 羟基对 底物肽键的酰基亲核进攻， 肽键的酰基亲核进攻 底物肽键的酰基亲核进攻，形成一个包括 Ser-195的羟基、底物酰基、氨基在内的共 的羟基、 的羟基 底物酰基、 价四面体中间体。 价四面体中间体。
丝氨酸蛋白酶水解机制
丝氨酸蛋白酶水解机制
汇报人：XX
目录
01 02 03 04 05
丝氨酸蛋白酶的分类 丝氨酸蛋白酶的水解机制 丝氨酸蛋白酶水解机制的应用 丝氨酸蛋白酶水解机制的研究进展 丝氨酸蛋白酶水解机制的未来展望
01
丝氨酸蛋白酶的分类
根据结构分类
丝氨酸蛋白酶的分类基于其结构，主要分为三类：丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和天冬氨酸 蛋白酶。
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结构与功能关系的研究进展
酶的定向进化
定义：通过基因 工程技术对酶进 行突变和选择， 以改善酶的活性、 稳定性和特异性
等性质
方法：基于蛋白 质的突变和选择 技术，如随机突 变、基因重组等
应用：在医药、 工业、农业等领 域用于设计和优 化具有特定功能
的酶
进展：随着基因 组学、蛋白质组 学和生物信息学 等技术的不断发 展，酶的定向进 化已成为研究丝 氨酸蛋白酶水解 机制的重要手段
酶的市场：随着 丝氨酸蛋白酶应 用的不断拓展， 其市场需求将持 续增长，推动酶 制剂产业的发展 壮大。
酶的深入研究与发现
酶的结构与功能 关系：深入了解 酶的活性中心和 催化机制，为新 酶发现提供理论
支持。
酶的定向进化： 利用进化工程和 基因工程技术对 酶进行改造，提 高酶的催化效率
和特异性。
酶的组合生物催 化：将不同酶组 合起来，实现多 步生物催化反应 的连续进行，提 高产物的产量和
酶与底物结合：通过与底物特定位点的氨基酸形成共价键，使底物稳定在酶的活性中心附 近。
酶的催化作用：Ser的磷酸化作用使底物活化，促进水分子的亲核进攻，形成新的肽键。
酶的调节作用：通过与抑制剂结合或发生自身修饰等方式，调节酶的活性，控制水解反应 的速度。
丝氨酸蛋白酶水解机制
输标02入题
丝氨酸残基的羟基参与了亲核攻击，进攻肽键的碳原 子，从而打破肽键，实现蛋白质的水解。
01
03
疏水基团则通过与底物结合，稳定底物在活性位点上 的构象，进一步增强了酶与底物的结合力。
04
盐桥通常由一个阳离子和一个阴离子组成，它们通过 离子间的相互作用稳定活性位点的构象，有助于维持 酶的催化活性。
酶的活性位点具有特定的空间构象和化学环境， 能够与特定类型的肽键结合并催化其水解。
丝氨酸蛋白酶的专一性是相对的，一种酶通常 能够催化多种肽键的水解，但其最有效的底物 通常是具有特定序列和结构的肽键。
04
水解机制的调节
共价修饰调节
磷酸化修饰
丝氨酸蛋白酶的磷酸化修饰可以 改变其活性状态，磷酸化后酶的 活性通常被抑制，去磷酸化后酶 的活性恢复。
共激活剂与辅因子
一些丝氨酸蛋白酶需要共激活剂或辅因子来发挥其水解活性，这些分子可以增强酶的催化效率或改变其特异性。
蛋白质-蛋白质相互作用调节
酶与调节因子的相互作用
一些丝氨酸蛋白酶通过与特定的调节因子结合来改变其活性，这些调节因子可能通过诱导酶的构象变 化或影响酶的定位来实现调节。
酶与底物或产物相互作用
研究表明，丝氨酸蛋白酶的活性中心 通常包含一个丝氨酸残基，该残基在 酶的催化过程中起到了关键作用。此 外，活性中心的其他组分，如离子通 道和疏水区域，也对酶的催化过程起 到重要影响。
除了对丝氨酸蛋白酶活性中心的研究 ，人们还发现了一些调节酶活性的因 素，如共价修饰、蛋白质相互作用和 基因表达调控等。这些因素可以影响 丝氨酸蛋白酶的水解活性，进而影响 生物体的生理功能。
根据抑制剂敏感性分类
1 2
丝氨酸蛋白酶
丝氨酸蛋⽩酶丝氨酸蛋⽩酶摘要：丝氨酸蛋⽩酶是⼀种种类丰富的酶类【1】，之所以以此命名是因为在酶的催化活性位点上包含丝氨酸在内的丝氨酸、组氨酸、天冬氨酸组成的催化三联体。
有些丝氨酸蛋⽩酶类如凝⾎酶类蛋⽩酶，其中包括凝⾎酶，组织纤维蛋⽩溶酶原激活剂、⾎纤维蛋⽩溶酶，它们参与凝⾎的发⽣以及炎症应答反应；也有些如胰蛋⽩酶类的丝氨酸蛋⽩酶类的参与消化的酶类，包括胰蛋⽩酶、弹性蛋⽩酶、胰凝乳蛋⽩酶；还有⼀些表达在神经系统中的丝氨酸蛋⽩酶类，这些酶类与神经系统正常的维持或是介导病理情况的发⽣。
其实丝氨酸蛋⽩酶类在执⾏功能的时候也受到许多因素的限制，如受⼀些抑制剂的影响等，这些物质对蛋⽩酶功能的执⾏起到重要的作⽤。
关键词：丝氨酸蛋⽩酶催化机制功能调节酶的功能已知所有的蛋⽩分解酶类丝氨酸蛋⽩酶占到了其中的三分之⼀，这些酶⼜可以细分成很多种类有胰蛋⽩酶、胰凝乳蛋⽩酶、弹性蛋⽩酶、凝⾎酶、纤溶酶、组织纤溶酶原激活剂、神经源类的丝氨酸蛋⽩酶等。
这些酶类具有消化凝⾎、纤溶、消化、受精、⽣长发育、凋亡、免疫等⽅⾯都有重要的作⽤。
酶的催化位点由于丝氨酸蛋⽩酶的种类很多根据其催化的特点以及种树亲疏性可以分成不同的类别，不同的组织器官，不同的⽣物种系中酶的分布与种类是不同的(见表格)。
但是其催化特点通常都是其反应的催化三联体，丝氨酸的亲核攻击，即丝氨酸的羟基攻击酰胺键的羰基碳，但是在⽣物进化的长时间了这种催化活性结构也发⽣了改变。
如在有些酶中其催化三联体不在是固定的丝氨酸、天冬氨酸、组氨酸，⽽是只有丝氨酸与天冬氨酸或是组氨酸的⼀种组成催化活性位点，也有的如组氨酸成对出现于丝氨酸组合形成新的催化结构，但是⽆论怎样其上的丝氨酸残基是固定保守的。
酶的活化对于丝氨酸蛋⽩酶类的活化，⼀般来说是通过对酶前体【2】的加⼯使其形成具有催化活性的酶，或者是通过⼀些辅助因⼦的协同作⽤使其由闭合的⾮活化状态转成活性状态，也有通过信号的捕获诱发⼀系列的级联反应从⽽活化蛋⽩，或是通过⼀些关键因⼦的作⽤使得构想发⽣改变来实现活化等等。
酶的作用机制和酶活性的调节.ppt
O
O
HH
HH33CC
CC OO
OO CC
OO--
+O
O H HH NH
OC HH C HH H
几种常见酶的结构与功能
蛋白酶
• 蛋白酶是催化肽键水解的一类酶的总称。尽管肽键的水解在能量学上 是十分有利的，但如果没有蛋白酶的催化，一个肽键在中性pH和25℃ 条件下大概需要300年~600年的时间才能完成水解。
四面体中间物因肽氧负离子与Ser195以及Gly193之间形成的氢键而得 到稳定，这些相互作用的净效应导致活化能的降低。
肽键断裂，离开基团（原来肽键的氨基一侧作为第一产物）从His57 咪唑环上得到一个质子。原来肽键的羧基一侧通过氢键以及与Ser195形成 的共价键仍然与酶结合。
水进入活性中心，质子化His57使之成为酸。而释放出来的OH-亲核 进攻留下来的多肽羰基碳，于是第二个四面体形的过渡态中间物形成了 。
广义的酸碱催化
溶菌酶Glu35的广义酸催化溶菌酶Biblioteka Glu 35被疏水氨基酸残基所环绕
核糖核酸酶A的广义酸碱催化
静电催化
• 活性中心电荷的分布可用来稳定酶促反应的过 渡态，酶使用自身带电基团去中和一个反应过 渡态形成时产生的相反电荷而进行的催化称为 静电催化。
• 有时，酶通过与底物的静电作用将底物引入到 活性中心。
乳酸脱氢酶催化的酶促反应
What is an isozyme?
(1) Isozymes are physically distinct forms of the same enzyme.
(2) Isozymes may differ from each other by differences in their amino acid sequences or by the presence of different posttranslational modifications in each isozyme.
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16、 业 余 生 活 要有 意义， 不要越 轨。2020年 10月 18日 星期日 2时21分 58秒14:21:5818 October 2020
17、 一 个 人 即 使已 登上顶 峰，也 仍要自 强不息 。下午 2时21分 58秒下 午2时 21分14:21:5820.10.18
谢谢大家
11、 人 总 是 珍 惜为 得到。 20.10.1814:21:5814:21Oct-2018-Oct-20
12、 人 乱 于 心 ，不 宽余请 。14:21:5814:21:5814:21Sunday, October 18, 2020
13、 生 气 是 拿 别人 做错的 事来惩 罚自己 。20.10.1820.10.1814:21:5814:21:58October 18, 2020
4.4.5 丝氨酸蛋白酶水解机制
什么是丝氨酸蛋白酶？
丝氨酸蛋白酶是一个蛋白 酶家族，其激活是通过活 性中心一组氨基酸残基变 化实现的，它们之中一定 有一个是丝氨酸（Ser， serine）。在哺乳类动物 里面，丝氨酸蛋白酶扮演 着很重要的角色，特别是 在消化，凝血和补体系统 方面。
最典型的三种丝氨酸蛋白酶：
(3)丝氨酸蛋白水解酶的空间结构：
X射线衍射法：通常，都是将表达蛋白的基因PCR之后克隆到一种
表达载体中，然后在大肠杆菌中诱导表达，提纯之后摸索结晶条件。 结晶后，将晶体进行x射线衍射，收集衍射图谱，通过一系列的计算， 很快就能得到蛋白质的原子结构。
牛的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶以及住的弹性蛋白酶在结构上很相似， 这三种酶大约由240个氨基酸残基组成，三者的一级结构大约有 40% 是相同的，且活性中心的必需氨基酸也大致相同（Ser、His、Asp）
2.酶活化中心必需基团的测定
(1)活性Ser基团：
二异丙基磷酰氯（DIPF）能特异性与 Ser基团的-OH反应，其结果导致作 为酶活性中心的Ser的残基发生不可 逆失活，此方法可有效确定胰凝乳蛋 白酶中的Ser-195是酶活性中心必需 氨基酸残基。
DIPF作用于动物上时，即可显示出很高的神经毒性，动 物体内的乙酰胆碱酯酶（丝氨酸蛋白水解酶的一种）能够 与DIPF反应，使其自身失活，失去对乙酰胆碱的水解作 用。
3.催化作用机制
（1）结构特性
以胰凝乳蛋白酶举例，其活性中心有三个必需氨基酸残基： Ser-195，His-57和Asp-102，这三部分通过氢键结合，整体呈 三角形，即所谓的“催化三元区”。“催化三元区”的最显著特 征是Ser-195的羟基高度极化，具有很高的亲核进攻能力。
（2）亲核共价催化作用——易形成四联体结构的中间物
乙酰胆碱是一种生物体内常见的神经传导物质，自身具有 很高的毒性，而负责水解完成传递信息任务后的乙酰胆碱 的乙酰胆碱酯酶（乙酰胆碱酯酶可将乙酰胆碱分解成无毒 性的乙酸和胆碱）失活之后就会导致乙酰胆碱在生物体内 不断地积累，最终导致生物中毒死亡。
(2)活性His（组氨酸）基团：
N-对甲苯磺酰苯丙氨酸氯甲基酮（TPCK）其中氯甲基酮基是 一个很强的烷基化剂，它能够与反应中心His-57的咪唑基发 生烷基化反应，并最终引起酶的失活。
Step 1：Ser-195作用于底物的肽键酰基，发起亲核进 攻，形成一个包括Ser-195的羟ep 2：四面体中间物分解，即生成酰基-酶中间物并伴随着C-N 键的断裂。
R1NH2
H2O
肽键断裂之后，R‘-NH2基团作为离去基团从反应体系中 离去，此时水分子进入，其氧原子攻击羰基上的碳原子，从而 又形成了一个水分子参与的四联体中间物。
胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 弹性蛋白酶
同属消化酶系，在胰腺 泡内合成并分泌到十二 指肠中。均可催化肽键 的水解反应，但对肽键 的选择性则有所不同
1.水解作用的动力学模型
胰凝乳蛋白酶不仅可以水解肽键，同时也可以水解一般 的酯键。以对硝基苯酚乙酸酯为例：
胰凝乳蛋白酶
对硝基苯酚乙酸酯
乙酸 对硝基苯酚
这一反应过程具有两相特征：
快速反应相：对硝基苯酚离子快速形成，与酶的浓度 成正比。 恒态反应相：对硝基苯酚离子形成较缓慢，形成速率 恒定。（决定反应速率的关键步骤）
快速反应相过程中酶和底物结合释放出对硝基苯酚离 子，同时形成乙酰基-酶中间体；而恒态反应相过程则 是乙酰基-酶中间体缓慢水解，放出酶，使之与底物相 结合继续释放出对硝基苯酚离子。由于乙酰基-酶的水 解很慢，使体系中酶浓度下降，进而导致对硝基苯酚 释放速率变慢。
14、 抱 最 大 的 希望 ，作最 大的努 力。2020年 10月 18日 星期日 下午2时 21分58秒 14:21:5820.10.18
15、 一 个 人 炫 耀什 么，说 明他内 心缺少 什么。 。2020年 10月 下午2时 21分20.10.1814:21October 18, 2020
Step 3：酰基-酶中间物的解离，这时His-57作为广义酸起催化作用。
9、 人 的 价 值 ，在 招收诱 惑的一 瞬间被 决定。 20.10.1820.10.18Sunday, October 18, 2020
10、 低 头 要 有 勇气 ，抬头 要有低 气。14:21:5814:21:5814:2110/18/2020 2:21:58 PM