洁净室沉降菌测试方法
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文件编号
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A.0
洁净室(区)沉降菌检验方法
页次
生效日期
2020/01/02
1．目的
制订洁净室(区)沉降菌检验方法，对从事测试的工作人员进行培训指导，规范检验方法及操作。
2．适用范围
本方法适用于洁净室(区)或无菌区域（包括超净工作台）沉降菌的检测和环境的验证。
3.职责
质检部对本规程实施负责。
注：如采用其他规格的平皿，可适当增减培养基的量，使之在平皿中形成至少2mm厚的琼脂层。
4.6.1.3制备好的培养基平皿如需存放后使用，应标记名称、制备日期等，存放在2℃～8℃环境下，1周内使用有效。
4.6.1.4使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。
4.6.2测试步骤
≥1000～＜2000
≥2000
2～3
4
8
16
40
80
160
400
800
2
2
2
4
10
20
40
100
200
2
2
2
2
3
6
13
32
63
注：表中的面积，对于100级的净化工作台，指的是送风口面积；对于10 000级，100 000级的非单向流洁净室，指的是房间面积。
b. 在满足最少监测点数的同时，还宜满足最少培养皿数：
4.6测试步骤
4.6.1制培养皿（平板）
4.6.1.1培养基配制：按瓶签上的《用法》进行配制。以下配制量为1000ml。
a.称量：称取瓶签上《用法》标示的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的量，倒入1000ml烧杯中。
b.溶解：在装有大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的烧杯中加入蒸馏水1000ml，搅拌均匀后，加热煮沸至完全溶解。
4.6.5菌落计数：用肉眼直接计数；若平板上有2个或2个以上的菌落重叠、可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.7结果计算:
平均菌落数M =
式中：Ｍ——平均菌落数；
M1——1号培养皿菌落数；
Mn——n号培养皿菌落数；
n——培养皿总数。
4.8判定标准
4.8.1无菌医疗器具洁净室空气洁净度级别表
洁净度级别
c.冷却：冷却至23±2℃。
d.测pH值：使灭菌后为pH7.3±0.2。
e.分装：分装于三角瓶中，盖上硅胶塞，包好。
f.灭菌：121℃15分钟高压灭菌。
4.6.1.2将已灭菌的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基，冷至60℃左右，在无菌操作要求下，倾注约20ml至无菌培养皿中（Φ90mm），加盖后室温放置凝固后。
洁净度级别
所需φ90mm培养皿数（以沉降0.5h计）
100
14
10 000
2
100 000
2
300 000
2
c.采样点的布置：
﹡﹡﹡﹡﹡
﹡﹡
﹡﹡﹡﹡﹡
﹡为采样点
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4.6.2.2.4采样次数：每个采样点一般采样一次。
4.6.2.2.5静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。
4.程序
4.1仪器及要求：
4.1.1仪器：分析天平、干燥箱、超净工作台、压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、恒温培养箱
4.1.2恒温培养箱要求：必须定期对恒温培养箱进行校验。
4.2器具：烧杯（1000ml,2500ml,5000ml）、量筒（1000ml）、三角瓶(250ml,500ml)、硅胶塞、培养皿（φ90mm）
4.6.2.1测试前培养皿表面必须严格消毒。
4.6.2.2采样
4.6.2.2.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
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4.6.2.2.2采样点位置
采样点的位置可以同悬浮粒子测试点
100级
10000级
100000级
沉降菌，个/皿
(φ90mm，0.5h)
≤1
≤3
≤10
4.8.2当阴性对照试验平板有菌生长，供试品的检验无效。
4.5.4测试时间
4.5.4.1在空态或静态a测试时：
1）对单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始；
2）对非单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。
4.5.4.2在静态b测试时：
1）对单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10min自净后开始；
4.6.3.7采样注意事项
a)布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上；
b）采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动；
c）应防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染；
4.6.3培养：全部采样结束后的平板，将培养皿倒置于30℃～35℃恒温培养箱中，培养48h。
4.6.4阴性对照：每次同时放2只培养皿作阴性对照试验。
a)工作区采样点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）
b）可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点
4.6.2.2.3最少采样点数目及其布置：
a.最少采样点数目：
面积
m2
洁净度级别
100
10000
100000
＜10
≥10～＜20
≥20～＜40
≥40～＜100
≥100～＜200
≥200～＜400
≥400～＜1000
4.5.2温度和湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温度控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间为宜）。
4.5.3压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间的压差应≥4.9 Pa，空气洁净度级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净度级别低的洁净室（区）一般要求呈相对正压。
4.3培养基：大豆酪蛋白琼脂（TSA）
4.4器具灭菌：器具（如培养皿等）应按下述方法灭菌：置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。
4.5测试条件
4.5.1测试前，被测试洁净室（区）的温、湿度须达到规定的要求，风速或压差必须控制在规定值范围内。
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2）对非单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。
4.5.4.3在动态测试时，则须记录生产开始时间以及测试时间。
4.5.5测试人员
4.5.5.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.5.5.2空态和静态测试时，室内测试人员不得多于2人，当面积超过100m2又需快速完成测定任务时，可适当增加人数。
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1．目的
制订洁净室(区)沉降菌检验方法，对从事测试的工作人员进行培训指导，规范检验方法及操作。
2．适用范围
本方法适用于洁净室(区)或无菌区域（包括超净工作台）沉降菌的检测和环境的验证。
3.职责
质检部对本规程实施负责。
注：如采用其他规格的平皿，可适当增减培养基的量，使之在平皿中形成至少2mm厚的琼脂层。
4.6.1.3制备好的培养基平皿如需存放后使用，应标记名称、制备日期等，存放在2℃～8℃环境下，1周内使用有效。
4.6.1.4使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。
4.6.2测试步骤
≥1000～＜2000
≥2000
2～3
4
8
16
40
80
160
400
800
2
2
2
4
10
20
40
100
200
2
2
2
2
3
6
13
32
63
注：表中的面积，对于100级的净化工作台，指的是送风口面积；对于10 000级，100 000级的非单向流洁净室，指的是房间面积。
b. 在满足最少监测点数的同时，还宜满足最少培养皿数：
4.6测试步骤
4.6.1制培养皿（平板）
4.6.1.1培养基配制：按瓶签上的《用法》进行配制。以下配制量为1000ml。
a.称量：称取瓶签上《用法》标示的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的量，倒入1000ml烧杯中。
b.溶解：在装有大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的烧杯中加入蒸馏水1000ml，搅拌均匀后，加热煮沸至完全溶解。
4.6.5菌落计数：用肉眼直接计数；若平板上有2个或2个以上的菌落重叠、可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.7结果计算:
平均菌落数M =
式中：Ｍ——平均菌落数；
M1——1号培养皿菌落数；
Mn——n号培养皿菌落数；
n——培养皿总数。
4.8判定标准
4.8.1无菌医疗器具洁净室空气洁净度级别表
洁净度级别
c.冷却：冷却至23±2℃。
d.测pH值：使灭菌后为pH7.3±0.2。
e.分装：分装于三角瓶中，盖上硅胶塞，包好。
f.灭菌：121℃15分钟高压灭菌。
4.6.1.2将已灭菌的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基，冷至60℃左右，在无菌操作要求下，倾注约20ml至无菌培养皿中（Φ90mm），加盖后室温放置凝固后。
洁净度级别
所需φ90mm培养皿数（以沉降0.5h计）
100
14
10 000
2
100 000
2
300 000
2
c.采样点的布置：
﹡﹡﹡﹡﹡
﹡﹡
﹡﹡﹡﹡﹡
﹡为采样点
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4.6.2.2.4采样次数：每个采样点一般采样一次。
4.6.2.2.5静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。
4.程序
4.1仪器及要求：
4.1.1仪器：分析天平、干燥箱、超净工作台、压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、恒温培养箱
4.1.2恒温培养箱要求：必须定期对恒温培养箱进行校验。
4.2器具：烧杯（1000ml,2500ml,5000ml）、量筒（1000ml）、三角瓶(250ml,500ml)、硅胶塞、培养皿（φ90mm）
4.6.2.1测试前培养皿表面必须严格消毒。
4.6.2.2采样
4.6.2.2.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
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4.6.2.2.2采样点位置
采样点的位置可以同悬浮粒子测试点
100级
10000级
100000级
沉降菌，个/皿
(φ90mm，0.5h)
≤1
≤3
≤10
4.8.2当阴性对照试验平板有菌生长，供试品的检验无效。
4.5.4测试时间
4.5.4.1在空态或静态a测试时：
1）对单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始；
2）对非单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。
4.5.4.2在静态b测试时：
1）对单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10min自净后开始；
4.6.3.7采样注意事项
a)布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上；
b）采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动；
c）应防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染；
4.6.3培养：全部采样结束后的平板，将培养皿倒置于30℃～35℃恒温培养箱中，培养48h。
4.6.4阴性对照：每次同时放2只培养皿作阴性对照试验。
a)工作区采样点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）
b）可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点
4.6.2.2.3最少采样点数目及其布置：
a.最少采样点数目：
面积
m2
洁净度级别
100
10000
100000
＜10
≥10～＜20
≥20～＜40
≥40～＜100
≥100～＜200
≥200～＜400
≥400～＜1000
4.5.2温度和湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温度控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间为宜）。
4.5.3压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间的压差应≥4.9 Pa，空气洁净度级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净度级别低的洁净室（区）一般要求呈相对正压。
4.3培养基：大豆酪蛋白琼脂（TSA）
4.4器具灭菌：器具（如培养皿等）应按下述方法灭菌：置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。
4.5测试条件
4.5.1测试前，被测试洁净室（区）的温、湿度须达到规定的要求，风速或压差必须控制在规定值范围内。
有限公司
文件编号
版号
A.0
洁净室(区)沉降菌检验方法
Байду номын сангаас页次
生效日期
2020/01/02
2）对非单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。
4.5.4.3在动态测试时，则须记录生产开始时间以及测试时间。
4.5.5测试人员
4.5.5.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.5.5.2空态和静态测试时，室内测试人员不得多于2人，当面积超过100m2又需快速完成测定任务时，可适当增加人数。