同步荧光光谱法
同步荧光光谱法在环境分析中的应用
同步荧光光谱法在环境分析中的应用环境分析化学是分析化学的一个新分支。
在某种意义上讲,环境科学的发展依赖于环境分析化学的发展。
随着人们对环境问题认识的深入,环保意识的增强,环境分析受到越来越多的重视,已有大量综述性文章发表[3]。
随着有机化工、石油化工、医药工业的发展,以及农药(杀虫剂、除草剂等) 的大量使用,有机化合物对环境的危害和污染日益严重。
目前,有机污染物分析测试的重要对象包括,多环芳烃和有机氯等污染物;与空气污染有关的挥发性有机物、胺类化合物;与水污染有关的表面活性剂;砷、汞、锡等金属有机化合物[3]。
环境有机物的分析手段很多,其中荧光分析法由于灵敏度高和选择性较好等优良性能而得到广泛的应用。
早在16 世纪人们就观察到了荧光现象。
20世纪以来,特别是近几十年,荧光现象在理论和实际应用方面都取得了很大进展,并建立了荧光分析方法[4]。
荧光分析法是通过测量样品的荧光强度,用于定量测定许多无机物和有机物,而又具有灵敏度高、选择性强、试样量少和方法简单等特点的一种很有用的分析手段。
正因为如此,近年来催化荧光法、荧光淬灭法、同步荧光技术以及荧光技术与其他技术联用得以不断涌现和完善,引起了分析界广泛地兴趣和瞩目[4]。
本文主要就近年来同步荧光光谱法在环境有机污染物分析中的应用作一综述,重点是介绍国内的情况。
正文常规的化学分析是在样品沉淀、分离、萃取之后通过重量分析、色层析、光分析、电分析等分析技术来完成的,通常需消耗大量的溶剂和时间,并且在取样和处理过程中产生大量污染物,分析成本高。
荧光技术灵敏度高,但常规的荧光分析法在实际应用中往往受到限制,对一些复杂混合物分析常遇到光谱互相重叠、不易分辨的困难,需要预分离且操作繁琐。
[1]1971 年L loyd首先提出了用同步荧光光谱技术[2]。
和常规荧光分析法相比, 同步荧光分析法具有谱图简化、选择性提高、光散射干扰减少等特点, 并且不需要预分离、操作简便、节省分析成本、缩短分析时间, 尤其适合对多组分混合物的分析[2]。
同步荧光光谱
同步荧光光谱同步荧光光谱是一种光谱技术，它通过同时扫描激发和发射两个单色器波长来获得荧光物质的光谱信息。
这种技术可以提供关于荧光物质的结构、分子间的相互作用以及环境因素等方面的信息，因此在生物、化学、物理和环境科学等领域有着广泛的应用。
同步荧光光谱的基本原理是：当荧光物质受到激发后，它会发射出荧光，而荧光的波长和强度会受到激发波长和周围环境的影响。
通过同时改变激发和发射单色器的波长，可以得到一系列的荧光光谱数据，这些数据可以用于分析荧光物质的光谱特性和分子结构。
相比传统的荧光光谱技术，同步荧光光谱具有以下优点：1.简化谱图：由于同时扫描激发和发射波长，可以得到更为清晰和简单的荧光光谱图，有助于提高分析的准确性和可靠性。
2.提高选择性：通过选择适当的激发和发射波长范围，可以对特定荧光物质进行选择性测定，从而提高测定的灵敏度和特异性。
3.减少干扰：在某些情况下，同步荧光光谱可以减少背景荧光的干扰，从而提高测定的信噪比。
4.获取更多信息：同步荧光光谱可以提供关于荧光物质的结构、分子间的相互作用以及环境因素等方面的信息，有助于深入了解荧光物质的性质和行为。
同步荧光光谱的应用范围非常广泛，例如在生物医学领域中，可以用于研究生物分子的结构和功能，检测生物分子之间的相互作用，以及研究细胞和组织的代谢过程等；在环境科学领域中，可以用于检测水体中的有机污染物、重金属离子等有害物质，研究环境中的光化学反应等；在化学和物理领域中，可以用于研究荧光染料、荧光探针等荧光物质的光谱特性和分子结构等。
总之，同步荧光光谱是一种非常有用的光谱技术，它可以提供关于荧光物质的光谱信息和分子结构等方面的信息，有助于深入了解荧光物质的性质和行为。
随着科技的不断进步和应用需求的不断增长，同步荧光光谱将会得到更广泛的应用和发展。
氨基酸的荧光激发、发射及同步荧光光谱的测量
实验二.氨基酸的荧光激发、发射及同步荧光光谱的测量093858 张亚辉一. 实验目的1.学习荧光分析法的基本原理和LS －55B 发光分析仪的操作。
2.学习同步荧光的操作，了解同步荧光的优点。
二.实验原理荧光是分子从激发态的最低振动能级回到原来基态时发射的光。
利用物质被光照射后产生的荧光辐射对该物质进行定性分析和定量分析的方法，称为荧光分析。
在一定光源强度下，若保持激发波长ex λ不变，扫描得到的荧光强度与发射波长em λ的关系曲线，称为荧光发射光谱；反之，保持em λ不变，扫描得到的荧光强度与ex λ的关系曲线，则称为荧光激发光谱。
在一定条件下，荧光强度与物质浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。
荧光分析的灵敏度不仅与溶液的浓度有关，而且与紫外光照射强度及所选测量波长等因素有关。
酪氨酸(Tyr)、色氨酸（Try ）、苯丙氨酸（Phe ）是天然氨基酸中仅有的能发射荧光的组分，可以用荧光分析法测定。
它们的激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象。
同步扫描荧光光谱技术可以简化、窄化光谱，提高选择性。
三.实验仪器和试剂 1. LS-55型发光谱仪;2. 移液枪(德国BRAND 公司生产);3. 100ml 容量瓶2支; 废液池（烧杯）一只；4. 氨基酸储备液：色氨酸20mg/l ，苯丙氨酸20mg/l.双酚A;5. 去离子水; 四.实验步骤1．打开电脑和光谱仪主机，将仪器预热20分钟左右。
设定仪器参数：全波长预扫描参数，用储备液在100ml 容量瓶中配置溶液，加水定溶后，使得色氨酸浓度为0.1mg/l, 苯丙氨酸1mg/l ；对两种溶液进行预扫描，并记录扫描结果。
同时查看其拉曼波长、瑞利散射波长、以及双倍频峰波长。
2．从预扫描得到激发和发射波长的初步结果（200 –600nm），分别对两种氨基酸溶液测量它们的荧光激发、发射和同步荧光光谱。
激发光谱参数：扫描波长范围200 - 350nm。
emλ(Phe)=287nm，扫描速度=500nm/min, Ex-Slit=5nm, Em-slit=5nm,记录信息；emλ(Try)=357nm, 扫描速度=500nm/min, Ex-Slit=5nm, Em-slit=5nm,记录信息。
导数同步荧光光谱法同时测定食品中的合成色素
导数同步荧光光谱法同时测定食品中的合成色素摘要随着我国时代的发展以及经济社会的繁荣，我国的社会居民在日常的生活过程中加强了对于食品安全问题的关注。
在这样的背景之下，为了进一步削减食品色素对于相关居民身体健康等因素的影响，我国的食品安全部门在食品检测的过程中加强了对于导数同步荧光光谱法的运用。
本文基于此，分析探讨导数同步荧光光谱法的内涵，并就该方法对食品合成色素的检测进行论述。
关键词导数同步；荧光光谱法；食品安全；合成色素引言作为一种常用的食品添加剂，食用色素在食品生产中的运用往往能够提升食品的色彩，从而增强居民的食欲，提升食品的销售量。
但事实上，作为一种化学合成材料，食用色素的过度食用往往也会导致各类食品安全问题，并对社会居民的身体健康状况造成威胁。
本文基于此，分析探讨食品安全监测部门如何采取导数同步荧光光谱法进行食品合成色素[1]的检测。
1 实验分析1.1 仪器与试剂在借助导数同步荧光光谱法进行食品合成色素检测的过程中，检验人员需要采用荧光分光光度计、紫外-可见分光光度计以及分析天平进行相关的作业。
此外，为了确保实验的科学开展，实验检验人员还需要对试剂进行科学的选择。
在本次实验过程中，检验人员需要进行胭脂红标准储备液、日落黄标准储备液、氨-氯化铵缓冲液的配制。
在本次实验的过程中，为了减少溶液杂质对于实验的影响，实验人员所采用的纯净水均为二次蒸馏水。
2 实验步骤在开展导数同步荧光光谱法同时测定食品合成色素的实验过程中，实验人员需要选取-1.0 mL的氨-氯化铵缓冲液放置在比色管中，并取一定量的胭脂红、日落黄标准工作液，定容至2 mL。
随后，实验人员需要将检测的激发波长控制在200～400 nm范围内，并对光谱一阶进行求导工作。
在这一过程中，实验人员在零交点波长处测定出另一物质（日落黄、胭脂红）的导数同步荧光值d F/dλ，最红再以d F/dλ值与所对应物质（胭脂红、口落黄）浓度绘制出标准工作曲线图。
同步荧光光谱在食品检测领域的应用
Sep. 2020 CHINA FOOD SAFETY181食品科技同步荧光光谱是一项新型的检测技术，具有较高的灵敏度和良好的选择性，所以越来越多的科学人员将同步荧光光谱应用到了食品检测领域，对食品中的多组分进行分析，确保食品安全，帮助人们提高生活水平。
1 选择同步荧光光谱的原因在食品检测技术当中，同步荧光光谱分析方法是使用比较广泛的技术之一。
纵观之前常规的化学分析，其主要对需要检测的食品实施分离、萃取等操作，再对分离出来的物质进行分析，分析内容主要包括：重量分析、色层分析、光分析、电分析等技术，这些操作需要耗费大量的溶剂和时间，如果出现差错就需要重头再来。
在实验中会出现大量的污染物，分析成本也比较高。
并且常规荧光技术会受到诸多因素限制，虽然它的灵敏度较高，但是对于一些较为复杂的混合物进行分析时，会出现光谱重叠的现象，进而对光谱分析造成严重的 困扰。
同步荧光技术是一种较新的检测技术，是通过对激发单色器与发射单色器的共同扫描，来实现对荧光光谱图的有效测绘。
且该技术中同步荧光光谱的激发与发射同时进行，而常见的荧光光谱在运行的时候只能通过其中一种来进行，无法两种同时进行。
同步荧光光谱的优点就在于测绘出来的图谱比较简单、灵敏性也比较高、选择性也较强，这样就能避免其他因素对结果造成干扰。
2 同步荧光光谱在食品检测领域中的应用同步荧光光谱在食品检测领域中的应用主要体现在：同步荧光光谱在食用油分析中的分析、同步荧光光谱在生活饮用水分析中的应用以及食品添加剂分析中同步荧光光谱的 应用[1]。
2.1 同步荧光光谱在食用油中的分析主要选择煎炸了8 h 的花生油以及大豆油进行检测，对于大豆油以及花生油的具体同步荧光光谱图进行详细的分析，在这个过程中会发现：其在360 nm 左右的荧光峰会伴随着大豆油煎炸温度的升高逐渐的消失，在大致440～470 nm 的范围之内呈现全新的荧光峰，并且随着煎炸温度的升高，荧光的强度也会增加。
同步荧光法测量步骤_林美娜
同步荧光光度法测定混合溶液浓度同步荧光法技术是由Lloyd首先提出的，它与常用的荧光测定方法最大的区别是同时扫描激发和发射两个单色器波长。
由测得的荧光强度信号与对应的激发波长(或发射波长) 构成光谱图，称为同步荧光光谱。
操作过程中，对激发波长和发射波长的波长差Delta的设置最为重要。
参数设置完毕后，对混合溶液进行扫描，由于每个混合液浓度均对应一个荧光强度值，根据浓度和荧光强度的线性关系绘制标准曲线，待测物只需按相同方法扫出其荧光强度，内插即可获得浓度值。
具体步骤如下：（1）Delta的选取（可查阅相关文献，也可根据实验获得）（2）激发波长范围的选取（根据溶液本身性质）（3）扫描，获得同步荧光光谱图（4）配置不同浓度混合溶液，根据标准浓度与各自物质特征波长下的荧光强度值绘制标准曲线（5）对未知浓度进行扫描，获得各个物质特征波长下的荧光强度，求得混合物中各物质浓度。
（1）~（3）具体操作如下：点击桌面文件夹Cary Eclipse，双击Scan 进入下面界面点击Setup，出现以下界面点击Synchronous，设置波长差Delta，激发波长范围start和stop。
具体混合物的波长差可通过实验获得，对于L-色氨酸和L-酪氨酸混合物，Delta通常取70nm，波长范围200~350。
设置完毕后点击OK点击Start开始扫描获得混合溶液的荧光光谱曲线，两个波峰分别为L-酪氨酸和L-色氨酸的特征峰，其特征波长分别为225.93nm，279.07nm。
（4）标准曲线的绘制配置浓度1~7μmol/L的混合溶液，扫描后获得波长为225.93nm和279.07nm 处的荧光强度。
L-色氨酸和L-酪氨酸浓度各自为1μmol/L时的光谱图L-色氨酸和L-酪氨酸浓度各自为2μmol/L时的光谱图L-色氨酸和L-酪氨酸浓度各自为4μmol/L时的光谱图L-色氨酸和L-酪氨酸浓度各自为6μmol/L时的光谱图根据标准浓度和225.93nm 、279.07nm 处的荧光强度关系绘制标准曲线，如下图。
同步荧光光谱分析法在海面溢油鉴别中的应用研究
５ ０Ｄｎ范 围内数据进行聚类分析 ，可以将原油样品和风化 样品完全 区分开 ，不 同海区 、 同采集 时间的 Ｏ ｉ 不
原油样品可大致分开。作为溢油鉴别的一种辅助方法 ，同步荧光光 谱分析 法能够对 可疑油源 及溢油样 品实
现 初 步 筛选 。 关键词 同 步荧 光 光 谱 ； 类 分 析 ；溢油 ；鉴 别 聚 文献标识码 ： Ａ Ｄ ：１． ９４ ｊｉ ｎ １０ ５ ３ ２ １ ）１０ ５ —４ ＯＩ ０ ３ ６ ／． ｓ ．０ ００ ９ （ ０ １０ —１ ４０ ｓ 分 析 了 ２ 不 同 原 油 样 品及 一 系 列 风 化 原 油 油 品 进 行 同步 ２个
荧光光谱 ，并应 用聚类 分析方 法对数据进 行处理 ，比较不 同
样 品 间的 相 似 性 ，可 以 为 实 际 海 洋 溢 油 的 快 速 鉴 别 中 Ｇ Ｃ和
Ｇ － Ｃ ＭＳ进一步分析提供初 步筛选 ，减小工作量和分析成本 。
１ 实 验 部 分
１ １ 样 品和 试 剂 ．
权益具有重要 意义 。现有溢油鉴别方 法包括 中红外法 、紫外
中 图 分 类 号 ： ５ ． ０６ ７３
引 言
随着石油 工业 和海上油运 的发展 ， 海上溢油事 故不断发
生 ， 洋 石 油 污 染 已引 起 各 国的 关 注 。在 发 生 溢 油 污 染 事 故 海 后 ， 时 准 确 地 鉴 别 溢 油 来 源 ， 海 面 环 境 管 理 及 维 护 海 洋 及 对
统＿ ，我国也规定将荧光 光谱 法 、 ２ ］ 红外光谱 法 、 Ｃ作为溢油 Ｇ
鉴 别 的标 准 方 法 Ｌ 。 ３ ｊ
荧光光谱法作为 目前鉴别油污染 的重要 手段之一 ，具有
灵 敏 度 高 、 择 性 好 、取 样 量 少 、分 析 速 度 快 、费 用 低 等 优 选
同步荧光法测定药片中的维生素B2和B6
同步荧光法测定复合维生素B片中的维生素B2和B6一、实验背景B族维生素是一类重要的水溶性维生素，人体缺乏B族维生素可导致多种疾病的发生，如口角炎等。
而人体自身无法合成B族维生素，因此只能通过摄取食物获得，也可通过服用维生素药片加以补充。
因此，各种维生素B的含量测定对于复合维生素B片的质量评价十分重要。
二、实验目的1、学习和掌握同步荧光光谱法测定的原理。
2、学习和掌握荧光分光光度计的使用方法。
3、学习用标准曲线法进行定量分析。
三、实验原理B族维生素中，维生素B2和维生素B6为荧光物质，因此可采用荧光光谱法对其进行定量测定。
但由于它们的荧光光谱部分重叠，从而影响了同时定量分析的准确性。
同步荧光光谱法是荧光分析中的一种重要技术。
与常规荧光分析法相比，同步荧光分析法具有简化谱图、提高选择性、减少光散射干扰等特点，尤其适合多组分混合物的分析。
同步荧光分析法与常规荧光测定方法最大的区别是：同时扫描激发和发射两个单色器波长，由测得的荧光强度信号与对应的激发波长（或发射波长）构成光谱图，称为同步荧光光谱。
在同步荧光测定中，当实验条件一定且被测组分的浓度较低时，其同步荧光信号强度I与浓度c成正比，即I = K c据此可对被测组分进行定量分析。
本实验采用同步荧光光谱法对复合维生素B片中的维生素B2和维生素B6进行同时测定。
以维生素B2和维生素B6混合标准溶液的同步荧光光谱强度对其浓度绘制标准曲线，再根据被测样品溶液的同步荧光强度，由标准曲线计算出复合维生素B片中维生素B2和维生素B6的含量。
四、仪器与试剂1、仪器F-4600荧光分光光度计（日立），1cm石英样品池，分析天平，研钵，25mL、100mL容量瓶，5ml、10ml吸量管，吸耳球。
2、试剂维生素B2（40µg/mL），维生素B6（5µg/mL），0.2mol/L Na2HPO4-0.1 mol/L 柠檬酸缓冲溶液（pH 7.0），复合维生素B片。
同步荧光光谱法在分析化学中的应用研究综述
149荧光分析法诞生于19世纪60年代，由于该方法的选择性较好、测定参数多（比如荧光的寿命、荧光的量子产率、激发波长、发射波长和荧光的各向异性等等）、灵敏度高、检测方法多样化，可根据样品的实际测量条件适当调整方法，对其加以选择，故而总结出该方法的适用性较强、选择性高和线性范围较宽等特点，是一种简便又实用的化学分析技术[1]。
近年来，生物科学的快速发展对分析化学领域的要求更加严格，也创造了更多机遇，大量的新课题集中出现，尤其是对多肽、核酸以及蛋白质等生物大分子的研究分析，还有其他生物药物分析，以及超微量和超痕量生物活性分析，微生物分析也被研究。
荧光光谱除了以上谈到的用于生物科学领域的分析研究以外，还多被用于多环芳烃的分析研究。
上世纪中后期，随着工农业的飞速发展，大量的煤炭、石油不仅在工业生产和交通运输中广泛应用，连百姓日常生活也经常使用，这类燃料的使用会产生大量多环芳烃类物质，经研究发现该类物质是导致目前癌症发病率居高不下的原因之一，现已成为全球各国共同关注的有机污染物[2]。
该类有机污染物不仅具有毒性，而且可在环境中持续累积，以及它的半挥发性使得其可在环境中长久的存在下去，因此这种多环芳烃也被归纳到持久性有机污染物（POPs）中。
多环芳烃即为2个或2个以上的苯环连在一起的有机化合物。
苯环会以2种方式连在一起：其一，非稠环型，每个苯环提供一个碳原子来使得苯环之间相连，典型的有联苯、联三苯等；其二，稠环型，2个苯环共同拥有2个碳原子，例如萘、蒽等。
通常说的多环芳烃一般是指第2种，稠环型化合物。
这类多环芳烃的数量多、分布范围广，人类长期暴露在这类化合物中，免疫系统和生殖系统都会被破坏，还会致癌。
现在已经有400余种多环芳烃及其衍生物被确定为具有致癌性，占致癌物总数的三分之一以上[3]。
因此，寻找有效的分析检测方法（荧光光谱技术）测定出环境中、食物中的该类物质，可最大限度地减少该类有机污染物对人类以及其他生物的危害。
同步荧光光谱操作规程(3篇)
第1篇一、仪器及材料1. 仪器：同步荧光分光光度计2. 材料：样品、溶剂、比色皿、荧光标准品等二、操作步骤1. 开机与预热（1）开启计算机，待系统启动完毕；（2）开启同步荧光分光光度计主机电源，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色；（3）待主机预热15-20分钟，确保仪器稳定运行。
2. 参数设置（1）点击软件界面中的“设置”按钮，进入参数设置界面；（2）选择“同步荧光”模式，设置激发波长和发射波长范围；（3）调整扫描速度、灵敏度等参数，确保数据采集准确；（4）设置记录数据的时间范围，如5秒、10秒等。
3. 样品准备（1）将样品稀释至适当浓度，确保比色皿中样品体积不超过其最大容量；（2）使用溶剂将样品配制成待测溶液；（3）使用滤纸将比色皿擦拭干净，确保无气泡和杂质。
4. 上样与测量（1）将待测溶液加入比色皿中，注意避免产生气泡；（2）将比色皿放置于同步荧光分光光度计样品室内；（3）点击软件界面中的“测量”按钮，开始同步荧光光谱扫描；（4）观察扫描结果，记录激发波长、发射波长、荧光强度等数据。
5. 数据分析（1）将扫描结果导入分析软件，如Origin、Excel等；（2）对数据进行处理，如绘制激发光谱、发射光谱、同步荧光光谱等；（3）分析样品的荧光特性，如荧光强度、荧光寿命、荧光偏振等。
6. 关机与注意事项（1）完成测量后，点击软件界面中的“关闭”按钮，退出同步荧光分光光度计软件；（2）关闭主机电源，待Xe LAMP熄灭后，关闭计算机；（3）保持仪器整洁，避免灰尘和杂质进入；（4）注意安全操作，避免触电和仪器损坏。
三、注意事项1. 样品浓度和溶剂的选择应适宜，以确保比色皿中样品体积不超过其最大容量；2. 比色皿应使用滤纸擦拭干净，避免产生气泡和杂质；3. 同步荧光光谱扫描过程中，避免震动和噪音干扰；4. 数据分析时，注意比较不同样品的荧光特性，以便进行准确判断。
通过以上操作规程，您可以顺利完成同步荧光光谱实验。
同步荧光技术
同步荧光分析法在研究蛋白质与物质相互 作用主要在两个方面： 作用主要在两个方面： 1.蛋白质分子的内源荧光被猝灭或敏化程 1.蛋白质分子的内源荧光被猝灭或敏化程 度； 2.主要利用色氨酸最大发射波长的位移来 主要利用色氨酸最大发射波长的位移来 判断蛋白质的构象变化。 判断蛋白质的构象变化。
Cu(Ⅱ)对BSA同步荧光的影响[5] Ⅱ 对 同步荧光的影响
如测定奶粉中VB1 如测定奶粉中VB1 和 VB6的含量 VB1为 VB6的含量[3]，VB1为 非荧光物质， 非荧光物质，通常测 硫胺素氧化物的荧光 强度， VB1、VB6共 强度， 在VB1、VB6共 存时，光谱部分重叠， 存时，光谱部分重叠， 因此选择合适的波长 差同步扫描， 差同步扫描，方法简 单快速，效果良好。 单快速，效果良好。
Intensity
20 15 10 5 0 200
250
300
350
400
450
W a v e le n g th (n m )
∆λ=60nm
35
280nm
30 25
Intensity
20 15 10 5 0 200
250
300
350
W a v e le n g th (n m )
∆λ=15nm
同步荧光光谱用于蛋白质构象的变化： 同步荧光光谱用于蛋白质构象的变化： 色氨酸残基的最大发射波长与其所处环境 的极性有关。 的极性有关。 对于色氨酸残基： 对于色氨酸残基： 红移—环境的疏水性降低— 红移—环境的疏水性降低—肽链的伸展程 度增加 蓝移—环境的疏水性增强— 蓝移—环境的疏水性增强—大分子趋向于 折叠态
目前研究工作进展
钥孔戚血蓝蛋白的同步荧光光谱研究
荧光光谱
同步荧光光谱法共79页文档
51、山气日夕佳，飞鸟相与还。 52、木欣欣以向荣，泉涓涓而始流。
53、富贵非吾愿，帝乡不可期。 54、雄发指危冠，猛气冲长缨。 55、土地平旷，屋舍俨然，有良田美 池桑竹 之属， 阡陌交 通，鸡 犬相闻 。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢
美谷酶标仪 同步荧光光谱
美谷酶标仪同步荧光光谱
美谷酶标仪的同步荧光光谱是一种用于分析样品中荧光特性的技术。
它通过在激发波长和发射波长两个方向上同时扫描样品，以获取样品的同步荧光光谱。
同步荧光光谱的原理是基于荧光物质的分子在受到激发后会发射出荧光，这个荧光具有特定的波长和强度。
通过调整激发波长和发射波长，可以获取样品的荧光特性。
在美谷酶标仪中，同步荧光光谱技术被广泛应用于生物样品分析、药物筛选、环境监测等领域。
它可以用于检测样品中荧光标记物的浓度和分布，以及研究荧光标记物的动力学过程等。
同步荧光光谱技术的优点包括高灵敏度、高选择性、高分辨率等。
它可以提供比常规荧光光谱更丰富的信息，包括样品的荧光特性、分子结构和动力学过程等。
此外，同步荧光光谱还可以用于研究生物分子相互作用和药物作用机制等。
需要注意的是，同步荧光光谱技术需要使用特定的荧光标记物和样品处理方法，因此在使用前需要根据具体情况进行选择和优化。
此外，操作人员也需要经过专业的培训和技术指导，以确保实验结果的准确性和可靠性。
同步荧光光谱分析法的应用及新进展
• 2.主要利用色氨酸最大发射波长的位移来判断蛋白质的构 象变化。
Cu(Ⅱ)对BSA同步荧光的影响[5]
• 现象：随着Cu(Ⅱ)浓度的增大，酪氨酸残基特征特征荧光 光谱峰和色氨酸光谱峰均略有红移。
• 结论：Cu(Ⅱ)的引入使得BSA的构象发生了改变，使得色 氨酸和酪氨酸的残基所处的微环境疏水性略有减小，表明 整个BSA大分子肽链伸展。使α-螺旋的含量减少。
Δλ=60nm
30 25 20
Δλ=15nm
Fluorescence intensity/a.u.
a k
12 10 8 6 4 2 0 250 300
a k
Intensity
15 10 5 0 -5 200
250
300
350
350
wavelength(nm)
Wavelength(nm)
进一步工作
同步荧光光谱分析法的应用
2013级分析化学 路以洋
• 1 简介 • 2 实际应用 • 3 目前工作
同步荧光分析法
• 常用的荧光测定方法是确定激发（或发射）波长在一定波 长范围内扫描发射（或激发）光谱。同步荧光扫描技术与 常用的荧光测定方法最大的区别是同时扫描激发和发射两 个单色器波长由此测得的荧光强度信号与对应的激发波长 (或发射波长)构成光谱图， 称为同步荧光光谱。 • 习惯上所说的同步荧光是恒波长同步荧光
• 同步荧光光谱用于蛋白质构象的变化。色氨酸残基的最大 发射波长与其所处环境的极性有关。 • 对于色氨酸残基：红移—环境的疏水性降低—肽链的伸展 程度增加。 蓝移—环境的疏水性增强—大分子趋向于折叠态。
• 同步荧光分析法在研究蛋白质与物质相互作用主要在两个 方面： • 1.蛋白质分子的内源荧光被猝灭或敏化程度；
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节检测器相角至该荧光光谱和混合物的荧光 光谱重叠，则可得到与另一组分正交的相角。 (2)使用任何一组分的纯溶液以确定检测器的相 角。
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当用相灵敏检测器在各种不 同检测器相角测绘样品的相灵敏荧光 光谱。对于单一化合物，其荧光峰波 长基本上保持不变而与检测器相角无 关。如果不是均匀的发射，则荧光峰 随着检测器相角而改变，在不同检测 器相角得到的相灵敏光谱是鉴别不均 匀发射的有力工具。
激发光源、时间延迟设备、激发单色器、 样品池、荧光单色器及设有门控的检测器
1、激发光源 短脉冲的激发光源
闪光灯
氮闪光灯 线 氢闪光灯
氘闪光灯
几条高强度射 连续线 强度低
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氮分子激光器
337.1 nm
激光器 氩离子激光器
351 nm
染料激光器 波长
所需
光子通量大、峰值功率高、单色性好、发 生的光脉冲持续时间短，激光荧光法具有 较高的灵敏度和选择性。
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（2）定量依据
I S (e,x e) m K E C X (e) E x b M (e) m （1）
E X 激发光谱强度分布
E M 发射光谱强度分布
emex
ISKC EX b(em )EM(em ) ISKC EX b(ex )EM(ex)
（2） （3）
（2）同步扫描激发波长时的发射光谱
相灵敏荧光光谱，即为在固定时间的 荧光光谱。
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若样品溶液中含有 A、B 两种荧光体， 它们的荧光寿命分别为A和B。
F (, t ) F A () m A st i n A ) F B m ( B st i B n ) (
F ( ,D ) F A ( ) m A cD o A ) s F B ( ) ( m B cD o B )s(
在松弛过程中，能量有所降低，因而发 射向长波位移。
时间分辨荧光法可记录不同时间的发射 光谱，因而可测量松弛时间。
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例1 4-氨基苯邻二酰亚胺（4-AP）的丙醇溶 液
在不同的温度下的时间分辨的荧光
光谱室图温下， -132℃ 荧光光谱与时间t无关
在-77K，荧光光谱与t 有关
在 4ns， 溶剂还未重新取向 在23ns， 溶剂取向已完成
m 越小 发射光被调制的幅度越小
随 的增大而增大，寿命越长，延迟的 越大。
当荧光分子的寿命越长，发射相对于激发延迟 的时间就越长。
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2、多指数衰变的荧光
如果样品中含有两种荧光体，或者单一 荧光体而进行进一步激发态反应，则荧光是双 指数衰变。如果进行多步反应，则荧光是多指 数衰变。
由 和 m 所计算的 是表观荧光寿命。
如采用相灵敏检测器的相荧光计，
单一荧光体
F (t) 1 m L m si tn ) (
m L — 激发光的调制度（或振幅） m — 去调制因素
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对于相灵敏检测器
F (,D ) k( F )co D s )(
F ( ) — 稳态荧光光谱 D — 检测角度
在不同相角 D 测定荧光光谱，称为
NOR. EM. SCAN
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em /nm
1、固定波长的同步荧光光谱 (Constant wavelength synchronous luminescence , CWSL)
(1) 在同步扫描中，使激发波长与发射波长保
持固定的波长间距，即emex
常数。将同步荧光信号对发射或激发波长测绘荧 光光谱图，则为固定波长的同步荧光光谱。
对于以光栅为单色器的荧光分光光度计， 只要分别设置激发和发射两个单色器所需的起 始波长，并使它们以同样的速率进行扫描，便 可进行固定波长同步扫描荧光测定。
2、固定能量同步扫描 是非线性的可变角同步扫描，需通过微
处理机控制而加以实现。
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三、应用
1、在多环芳烃分析中的应用 减小光谱的重叠
（1）固定波长同步荧光法用于煤中多环芳烃 的测定
如 i D 90，则该组分的发射被抑制
DA90 F (,A 9 ) 0 F B () m B siB n A )( DB90 F (,B 9 ) 0 F A () m A siB n A )(
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要得到混合物中组分A的稳态光谱，须把 检测器相角调节至和组分B正交。这是很费时
相分辨法的优点 a. 仪器类似于稳态测量的仪器，使用简单； b. 灵敏度高； c. 数据处理快。
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（2）测量参数
a. F(t)-t 曲线
时间分辨
b. m. .
相分辨
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（3）从实验的观点，相分辨有下列优点： ➢ 在时间分辨的方法中，测量的延迟信号的去 卷积对于计算测量系统的限定时间的响应是必要的， 而相分辨法不受此限制； ➢ 相分辨法允许不同方向的直接测量。如在各
dN(t)(k)N(t)
dt
N(t)
dN(t)(k)
t
dt
N0 N(t)
0
受激分子的寿命 (k)1
t
N(t) N0e
F(t)N0et F0et
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用 F(t) 或 N(t) 对 t 作
图
F(t) or N(t)
1/e
lg F ( t )
or
lg N ( t )
t
t
lgF(t)lgF0(tlge)
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2、固定能量的同步荧光光谱 constant energy synchronous luminescence (CESL)
Ray
Roman
固定能量的同步荧光光谱，是指在同步扫描 过程中，使激发波长与发射波长之间保持着 固定的能量差。
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( 1 1 )107 常数 ex em
表示波数差 c
（2）二苯并呋喃中痕量咔唑和蒽 5nm
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（3）酪氨酸和色氨酸严重重叠
CWSL
60nm的同步荧光 15nm的征同步荧光
征
色氨酸的光谱特 酪氨酸的光谱特
30nmor 70nm 的二阶导数同步荧光可
对
Trp 和 Tyr 分
50nm辨同步荧光可对Trp、Tyr、Phe分辨
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（4）维生素B1、B2混合物中维生素B1的测定 用铁氰化钾将B1氧化硫胺荧
与 成正比
拉曼光与入射光之间的频率差称为拉曼位移 R
R RayRom
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当 R 或 R 时
固定能量的同步荧光光谱可消除瑞利散射 和拉曼散射，而固定波长的同步荧光光谱只能消除 瑞利散射，使拉曼散射拉宽。二者皆能降低光谱的 复杂性，提高选择性。
F a
b
c
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二、同步扫描仪器设备 1、固定波长的荧光光谱的获得
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2、检测器 如光电倍增管 带有门控的
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三、时间分辨荧光的分析应用
荧光体的荧光寿命的测定 时间分辨荧光光谱 荧光发射的衰变曲线
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1、荧光体混合物中两组分的同时测定
例 用8-羟基喹啉-5-磺酸(R)同时测定Al 和Ga
15.20 ml 样品 + 1 ml 0.045% R +
2 ml 20% NH4Ac (or 20% NH4Cl ) 调 pH 至4.5，稀释至25 ml
（3）同步扫描发射波长时的激发光谱
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（3）同步荧光光谱的特点
a. 同步光谱与激发光谱及发射光谱都有关系。 它同时利用了化合物的吸收特性和发射特性， 因而使光谱分析的选择性得到改善。
b. 有利于多组分混合物的分析。同步荧光光 谱可以把强带增强而减小弱带的干扰。
c. 可消除 Raylei 干扰，使 Roman 强度降低 且拉宽。
氘灯激发
测定荧光强度—时间曲
线
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（1）测定荧光衰变曲线
Al – R Ga – R
10.8ns 4.3ns
6.5ns
可利用上述两个荧光化合物的差异 对它们进行同时测定。
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（2）计算含量
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
铝配合物和镓配合物的 衰变曲线
铝配合物和镓配合物的 对数衰变曲线
比较（1）和（4）的荧光强度得Al的含量
比较（2）和（5）的荧光强度得Ga的含量
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2、芳基的测定 例 用ps双色荧光法对卤素芳族化合物光离解
作用所产生的芳基进行检测
（1）用25ps，266nm 激光脉冲使1-(氯甲基)萘，
1-(溴甲基)萘， 2-(氯甲基)萘， 2-(溴甲 基)萘等化合物离解产生芳基。
（2）在延迟60ps后，用25ps，355nm激光脉冲激 发芳基的荧光，产生橙色荧光，600nm， 10ns，如图所示。
苊(Ace )，2,3-苯并芴(BF)，蒽 (Ant)，
苯并芘(Bap)， 苝(Per) 用标准加入法计算2,3-苯并芴
（2）低温固定能量同步荧光法
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煤液化样品中各种有机物 的同步荧光光谱
煤液化样品的固定波长同步 荧光光谱
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2、同步荧光法在医药检验方面的应用 （1）违禁药品中苯丙胺和吗啡加奎宁麦角酸 二乙酰胺的测定
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The objective of both timedomain and frequency-domain fluorometry is to recover the parameter describing the timeresolved decay.
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一、相分辨法原理 1、单指数衰变的荧光 当样品被激发光激发而发射荧光时，如
激发光的光强度被正弦调制，其角调制频率为， 则发射光也同样被调制。由于吸收和发射之间的 时间延迟，调制的发射光比起激发光在相上延迟 了角。但发射光的调制比起激发光的调制小一些， 也即是发射光的改变部分的相对幅度比起激发光 要小些。