新生大鼠海马神经元的改良培养
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培养 ， ４ 用 ％多 聚 甲醛 固定 ， Ｎ Ｃ 特 异 性 标 记 物 行 Ｓｓ
原 代 细胞 换 成神 经 干 细胞 培 养液 后 ２ ， 成 小 ｄ形 细胞 团 ， ５ 至 ｄ形 成 较大 细胞 球 。将 细胞 球 吹打成 单
细胞 和 小 细 胞 团后 ５ 。 ｄ 细胞 又增 殖形 成 细胞 球 （ 图
ｐｅ ｉ ｎ ， ｃ ｎ ｒｉｓｌ ｔ ｒｉ ｖ ｓｉ ａｉ ｎ ｒｍｅ ｔｗｈｉｈ ｕ ｄｅｌｅ ｕｈｅ ｎ ｅ ｔｇ ｔｏ ． Ｋｅ ｙ ｗｏｒ Ｃｕ ｔ ａ ｉｎ；Ｎｅ ｒ ｌｓｅ ｃ ｌｓ ｄｓ ｌｉ ｔｏ ｖ ｕ ａ ｔ ｍ ｅ ｌ；Ｎｅ ｏ ；Ｒａ ｕｒ ｎ ｔ
某 些 中枢 神经 系统 疾病 ，如脑 卒 中等 常 引起 病 灶 区神 经 元 变性 、 坏死 ， 塞 区形 成 ， 致 患 者运 动 梗 导 障碍 、 失语 、 至痴 呆 。 甚 目前 ， 神经 干 细胞移 植治 疗 为 脑 卒 中等 脑损 伤疾 病 提供 了可 能 ｌ ｌ 经 干 细胞 １ 。神 、 ２
的神 经元 ， 对体 外研 究 神经元 对 不 同刺激 的反应 、 新
药检 测 及 完 成类 似 的细胞 生 物 学任 务 有 重要 意 义 。 同时也 可 为神 经细 胞移植 治疗 提供 种子 细胞 。
泸 州 医学 院学 报
２３ ０
２１ ０ １年
第３ ４卷
（ ｅ ｒｌ ｔｍ ｃｌ ， Ｓ ｓ ｎ ｕａ ｓ ｅ ｓ Ｎ Ｃ ）是一 类具 有 自我 复制 及多 ｅ ｌ
可靠 、 简便 的培 养方 法 。
１ 材 料 与方法
１１ 动物 与试 剂 ．
新生 １ ｄ大 鼠 ２只 ， 由泸州 医学 院实 验 动物 中心
提供 ； 皮 细胞 生 长 因子 （Ｇ ） 自 Ｇ Ｂ Ｃ； ＭＥ 表 ＥＦ购 Ｉ Ｉ Ｄ Ｍ／ Ｆ ２培养基 、 ２培养 基添 加剂 购 自 Ｓｇ ａ公 司 ； 蛋 １ Ｎ ｉｍ 巢 白（ ｅｔ ） 克 隆抗 体 、 管 相 关 蛋 白 （ Ｐ ） 克 ｎ ｓｎ 多 ｉ 微 ＭＡ ２ 单
培养 基 重 悬 细胞 ， 种植 在 ２ ｍｌ 养 瓶 内 ， ５ 培 种植 密 度 为 １ ｌ５ ｌ 于 ３ ｏ ５ Ｃ ２ 箱 中 培养 ２ ｈ 此 时 ｘ ０／ ， ７Ｃ，％ Ｏ 孵 ｍ ４，
瓶 内漂浮 大量 细胞 团块 ． 部分 细胞 贴 壁 ． 少 收集 漂浮
作 者 简 介 ： 小 青 （９ ４ ） 女 ， 师 高 １７一 ， 讲
起 交 织成 网 （ ３ 。继续 培 养 ， 胞生 长 良好 ， 培 图 ） 细 在 养 ２ ｄ后 。 ０ 细胞 逐渐 死 亡 。在分 化后 ７ ｄ将分 化 细胞
行 ＭＡ ２细胞免 疫 化学 检测 。 胞呈 棕 色 ， 阳性 细 Ｐ 细 为
胞 （ ４） 图 。
２１ 神经 干细 胞培 养及 鉴定 ．
Ｒ ３ ３８ 文 献 标 识 码 Ａ 文 章 编 号 １ ０ — ６ ９（ ０ １ ３ ０ ２ — ３ ０ ０ ２ ６ ２ １ ）－ ２ ８ ０
中 图分 类 号
Ｉ ＰＲｏＶＥＤ Ｍ ＣＵＬＴＵＲＥ ＰＰ ｏＦ ＨＩ ｏＣＡＭ ＡＬ ＮＥＵＲｏＮＳ ｏＦ ＮＥｏＮＡＴＡＬ ＲＡＴ
ｉ ｅ ｕ － ｒ ｅ ｍｅ ｉ ｍ ｏ ｔ ｉ ｉ ｇ Ｎ２ ｓ ｐ ｌ ｍｅ ｔ ｎ ｓ ｒ ｍ ｆｅ ｄ ｕ ｃ ｎ ａ ｎ ｎ ｕ ｐ ｅ ｎ ．Ｒｅ ｕ ｔ ｓ ｌ ｓ：Ｔ ｅ ＮＳ ｒ ｍ ｉｐ ｃ ｍｐ ｓ ｏ ｅ ｎ ｔｌ ｒｔ ｅ — ｈ Ｃｓ ｆｏ ｈ ｐ ｏ ａ ｕ ｆ ｎ ｏ ａ ａ ａ ｘ
泸 卅 医 学 院学 报 Ｉ
２ ２８
２１ ０ １年
第３ ４卷
第 ３期
Ｊｕｎ ｌ ｆ ｕ ｈ ｕＭｅ ｉａ Ｃ ｌ ｇ Ｖｏ．４ ｏ ｒ ａ ｚ ｏ ｄｃｌ ｏｌ ｅ ｏＬ ｅ １ Ｎｏ３ ２ ３ ． ０１ １
毫
害
新 生大 鼠海 马神 经元 的改 良培 养 木
神经 元是 中枢 神 经系 统 中高度 分 化 细胞 ，在 出
生后 不 能 有 丝分 裂 ， 能传 代 ， 受 损 后 不 能再 生 ， 不 在 其体 外培 养条 件下 也难 以增殖 ，故 神 经元 的培养 主
要用 于原 代培 养 。而 神经 胶质 细胞 有 较强 的存 活能 力， 在体 外培养 能 分裂 增殖 ， 可进行 传 代 培养 。神 经
壁 生长 ， 除 Ｅ Ｆ继 续培 养 ２ ｈ 在 细胞 球边 缘伸 出 撤 Ｇ ４，
ｎ ｓ ｎ细胞 免疫 化 学检测 ，一部 分细 胞球 继续 培养 ， ｅｔ ｉ 其培养液撤除 Ｅ Ｆ Ｇ ，加 入 １ ２培养 基 添 加 剂 ， ％Ｎ 每 ３ ｄ换培 养液 １次 ，培 养 ７ ｄ后 用 ４ ％多 聚 甲醛 固定 ，
通 讯作 者 ： 朝 鲜 （ ９ ９ ， ， 授 杨 １ ６ 一） 男 教
第 ３期 高 小 青 等 ： 生 大 鼠 海 马 神 经 元 的 改 良培 养 新
２９ ２
的细 胞 ， 心 ， 上 清 ， 入 神 经 干 细胞 培 养 液 （ 离 弃 加 含
Ｅ Ｆ ２ ｔ ／ ｌ ２培养 基 添 加 剂 ） 悬 细 胞 ， 用 Ｇ ０ｚ Ｌ，％Ｎ ｇ 重 再 吸管反 复 吹打 ， 至形 成 单 细胞 悬液 ， 置 ３ ℃，％ 直 放 ７ ５ Ｃ ： 箱 中， Ｏ孵 ２或 ３ｄ更 换 １ 培 养 液 。培 养 ５ 次 ｄ左 右， 细胞 成 球 ． 细 胞 球 吹 打成 单 细 胞 和小 细 胞 团 ， 将 换 培养 液继 续培 养 。取 第 ２代 细胞 球 接种 到经 多 聚 赖 氨酸 处理 的玻 片 上 ， 部 分 细胞球 贴 壁 ６ 一 ｈ后 终 止
１２ 新生 大 鼠神经 干细胞 的培 养 、 ． 分化及 鉴定 取新 生大 鼠大 脑组 织 ， ０Ｏ ｍｏ Ｌ磷酸 缓 冲液 用 ．ｌ ｉ ／
（Ｂ ） Ｐ Ｓ 冲洗 ， 去 脑膜 和 血 管 ， 剥 在解 剖 显 微 镜 下剪 取
元 体 外培 养模 型 和标 准体 系对 于 中枢神 经 系统 疾病
高小 青， 杰 邓 莉， 侃 ， 朝鲜 ， 杜 ， 郭 杨 王特为
（ 州 医 学 院 ： 学 基 础 研 究 中 心 ；教 务 处 ， 泸 医 四川 泸 州 ６６０ ） ４０ ０
摘 要
目的 ： 讨 体 外培 养 高纯 度 神 经 元 的方 法 。 方 法： 外 培 养 新 生 大 鼠 海马 神 经 干 细 胞 ， 使神 经干 细胞 在 无 血 清 Ｎ２ 探 体 再
隆抗 体购 自武汉 博 士德公 司 。
向分 化潜 能 的细胞 ，在 一定 条 件下 向神 经元 和 胶质 细胞 方 向分化 。 单纯 神经 干细 胞移 植入 脑 内后 ， 但 多 数 干 细胞 向胶 质细 胞分 化 ，而 向神 经元 方 向分 化较 少 ［ 因此 ， 果 能在体 外建 立一 种 高效 、 定 的神经 ３ ｊ 。 如 稳
细胞 移植 治疗 有重 要 意义 。本 实验 通过 在 体外 培养 新 生 大 鼠海 马神经 干 细胞 。在 无 血清 条件 下使 其 向
海 马 组 织 ， 成 约 １ ｍ。 小 ， 移 入 离 心 管 ， 吸 剪 ｍ 大 转 用
神 经元 方 向分 化 ，为 获得 高纯 度神 经元 提 供 了一个
ｐｒ ｓ ｅ ｅ ｔｎ，ａ ｄ ｍｏ ｔｄ ｆｅ ｅ ｔａｅ ｅｌ ｆ ＮＳＣｓ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ Ｍ ＡＰ２ ｓ ｏ ａ ｉ ａｌ ｅ ｅ ａ ｆｅ ｅ ｔａ ｅ ｅ ｌ ｘ ｅ ｓ ｄ ｎ ｓｉ ｎ ｓ ｉｆｒ ｎ ｉｔ ｄ ｃ ｉｓ ｏ ｘ ｒ ｓｅ ，ｐ ｒ ｄ ｃ ｌｙ ｓ ｖ ｒ ｌｄｉ ｒ ｎ ｉ ｔｄ ｃ ｌｓ ｅ — ｆ
ｐ ｅ ｓｄ Ｇ ＡＰ Ｃｏ ｃｕ ｉｎ Ｈｉｈｙｐ ｒ ｅ ｅ ｒ ｎｃ ｎｂ ｂａｎ ｄ ｂ ｅｍｅｈ ｄ ａ ｏ ｔｄ ｂ ｕｈ ｒ ｎ ｔｅ ｅ — ｒｓｅ Ｆ ． ｎ ｌｓｏ ： ｇ ｌ ｕ ｉ ｄｎ ｕ ｏ ａ ｅｏ ｔｉ ｅ ｙｔ ｔｏ ｄ ｐｅ ｙａ ｔｏ ｓｉ ｈ ｘ ｉ ｆ ｈ
基 金 项 目 ： 川 省教 育厅 项 目 （０ ６ １ ５ ； 川 省 科 技 厅 项 四 ２ ０ Ａ ５ ）四
目 （０ ６１— ０ — ） ２ ０ Ｊ ３ ０ ５ １
管均 匀机 械 吹 打 ，使 其 成 细胞 悬 液 ，Ｏ ０ ｍｉ 心 ｌ ０ ｄ ｎ离 １ ｍ ｎ 弃 上 清 ， 入 １ ％胎 牛血 清 Ｄ Ｍ Ｆ ２ １１ ０ ｉ， 加 ０ ＭＥ ／ １ （ ：）
图 １培 养 的细 胞 球 （ １０ × ０）
图 ２细 胞球 抗 ｎ ｓｎ染 色 阳性 （ １０ ｅｉ ｔ ｘ ０）
图 ３神 经 球 分 化 ７ ｄ细 胞 （ ｌ ｏ ｘ ｏ）
图 ４分 化 细 胞 抗 Ｍ ＡＰ ２染 色 陛 （ ０ ｘ１ ０）
３ 讨 论
胶 质 细胞 可 以提供 神 经元 营养 因子 ，有 维 持神 经元 存 活 和促 进神 经元 突起 生 长 的功 能 ，但 是 过度 生 长 不仅影 响 对神 经元 的 观察 ，而 且抑 制神 经元 的生长 和分化 ， 而造 成神 经元 提早 退化 。 反 因此获 得高纯 度
Ｇａ ａ ｑ ｎ ，ｔａ ｏ Ｘｉｏ ｉ ｇ ｅ ｌ
Ｄ ｐ ｒ ｅ ｔｆＡ ａ ｍ ｎ ｅ ｒｂｏｏｙ Ｌ ｚ ｏ ｄｃｌ ｏｌ ｅ ｅ ａｔ ｎ ｏ ｔ ｙａ ｄＮ ｕｏ ｉｌ ， ｕ ｈ ｕＭｅ ｉａ Ｃ ｌ ｇ ｍ ｎｏ ｇ ｅ Ａ ｓ ａｔ ｂ ｔ ｃ Ｏｂｅ ｔ ｅ Ｔ ｖ ｓｇ ｔ ｔｅｍ ｔｏ ｆ ｂａｎｎ ｉ ｏ ｔｎ ｏ ｎ ｕｏ ｉ ｏ ｔｏ ｓ Ｈ ｐ ｒ ｊｃｉ ： ｏｉ ｅｔ ａｅ ｈ ｅｈ ｄｏ ｔｉｉｇｈｇ ｃ ｎｅ ｔ ｆ ｅ ｒｎｉ ｖｔ ． ｈ ｄ ： ｉ— ｖ ｎ ｉ ｏ ｈ ｎ ｒ Ｍｅ ｐ ｃ ｍ ｌ ｅ ｒｌ ｔｍ ｃｌ （ Ｓ ｓ ｆ ｅｎ ｔ ｔ ｅｅｃ ｌ ｒｄｉ ｖｔ ， ｎ ｅ ｉｅｅｔ ｔ ｅ ｒｎｄ ｅｔ ｎ ｏａ ａ ｎ ｕａ ｓ ｅ ｓ Ｃ ）ｏ ｏ ａａ ｒ ｒ ｕｔ ｅ ｉｏ ａ ｄｔ ｎｄ ｆｒｎｉ ｅ ｔ ｎ ｕｏ ｉ ｃｉ ｅ ｌＮ ｎ ｌａ ｗ ｕ ｎ ｒ ｈ ｆ ａｄｏ ｒ ｏ
１。 ） 对细 胞球 行 ｎ ｓｎ抗 体 细胞 免疫化 学检 测 ， ｅｔ ｉ 细胞 球 及从 细胞 球边 缘 游离 出 的细胞 呈棕 色 ，表 示为 抗
ｎ ｓ ｎ阳性 （ ２ 。 ｅｔ ｉ 图 ）
２２ 神经 干细 胞 向神经 元分 化及 鉴定 － 接 种 于多 聚赖 氨酸 包被 的玻 片 上 的细胞 球呈 贴
添 加 剂 培 养 基 条 件 下 向 神 经 元方 向分 化 。结 果 ： 新 生 大 鼠 海 马 组织 培 养 出 的 神 经 干 细胞 ， 达 巢 蛋 白 ， 经 干 细 胞 的 分 化 细 胞 从 表 神 绝 大 部 分 表 达 ＭＡ ２ 极 少 数 几 个 细 胞 表达 Ｇ Ａ 。结 论 ： 过 本 实验 方 法 可 获 得 高 纯 度 的神 经 元 ， 后续 实 验 奠 定 基 础 。 Ｐ， ＦＰ 通 为 关键词 细胞 培 养 ； 经 干 细 胞； 经 元； 鼠 神 神 大
对 细胞 行神 经元 特 异性 标 记物 Ｍ Ｐ Ａ ２细胞 免疫 化 学 检 测 。Ｄ Ｂ显 色 。阴性对 照 不加 一抗 。 Ａ
２ 结 果
短 小 突起 ， 培 养 时 间延 长 ， 胞球 逐 渐 变 得扁 平 ， 随 细
球 边 缘游 离 出的细 胞 增 多 ， 突起 增 长 ， ７ ， 至 ｄ 细胞 突
原 代 细胞 换 成神 经 干 细胞 培 养液 后 ２ ， 成 小 ｄ形 细胞 团 ， ５ 至 ｄ形 成 较大 细胞 球 。将 细胞 球 吹打成 单
细胞 和 小 细 胞 团后 ５ 。 ｄ 细胞 又增 殖形 成 细胞 球 （ 图
ｐｅ ｉ ｎ ， ｃ ｎ ｒｉｓｌ ｔ ｒｉ ｖ ｓｉ ａｉ ｎ ｒｍｅ ｔｗｈｉｈ ｕ ｄｅｌｅ ｕｈｅ ｎ ｅ ｔｇ ｔｏ ． Ｋｅ ｙ ｗｏｒ Ｃｕ ｔ ａ ｉｎ；Ｎｅ ｒ ｌｓｅ ｃ ｌｓ ｄｓ ｌｉ ｔｏ ｖ ｕ ａ ｔ ｍ ｅ ｌ；Ｎｅ ｏ ；Ｒａ ｕｒ ｎ ｔ
某 些 中枢 神经 系统 疾病 ，如脑 卒 中等 常 引起 病 灶 区神 经 元 变性 、 坏死 ， 塞 区形 成 ， 致 患 者运 动 梗 导 障碍 、 失语 、 至痴 呆 。 甚 目前 ， 神经 干 细胞移 植治 疗 为 脑 卒 中等 脑损 伤疾 病 提供 了可 能 ｌ ｌ 经 干 细胞 １ 。神 、 ２
的神 经元 ， 对体 外研 究 神经元 对 不 同刺激 的反应 、 新
药检 测 及 完 成类 似 的细胞 生 物 学任 务 有 重要 意 义 。 同时也 可 为神 经细 胞移植 治疗 提供 种子 细胞 。
泸 州 医学 院学 报
２３ ０
２１ ０ １年
第３ ４卷
（ ｅ ｒｌ ｔｍ ｃｌ ， Ｓ ｓ ｎ ｕａ ｓ ｅ ｓ Ｎ Ｃ ）是一 类具 有 自我 复制 及多 ｅ ｌ
可靠 、 简便 的培 养方 法 。
１ 材 料 与方法
１１ 动物 与试 剂 ．
新生 １ ｄ大 鼠 ２只 ， 由泸州 医学 院实 验 动物 中心
提供 ； 皮 细胞 生 长 因子 （Ｇ ） 自 Ｇ Ｂ Ｃ； ＭＥ 表 ＥＦ购 Ｉ Ｉ Ｄ Ｍ／ Ｆ ２培养基 、 ２培养 基添 加剂 购 自 Ｓｇ ａ公 司 ； 蛋 １ Ｎ ｉｍ 巢 白（ ｅｔ ） 克 隆抗 体 、 管 相 关 蛋 白 （ Ｐ ） 克 ｎ ｓｎ 多 ｉ 微 ＭＡ ２ 单
培养 基 重 悬 细胞 ， 种植 在 ２ ｍｌ 养 瓶 内 ， ５ 培 种植 密 度 为 １ ｌ５ ｌ 于 ３ ｏ ５ Ｃ ２ 箱 中 培养 ２ ｈ 此 时 ｘ ０／ ， ７Ｃ，％ Ｏ 孵 ｍ ４，
瓶 内漂浮 大量 细胞 团块 ． 部分 细胞 贴 壁 ． 少 收集 漂浮
作 者 简 介 ： 小 青 （９ ４ ） 女 ， 师 高 １７一 ， 讲
起 交 织成 网 （ ３ 。继续 培 养 ， 胞生 长 良好 ， 培 图 ） 细 在 养 ２ ｄ后 。 ０ 细胞 逐渐 死 亡 。在分 化后 ７ ｄ将分 化 细胞
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胞 （ ４） 图 。
２１ 神经 干细 胞培 养及 鉴定 ．
Ｒ ３ ３８ 文 献 标 识 码 Ａ 文 章 编 号 １ ０ — ６ ９（ ０ １ ３ ０ ２ — ３ ０ ０ ２ ６ ２ １ ）－ ２ ８ ０
中 图分 类 号
Ｉ ＰＲｏＶＥＤ Ｍ ＣＵＬＴＵＲＥ ＰＰ ｏＦ ＨＩ ｏＣＡＭ ＡＬ ＮＥＵＲｏＮＳ ｏＦ ＮＥｏＮＡＴＡＬ ＲＡＴ
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泸 卅 医 学 院学 报 Ｉ
２ ２８
２１ ０ １年
第３ ４卷
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毫
害
新 生大 鼠海 马神 经元 的改 良培 养 木
神经 元是 中枢 神 经系 统 中高度 分 化 细胞 ，在 出
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要用 于原 代培 养 。而 神经 胶质 细胞 有 较强 的存 活能 力， 在体 外培养 能 分裂 增殖 ， 可进行 传 代 培养 。神 经
壁 生长 ， 除 Ｅ Ｆ继 续培 养 ２ ｈ 在 细胞 球边 缘伸 出 撤 Ｇ ４，
ｎ ｓ ｎ细胞 免疫 化 学检测 ，一部 分细 胞球 继续 培养 ， ｅｔ ｉ 其培养液撤除 Ｅ Ｆ Ｇ ，加 入 １ ２培养 基 添 加 剂 ， ％Ｎ 每 ３ ｄ换培 养液 １次 ，培 养 ７ ｄ后 用 ４ ％多 聚 甲醛 固定 ，
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第 ３期 高 小 青 等 ： 生 大 鼠 海 马 神 经 元 的 改 良培 养 新
２９ ２
的细 胞 ， 心 ， 上 清 ， 入 神 经 干 细胞 培 养 液 （ 离 弃 加 含
Ｅ Ｆ ２ ｔ ／ ｌ ２培养 基 添 加 剂 ） 悬 细 胞 ， 用 Ｇ ０ｚ Ｌ，％Ｎ ｇ 重 再 吸管反 复 吹打 ， 至形 成 单 细胞 悬液 ， 置 ３ ℃，％ 直 放 ７ ５ Ｃ ： 箱 中， Ｏ孵 ２或 ３ｄ更 换 １ 培 养 液 。培 养 ５ 次 ｄ左 右， 细胞 成 球 ． 细 胞 球 吹 打成 单 细 胞 和小 细 胞 团 ， 将 换 培养 液继 续培 养 。取 第 ２代 细胞 球 接种 到经 多 聚 赖 氨酸 处理 的玻 片 上 ， 部 分 细胞球 贴 壁 ６ 一 ｈ后 终 止
１２ 新生 大 鼠神经 干细胞 的培 养 、 ． 分化及 鉴定 取新 生大 鼠大 脑组 织 ， ０Ｏ ｍｏ Ｌ磷酸 缓 冲液 用 ．ｌ ｉ ／
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元 体 外培 养模 型 和标 准体 系对 于 中枢神 经 系统 疾病
高小 青， 杰 邓 莉， 侃 ， 朝鲜 ， 杜 ， 郭 杨 王特为
（ 州 医 学 院 ： 学 基 础 研 究 中 心 ；教 务 处 ， 泸 医 四川 泸 州 ６６０ ） ４０ ０
摘 要
目的 ： 讨 体 外培 养 高纯 度 神 经 元 的方 法 。 方 法： 外 培 养 新 生 大 鼠 海马 神 经 干 细 胞 ， 使神 经干 细胞 在 无 血 清 Ｎ２ 探 体 再
隆抗 体购 自武汉 博 士德公 司 。
向分 化潜 能 的细胞 ，在 一定 条 件下 向神 经元 和 胶质 细胞 方 向分化 。 单纯 神经 干细 胞移 植入 脑 内后 ， 但 多 数 干 细胞 向胶 质细 胞分 化 ，而 向神 经元 方 向分 化较 少 ［ 因此 ， 果 能在体 外建 立一 种 高效 、 定 的神经 ３ ｊ 。 如 稳
细胞 移植 治疗 有重 要 意义 。本 实验 通过 在 体外 培养 新 生 大 鼠海 马神经 干 细胞 。在 无 血清 条件 下使 其 向
海 马 组 织 ， 成 约 １ ｍ。 小 ， 移 入 离 心 管 ， 吸 剪 ｍ 大 转 用
神 经元 方 向分 化 ，为 获得 高纯 度神 经元 提 供 了一个
ｐｒ ｓ ｅ ｅ ｔｎ，ａ ｄ ｍｏ ｔｄ ｆｅ ｅ ｔａｅ ｅｌ ｆ ＮＳＣｓ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ Ｍ ＡＰ２ ｓ ｏ ａ ｉ ａｌ ｅ ｅ ａ ｆｅ ｅ ｔａ ｅ ｅ ｌ ｘ ｅ ｓ ｄ ｎ ｓｉ ｎ ｓ ｉｆｒ ｎ ｉｔ ｄ ｃ ｉｓ ｏ ｘ ｒ ｓｅ ，ｐ ｒ ｄ ｃ ｌｙ ｓ ｖ ｒ ｌｄｉ ｒ ｎ ｉ ｔｄ ｃ ｌｓ ｅ — ｆ
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基 金 项 目 ： 川 省教 育厅 项 目 （０ ６ １ ５ ； 川 省 科 技 厅 项 四 ２ ０ Ａ ５ ）四
目 （０ ６１— ０ — ） ２ ０ Ｊ ３ ０ ５ １
管均 匀机 械 吹 打 ，使 其 成 细胞 悬 液 ，Ｏ ０ ｍｉ 心 ｌ ０ ｄ ｎ离 １ ｍ ｎ 弃 上 清 ， 入 １ ％胎 牛血 清 Ｄ Ｍ Ｆ ２ １１ ０ ｉ， 加 ０ ＭＥ ／ １ （ ：）
图 １培 养 的细 胞 球 （ １０ × ０）
图 ２细 胞球 抗 ｎ ｓｎ染 色 阳性 （ １０ ｅｉ ｔ ｘ ０）
图 ３神 经 球 分 化 ７ ｄ细 胞 （ ｌ ｏ ｘ ｏ）
图 ４分 化 细 胞 抗 Ｍ ＡＰ ２染 色 陛 （ ０ ｘ１ ０）
３ 讨 论
胶 质 细胞 可 以提供 神 经元 营养 因子 ，有 维 持神 经元 存 活 和促 进神 经元 突起 生 长 的功 能 ，但 是 过度 生 长 不仅影 响 对神 经元 的 观察 ，而 且抑 制神 经元 的生长 和分化 ， 而造 成神 经元 提早 退化 。 反 因此获 得高纯 度
Ｇａ ａ ｑ ｎ ，ｔａ ｏ Ｘｉｏ ｉ ｇ ｅ ｌ
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１。 ） 对细 胞球 行 ｎ ｓｎ抗 体 细胞 免疫化 学检 测 ， ｅｔ ｉ 细胞 球 及从 细胞 球边 缘 游离 出 的细胞 呈棕 色 ，表 示为 抗
ｎ ｓ ｎ阳性 （ ２ 。 ｅｔ ｉ 图 ）
２２ 神经 干细 胞 向神经 元分 化及 鉴定 － 接 种 于多 聚赖 氨酸 包被 的玻 片 上 的细胞 球呈 贴
添 加 剂 培 养 基 条 件 下 向 神 经 元方 向分 化 。结 果 ： 新 生 大 鼠 海 马 组织 培 养 出 的 神 经 干 细胞 ， 达 巢 蛋 白 ， 经 干 细 胞 的 分 化 细 胞 从 表 神 绝 大 部 分 表 达 ＭＡ ２ 极 少 数 几 个 细 胞 表达 Ｇ Ａ 。结 论 ： 过 本 实验 方 法 可 获 得 高 纯 度 的神 经 元 ， 后续 实 验 奠 定 基 础 。 Ｐ， ＦＰ 通 为 关键词 细胞 培 养 ； 经 干 细 胞； 经 元； 鼠 神 神 大
对 细胞 行神 经元 特 异性 标 记物 Ｍ Ｐ Ａ ２细胞 免疫 化 学 检 测 。Ｄ Ｂ显 色 。阴性对 照 不加 一抗 。 Ａ
２ 结 果
短 小 突起 ， 培 养 时 间延 长 ， 胞球 逐 渐 变 得扁 平 ， 随 细
球 边 缘游 离 出的细 胞 增 多 ， 突起 增 长 ， ７ ， 至 ｄ 细胞 突