常见肿瘤免疫标记
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❖ 据某些学者统计，近一半的大肠癌对GST- π 、TOPO-Ⅱ所 介导的抗癌药物顺铂和拓扑异构酶抑制剂产生耐药倾向，并 大多呈强耐药性，提示大肠癌联合化疗用药时，对顺铂和拓 扑异构酶抑制剂的选择应慎重考虑。P-gp阳性表达者对P-gp 相关的主要抗癌药长春新碱、阿霉素等有耐药倾向。
12Fra Baidu bibliotek
表皮生长因子受体相关标记
❖ VEGF与消化道癌形成密切相关，并参与其侵袭和转移，可 作为预后判断指标。
❖ 三者在消化道癌中的表达具有一致性，它们的联合检测可作 为判断胃癌预后、筛选高危转移患者的有效指标 。
13
酪氨酸激酶I型受体家族
❖ I型表皮生长因子受体是广泛分布于人体各组织细胞膜上的 多功能糖蛋白，分享由细胞外结构域、跨膜结构域及胞浆结 构域构成的分子信号传导通道。
❖ 我科常用大肠癌标记： VEGF,EGFR,Pgp,GST-π, Ki-67, P53,MSH2,P21,TS,TP.
10
耐药相关基因的标记
P-糖蛋白 （P-gp） 谷胱甘肽转移酶 （GST-π） DNA拓 扑异构酶Ⅱ（Topo-Ⅱ）肿瘤产生耐药的生物学基础取决 于肿瘤多药耐药基因的扩增，瘤组织生成GST- π 、 TOPO-Ⅱ和P-gp的含量升高，则耐药性增强。
20
AFP
❖ AFP（甲胎蛋白）是在体液中发现的70kD的癌胚抗原，正常 表达于胎肝，常态下成人组织中呈阴性。在部分生殖细胞肿 瘤（尤其卵黄囊瘤）和多数肝细胞肝癌中高表达。
❖ 如果p53基因突变，对细胞的增殖将失去控制(显性负调控)。 ❖ p53基因突变与人类50%的肿瘤有关 。
15
p21
❖ p21可以和p53共同构成细胞周期G1>检查站，减少受损DNA 的复制 ，发挥抑癌作用.
❖ P21作为一种负性调节因子,在依赖野生型p53的表达通路上 与肿瘤的表达、表达含量、表达位置,以及预后都密切相关.
常见肿瘤免疫标记的意义
江苏省肿瘤医院 病理科 张静渊
1
免疫组化的基本原理
❖ 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的 原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧 光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组 织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、 定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术 (immunohistochemistry) 。
❖ 表皮生长因子受体（EGFR）、人类表皮生长因子受体-2 （C-erbB-2）、血管内皮生长因子（VEGF）。
❖ C-erbB-2为HER-2癌基因的表达产物，HER-2为原癌基因， 广泛存在于各种组织中。通常处于非激活状态，被刺激激活 后具有肿瘤转化活性，其表达越高，瘤株对化疗越不敏感， 越易复发转移。
P21-cyclin-CDK复合物 （Cyclin-CDK活性抑制）
Rb-E2F 阻滞G1期
Rb-P+ E2F
启动增殖
18
联合表达意义
❖ P53、c-erbB-2、P21的表达与消化道癌的分化程度,浸润程 度,转移程度及临床分期呈正相关.
❖ 多基因联合表达检测对消化道癌预后判断明显优于单基因表 达检测.
❖ 标本没有按规范程序固定。（固定液、固定时间）
4
肠癌中P53的表达
5
肠癌中的MDR表达
6
肺癌中的Ki-67表达
7
胃癌中的EGFR表达
8
胃癌中的AFP表达
9
消化道癌的标记
❖ 我科常用胃癌标记：VEGF,EGFR,P-gp,GSTπ,Topo-Ⅱ, Ki-67,AFP,P53,C-erbB-2, C-erbB3, C-erbB-4,TS,TP.
影响化疗疗效的主要因素是细胞内耐药、抗肿瘤药的药 代动力学/药效学、肿瘤血供、药物扩散Pgp-MDR及肿瘤 细胞增殖能力等。其中MDR的关注点是mdri/Pgp、MDR、 LRP、拓扑异构酶-Ⅱ、谷胱甘肽代谢和凋亡，或肿瘤细 胞增殖活性介导细胞内多向耐药基因的扩增。
11
特别提醒
❖ 对应耐药关系： TOPO-Ⅱ阳性对应多柔比星、米托蒽醌、 鬼臼类； P-gp阳性对应长春新碱、VP-6、蒽环类； GST- π 阳性对应多种烷化剂耐药。
❖ 据国外文献报道，分化差的大肠癌中，P53、P21蛋白的过 表达常伴随着K –ras、p53基因的高突变，所以该对应关系 很可能参与了大肠癌的形成及演进。
19
Ki-67
❖ 增殖细胞核抗原(Ki-67)对于研究肿瘤细胞的生物化学特性、 恶性程度及预后判断等具有一定的价值。Ki-67是真核细胞 G1和S期合成的一种36kD的核蛋白，是DNA聚合酶辅助蛋白， 直接参与细胞增殖过程中DNA的复制。在静止期的细胞内含 量很少，从G1晚期开始增加，S期达到高峰，G2期和M期呈明 显下降，其表达程度能客观反映瘤细胞增殖活性。
❖ 当P21、Cyclin、CDK、PCNA四聚体的功能受到抑制,则使增 殖信号大量活化,导致细胞异化和恶变.
16
PCNA: Proliferating cell nuclear antigen
17
p53是G1期能否进入
S期的分子警察
DNA损伤
修复
复制
无法修复 诱导 凋亡
p53
p21 （P21 ） CIP1
❖ 其家族包括：HER1(EGFR)、HER2(C-erbB-2)、HER3、 HER4四种同源受体。其受体及配体在多种实体瘤如NSCLC、 BC、CC、NPC、GC等中过表达，正常组织中低表达。
❖ 据报道，C-erbB-3蛋白在慢性胰腺炎、外分泌胰腺癌与胃肠 道肿瘤中有明显表达。
14
p53
❖ 正常p53的生物功能好似“基因组卫士（guardian of the genome）”，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整 性。如果修复失败，P53蛋白则引发细胞凋亡。
2
常用方法
❖ EPOS（一步法） ❖ SP法-链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶连接法 ❖ 二步EnVision（优点：敏感性大幅增强，不受内源性生物素
干扰） ❖ SABC法 （三步法）
3
结果判定
❖ 每项指标都有其抗体结合的对应位点，如果定位不准确，则 不能判为阳性。
❖ 结果中的“±”有相当一部分为背景与肿瘤表达均呈阳性， 无法区分，其原因大致有：孵育过长；抗原抗体交叉反应； 冲洗不足；血清封闭不足或错误；二抗与组织非特异性结合。
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表皮生长因子受体相关标记
❖ VEGF与消化道癌形成密切相关，并参与其侵袭和转移，可 作为预后判断指标。
❖ 三者在消化道癌中的表达具有一致性，它们的联合检测可作 为判断胃癌预后、筛选高危转移患者的有效指标 。
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酪氨酸激酶I型受体家族
❖ I型表皮生长因子受体是广泛分布于人体各组织细胞膜上的 多功能糖蛋白，分享由细胞外结构域、跨膜结构域及胞浆结 构域构成的分子信号传导通道。
❖ 我科常用大肠癌标记： VEGF,EGFR,Pgp,GST-π, Ki-67, P53,MSH2,P21,TS,TP.
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耐药相关基因的标记
P-糖蛋白 （P-gp） 谷胱甘肽转移酶 （GST-π） DNA拓 扑异构酶Ⅱ（Topo-Ⅱ）肿瘤产生耐药的生物学基础取决 于肿瘤多药耐药基因的扩增，瘤组织生成GST- π 、 TOPO-Ⅱ和P-gp的含量升高，则耐药性增强。
20
AFP
❖ AFP（甲胎蛋白）是在体液中发现的70kD的癌胚抗原，正常 表达于胎肝，常态下成人组织中呈阴性。在部分生殖细胞肿 瘤（尤其卵黄囊瘤）和多数肝细胞肝癌中高表达。
❖ 如果p53基因突变，对细胞的增殖将失去控制(显性负调控)。 ❖ p53基因突变与人类50%的肿瘤有关 。
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p21
❖ p21可以和p53共同构成细胞周期G1>检查站，减少受损DNA 的复制 ，发挥抑癌作用.
❖ P21作为一种负性调节因子,在依赖野生型p53的表达通路上 与肿瘤的表达、表达含量、表达位置,以及预后都密切相关.
常见肿瘤免疫标记的意义
江苏省肿瘤医院 病理科 张静渊
1
免疫组化的基本原理
❖ 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的 原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧 光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组 织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、 定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术 (immunohistochemistry) 。
❖ 表皮生长因子受体（EGFR）、人类表皮生长因子受体-2 （C-erbB-2）、血管内皮生长因子（VEGF）。
❖ C-erbB-2为HER-2癌基因的表达产物，HER-2为原癌基因， 广泛存在于各种组织中。通常处于非激活状态，被刺激激活 后具有肿瘤转化活性，其表达越高，瘤株对化疗越不敏感， 越易复发转移。
P21-cyclin-CDK复合物 （Cyclin-CDK活性抑制）
Rb-E2F 阻滞G1期
Rb-P+ E2F
启动增殖
18
联合表达意义
❖ P53、c-erbB-2、P21的表达与消化道癌的分化程度,浸润程 度,转移程度及临床分期呈正相关.
❖ 多基因联合表达检测对消化道癌预后判断明显优于单基因表 达检测.
❖ 标本没有按规范程序固定。（固定液、固定时间）
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肠癌中P53的表达
5
肠癌中的MDR表达
6
肺癌中的Ki-67表达
7
胃癌中的EGFR表达
8
胃癌中的AFP表达
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消化道癌的标记
❖ 我科常用胃癌标记：VEGF,EGFR,P-gp,GSTπ,Topo-Ⅱ, Ki-67,AFP,P53,C-erbB-2, C-erbB3, C-erbB-4,TS,TP.
影响化疗疗效的主要因素是细胞内耐药、抗肿瘤药的药 代动力学/药效学、肿瘤血供、药物扩散Pgp-MDR及肿瘤 细胞增殖能力等。其中MDR的关注点是mdri/Pgp、MDR、 LRP、拓扑异构酶-Ⅱ、谷胱甘肽代谢和凋亡，或肿瘤细 胞增殖活性介导细胞内多向耐药基因的扩增。
11
特别提醒
❖ 对应耐药关系： TOPO-Ⅱ阳性对应多柔比星、米托蒽醌、 鬼臼类； P-gp阳性对应长春新碱、VP-6、蒽环类； GST- π 阳性对应多种烷化剂耐药。
❖ 据国外文献报道，分化差的大肠癌中，P53、P21蛋白的过 表达常伴随着K –ras、p53基因的高突变，所以该对应关系 很可能参与了大肠癌的形成及演进。
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Ki-67
❖ 增殖细胞核抗原(Ki-67)对于研究肿瘤细胞的生物化学特性、 恶性程度及预后判断等具有一定的价值。Ki-67是真核细胞 G1和S期合成的一种36kD的核蛋白，是DNA聚合酶辅助蛋白， 直接参与细胞增殖过程中DNA的复制。在静止期的细胞内含 量很少，从G1晚期开始增加，S期达到高峰，G2期和M期呈明 显下降，其表达程度能客观反映瘤细胞增殖活性。
❖ 当P21、Cyclin、CDK、PCNA四聚体的功能受到抑制,则使增 殖信号大量活化,导致细胞异化和恶变.
16
PCNA: Proliferating cell nuclear antigen
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p53是G1期能否进入
S期的分子警察
DNA损伤
修复
复制
无法修复 诱导 凋亡
p53
p21 （P21 ） CIP1
❖ 其家族包括：HER1(EGFR)、HER2(C-erbB-2)、HER3、 HER4四种同源受体。其受体及配体在多种实体瘤如NSCLC、 BC、CC、NPC、GC等中过表达，正常组织中低表达。
❖ 据报道，C-erbB-3蛋白在慢性胰腺炎、外分泌胰腺癌与胃肠 道肿瘤中有明显表达。
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p53
❖ 正常p53的生物功能好似“基因组卫士（guardian of the genome）”，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整 性。如果修复失败，P53蛋白则引发细胞凋亡。
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常用方法
❖ EPOS（一步法） ❖ SP法-链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶连接法 ❖ 二步EnVision（优点：敏感性大幅增强，不受内源性生物素
干扰） ❖ SABC法 （三步法）
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结果判定
❖ 每项指标都有其抗体结合的对应位点，如果定位不准确，则 不能判为阳性。
❖ 结果中的“±”有相当一部分为背景与肿瘤表达均呈阳性， 无法区分，其原因大致有：孵育过长；抗原抗体交叉反应； 冲洗不足；血清封闭不足或错误；二抗与组织非特异性结合。