高效液相色谱的类型

液—固吸附色谱的分离效果不太 好，目前使用较少。
二、液—液分配色谱
(一)原理
根据各待测组分在互不相溶的两相中分
配系数不同而进行分离的。 在色谱柱中，随着流动相的移动，被
分离各组分在固定相和流动相之间的分配
平衡需进行多次，造成各组分的迁移速率
不同，从而实现分离的过程。
(二) 固定相

原则上，用于 GC 的固定相也可 用于HPLC作固定相，常用硅胶做载 体。但HPLC固定液易流失，因此常 用的只有几种，按极性由高到低为：
Co2+, Zn2+, Mg2+, Ag+, Cs+, Rb+, K+, NH4+, Na+, H+, Li+
(2) 对阴离子，滞留顺序为：柠檬酸根, SO42-, C2O42- , HSO4-, NO3-, CrO42-, Br-, SCN-, Cl-, OH-, F-
3. 固定相
按离子交换剂类型分四种：
类 型
阳离子交换剂
强阳离子交换剂
弱阳离子交换剂 强阴离子交换剂 弱阴离子交换剂
阴离子交换剂
官能团 -SO3-COO-NR3+ -NH2+
把这些离子交换剂用化学键合的方法键合在：(1)微粒硅 胶，(2)苯乙烯与二乙烯苯的交联共聚物上，构成固定相。
根据固定相和分离机理不同， 高效液相色谱可分为多种类型：

液-液吸附色谱


液-固分配色谱
化学键合相色谱


离子交换色谱
离子色谱

尺寸排阻色谱
…...
一、液—固吸附色谱
(一) 原理

基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同 当流动相携带试样组分通过吸附剂时，各组分
的吸附能力而进行分离。 分子和流动相分子与吸附剂表面活性中心发生竞争 吸附，与吸附剂性质类似的组分易被吸附，与吸附 剂表面活性中心的几何结构相适应的组分也易被吸
主。
单的吸附，也不是单一的液 - 液分配，
的覆盖度决定哪种机理起主要作用。
(五) 分类
1. 正相键合相色谱
固定相极性大
流动相极性小 正相键合 相色谱 分析对象 流出顺序
硅胶-OH(或双-OH)，硅胶-CN
烃类(己烷、庚烷、异辛烷等)+适量 极性溶剂 (CHCl3, CH3OH, CH3CN)
多用于极性或中等极性化合物的分离， 以及极性不同化合物的分离。
极性小的先流出，极性大的后流出
正相键合色谱中，随流动相极性增加，组分分配比k减小。
2. 反相键合相色谱
固定相极性小 硅胶-C18，硅胶-苯基 甲醇-水，乙腈-水，水和无机盐的缓冲 溶液 多用于多环芳烃等低极性化合物的分离； 改变流动相配比也可用于分离极性化合 物；缓冲液可用于易解离的化合物，如 有机酸、有机碱和酚类的分离。 极性大的先流出，极性小的后流出
附,结果不同组分由于结构的不同，受到的吸附力也
不同，则保留值也不同，最终被分离。
(二)固定相

液—固吸附色谱常用的固定相是：
固体吸附剂，

主要有：
极性：硅胶、氧化铝、分子筛

非极性：活性炭
(三)用途

主要用于分离极性不同或含极性
基团相同但数目不同的试样，也适合
分离异构体，但不宜分离同系物。

2 .可逆交换反应
阳离子交换： R-SO3-H+ + M+ 阴离子交换： R-NR3+Cl- + X-
(1) 电 荷：电荷越高，结合越牢固，流出越慢。 (2) 离子半径：半径越大，结合越牢固，流出越慢。
R-SO3-M+ + H+
R-NR3+X- + Cl-
(1) 对阳离子，滞留顺序为： Fe3+, Ba2+, Pb2+, Sr2+, Ca2+,
能在pH=28.5的介质中使用。

(3) 消除了机械涂渍固定液表面不均匀
带来的弊病。

(4) 可键合各种不同类型的固定液，
制备适应于各种色谱的固定相。

(5) 适合于梯度淋洗。
(三)化学键合方法
通常，化学键合相的载体主要是硅胶(表面有硅醇基)：
方法一 (硅酯化)：
Si OH + R OH
SOCl2
1. 正相分配色谱

定义： 固定相为极性，流动相为非极性 的液—液分配色谱称正相分配色谱。

用途：主要用于极性组分的分离。 流出顺序：被分离组分按极性从小到大
的顺序流出，即极性小的先流出，极性
大的后流出。
2. 反相分配色谱

定义： 固定相为非极性，流动相为极性 的液—液分配色谱称反相分配色谱。
,’- 氧 二 丙 腈 (ODPN) 、 聚 乙 二 醇
(PEM) 、三甲撑二醇 (TMG) 、十八
烷(C18)、角鲨烷(SQ)等。
(三) 流动相

HPLC 分析中，为防止固定相的
流失，流动相与固定液应尽量不互溶，
或者说二者的极性相差越大越好。因
此，根据流动相与固定相极性的差别 程度，可将液液色谱分为：
反相键合 相色谱
流动相极性大
分析对象
流出顺序
分离机理用“疏水效应”来解释。
四、离子交换色谱

此法是利用离子交换原理和液
相色谱技术相结合，分离各类阴、 阳离子的分离分析方法。它既适合 于无机离子，也适于有机物分离， 如蛋白质、氨基酸、核酸等。
1.原理

根据离子交换树脂上可解离的
离子与流动相中所带相同电荷的组 分离子进行可逆交换，不同组分离 子对固定相的亲和力 ( 或离子交换能 力)的差别来实现分离的。
比硅酸酯好。但所用的格氏反应不方便。

(3) Si-O-Si-R ： 不 水 解 ， 热 稳 定 性 好 ， 在 pH=2-8范围内对水稳定。
注意事项：化学键合固定相不适于酸、碱度过大 或含有氧化剂的缓冲溶液作流动相。
(四)原理

这种固定相分离机理既不是简 而是二者兼而有之。化学键合表面 对多数键合相来说，以分配机理为
Si
O
R
方法二 (氯化)：
Si OH
SOCl2
Si
Cl
RLi, RMgCl
Si
R
方法三 (硅烷化)：
Si OH + R3SiCl Si O SiR3 + HCl
特点：

(1) Si-O-R：对热不稳定、遇水、乙醇等极性 溶剂会发生水解，使酯链断裂，因此只适合
于不含水或醇的流动相体系。

(2) Si-R(或Si-N)：抗水解能力强，热稳定性

用途：主要用于非极性组分的分离。 流出顺序：被分离组分按极性从大到小
的顺序流出，即极性大的先流出，极性
小的后流出。
三、化学键合相色谱
(一) 化学键合固定相
是通过化学反应以共价键形
式将有机固定液键合在硅胶载体 表面，而得到的各种性能的固定
相。
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(二)优点

(1) 固定液不流失。

(2) 热稳定性和化学稳定性好，