AllergyScreen过敏原诊断试剂盒标准操作规程

AllergyScreen过敏原诊断试剂盒标准操作规程（SOP）

1．原理

标本中过敏原特异性IgE抗体与吸附在硝酸纤维素膜上的过敏原发生抗原抗体特异性反应，形成抗原抗体复合物，标记了生物素的抗人IgE抗体与抗原抗体复合物反应，结合有碱性磷酸酶的链霉亲和素，生物素结合。碱性磷酸酶与底物BCIP/NBT发生特定的酶显色反应。颜色深浅与血清中sIgE抗体含量成正比。

2．标本采集与处理

2.1 受检者的准备：

病人最好空腹采集血样。注意有无应用影响IgE水平的药物，如激素、免疫调节药等。

2.2 静脉采血：

除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：

血浆使用枸橼酸盐作为抗凝剂，不能使用肝素或EDTA抗凝剂。

2.4 标本处理：

本系统推荐用人血清为标本，亦可用血浆为标本。静脉采血待血清自然析出或离心（4000G/转）10分钟，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃下保存一周。若需保存更长时间，应置于-20℃以下储藏。

3．试剂

3.1 试剂

本实验使用的是德国MEDIWISS公司提供的AllergyScreen过敏原诊断试剂盒，试剂组分如下：

检测条标记有过敏原的硝酸纤维素膜，置于塑料反应槽中

洗脱液 20ml， TRIS/NaCl，可稀释成500ml 的清洗液，pH=7.5

抗人IgE抗体 4ml，标记有生物素的，含 0.1%NaN3

链霉亲和素 4ml，连接有碱性磷酸酶

BCIP/NBT 4ml

3.2 试剂的稳定性

原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。稀释过的清洗液在2-8℃下至多保存八周。

4．仪器

过敏原检测仪（Mediwiss，Moers，Germany）

可以检测到0.25%或更高的光密度信号。当光密度是5%是可达到0.2%光密度的重复性。5．操作

A. 系统恢复到室温（20-22℃）。

B .用蒸馏水以1：25稀释洗脱液。

C. 用清洗液湿润硝酸纤维素膜，在检测板上加入250µl的血清标本，在混匀器（30振/分）上室温孵育45分钟。

D. 冲洗3次，手持孵育暗盒反应槽，使之倾斜；用清洗液冲洗试剂条内贴附的硝酸纤维素膜，使清洗液充分流过试剂条；将反应槽端平，并在试剂条内注入清洗液，轻轻晃动反应槽会增加清洗效果效果。（注：使用标配洗瓶冲洗时，请将试剂条与洗瓶喷嘴的距离控制在5-10厘米以保持水流的冲击力）

E. 加入250ul抗抗体，在混匀器上室温孵育45分钟。

F. 冲洗（同D）

G. 加250ul链霉亲和素标记物，在混匀器上室温孵育20分钟。

H. 冲洗（同D）

I. 加入250ul底物，在混匀器上室温孵育20分钟

J. 流水冲洗终止底物酶反应。

K. 完全干燥后，专用阅读仪读数。

6．操作性能

6.1 精密度

批内差:平均值6.2%

批间差:平均值3.1%.

6.2 灵敏度

临床敏感度：95.1%

分析灵敏度：84.3%

6.3 特异性

临床特异性：80.2%

分析特异性：95.0%

6.4 准确度：

临床准确度：88.3%

分析准确性：90.6%

6.5 干扰

加热灭活，脂血，溶血，黄疸及脂浊的血标本会导致结果的不正确，应避免使用。

7．参考范围

0-1级（0-0.35 IU/ml）

8．临床意义

过敏性疾病的诊断不能仅仅根据实验室检测结果,而应和即往病史及当前临床表现(体内和体外多种试验的结果)一起综合考虑。

分级的测试结果可以用于判断患者对某一过敏原的过敏程度.测定血清特异性抗体与体内检测（如皮试）同样重要和可行.

需要强调的是,体外检测是唯一可频繁使用的确定I型变态反应敏感度的方法.

本系统以特定的过敏原条带显色，指示患者血清中有相关的IgE抗体,但这并不说明所

有这些患者都会伴有相关的临床症状,因为他们可能只处于致敏状态，而尚未有相关临床表现。