细胞病理学基本检验技术

Papanicolaou 医生1883年生于希腊。他 的父亲也是一位医生，曾经当过 Kymi 市的 市长。他21岁时完成医学教育，到德国留学 研究生殖细胞学，1913年移民美国。 他最初研究天竺鼠阴道分泌物内的细 胞周期变化。以后用相似的方法去研究妇 女阴道内分泌物及细胞的变化。据说全世 界第一个Pap test 就是用在她的妻子身上。
采集、制备、染色、观察
一. 标本采集
原则：
准确选择采集部位 标本保持新鲜，尽快制片 尽量避免血液及粘液等混入（干净） 尽量避免血液及粘液等混入


方法简便，操作轻柔，减少病人痛苦， 防止并发症和肿瘤扩散
标本分类

１.脱落细胞 ：自然脱落细胞 非自然脱落细胞 2.细针穿刺细胞
采集、制备、染色、观察

BerEp4 染色
采集、制备、染色、观察
五.显微镜观察方法
○ ○
视野
用10倍物镜进行浏览

发现异常细 胞后，用40 倍观察
六.细胞病理学诊断
细胞形态学判断的基本原则
1细胞数量 2细胞排列的结构特征 3细胞核的特征 4细胞质的特征 5背景 6人为因素
１.细胞数量
多－增殖指数增加（肿瘤或增生） 少－荒凉，注意观察

②没有标准

迄今为止， 没有 一项细胞形态学特征 或 一套规范的细胞形态学标准 能准确可靠地鉴别良恶性细胞。
七 细胞学诊断的质量保证



标本采集：尘细胞，宫颈细胞数量 制片过程：离心，固定，染色 阅片诊断：全面，结合临床及组织学 不断理论学习 复查会诊（IQAM,EQAM.P274） 定期随访：金标准

痰中的尘细胞
宫颈涂片上的柱上皮
细胞病理学诊断的优势
安全简便，痛苦少，不良反应少，可 重复取材，设备要求低，费用廉。 快速准确，检出率约60%，适合大规模 防癌普查及高危人群的随访观察，可 发现早期癌和原位癌。 检查范围大

于1925年在纽约以一群自愿的妇女做研 究时，在一个妇女的子宫颈抹片上偶然发 现一些癌细胞。这个发现使他异常振奋， 而后经一系列研究后，于1928 年发表一个 学术演讲：阴道内的细胞可以用来早期诊 断妇女的癌症。


Papanicolaou 医生因心脏病病逝于1962年。 他的妻子Mary，也是一位伟大的、自我牺牲 的妇人，她是Papanicolaou 医生第一个 Pap test 的 妇人，她曾经作过他的细胞检查员，帮忙训练许 多技术人员。以后20年时间，Papanicolaou医生基 本上以她作定期的阴道细胞检查，而后完成一本 妇人周期性阴道细胞变化的著作。每次 Papanicolaou 医生介绍他的妻子时，总是说：这是 我的太太也是我的受害者。 总之，一个成功的男人背后，常常会有一个 伟大无私的女人。
TCT
TCT
6.细胞块法

将标本中的细胞聚集成团，形成与传统组 织块类似的细胞块，制成细胞切片，然后 可以进行特殊染色。
采集、制备、染色、观察
※目的： 是保持细胞的自然状态，防止细 胞自溶和细菌导致的腐败。 固定液能凝固和沉淀细胞内蛋白 质和破坏细胞内的溶酶体酶，保持细胞 自然状态，使细胞结构清晰，易于着色。 因此标本愈新鲜，固定愈及时， 细胞结构愈清晰，染色效果愈好。
采集、制备、染色、观察
二.涂片制备
原则 标本新鲜 玻片清洁 操作轻柔 涂片牢固 涂片数量
方法


直接涂片：将新鲜标本直接涂在载玻片上 １.推片法 ２.涂抹法 ３.压拉涂片法 间接涂片：Fra Baidu bibliotek各种液体标本进行浓缩处理后再涂 片 ４.离心法 ５.液基薄层法 ６.细胞块法
采集、制备、染色、观察
0926164,女，65岁，临 床诊断：胸水 既往史：骨髓瘤

细胞量多
宫颈TCT涂片

细胞量正常
细胞量少
2.细胞结构特征
涂片中的细胞常常缺乏结构特征
正常细胞－有极向、平铺 恶性细胞－重叠：异常粘附性、异常聚 集性。
宫颈涂片中正常的宫颈柱上皮
腺癌

C0924833，女， 65岁，腹水
3.细胞核特征

细胞成分保存良好，但诊断标准不同于脱 落细胞

1
宫颈细胞学的取材与制片方法
刮取法 刷取法
2
气管刷细胞涂片
肺泡灌洗液
0925790,男,66岁 CT：左肺上叶 尖后段不整 形实变影
气管镜：未见 病变 细胞学诊断： 腺癌
采集、制备、染色、观察
穿刺细胞标本
1体腔抽出液：胸腹水、心包液、脑脊液等； 2细针穿刺吸取液：如体表肿物穿刺液，超声 定位下肝、胰腺和肾脏穿刺液；借助内窥 镜技术穿刺等。 理论上适用于任何器官 简便，费用低，创伤小 良好的穿刺和制片技术可获得最佳结果 需外科病理学知识 有一定局限性，如采样不足等

病例举例1

2007年3月检查 病理号200704767 女，51岁 临床诊断：宫颈 炎 宫颈TCT：细胞 量＜5000，诊 断:ASC-H




2007年8月活检 病理号200719604 ：ABCDE共5点活检 病理诊断：慢性宫颈炎

2009年9月复查 细胞号0926170 诊断:上皮内高 度病变
第八章 细胞病理学基本检验
中国医科大学盛京医院 病理科 舒红
第一节 细胞病理学 基本检验技术
定义

细胞病理学
采集、制备、染色 观察
是通过检查细胞的形态学特点，进行
健康和疾病的筛查、诊断和研究
体检、普查 诊断、鉴别诊断
本节内容提要





一.标本采集 二.标本涂片 三.涂片固定 四.涂片染色 五.观察涂片 六.细胞学诊断 七.细胞学诊断的质量保证
苏木素-伊红（H-E）染色法
瑞氏-吉姆萨染色法
其它特殊染色

组织细胞化学染色：过碘酸Schiff染色 （PAS糖原）、三色染色、普鲁氏蓝染色等。 免疫细胞染色：识别细胞类型、来源等。 识别微生物的染色： Gram染色，PAS，六 胺银，Ziehl-Neelsen染色（抗酸染色）等。


胸水细胞块免疫组化染色
１.推片法
采集、制备、染色、观察
２.涂抹法
采集、制备、染色、观察
３.压拉涂片法
采集、制备、染色、观察
４.离心法和细胞离心法

离心法：大量液体标本，如浆膜腔积液、 尿液、灌洗液。 细胞离心法：将细胞直接离心到载玻片上， 制成单层细胞涂片。适用于少量液体、中 等量细胞。

采集、制备、染色、观察
５.液基细胞学

霉菌污染

0926963,男,78岁, 临床诊断:肺炎
送检标本:痰
污染的虫卵

0926965,男,79岁, 临床诊断:肺癌? 送检标本：痰
痰细胞退变
采集、制备、染色、观察
非自然脱落细胞标本特点
包括气管刷，宫颈刷，支气管灌洗液及皮肤 乳头等刮取标本。 直接从病变器官表面采样 纤维镜能从器官内部获取标本 能获取上皮下的病变标本


2009年9月 手术 病理诊断： 宫颈CIN Ⅲ 累及腺体

病例举例2

TCT诊断：高度病变 病理活检：慢性宫颈炎 半年后：病理活检：宫颈鳞状细胞癌
脱落细胞学诊断的不足



有一定的误诊率：细针吸取可有10%假阴性， 痰细胞学检查可有20%假阴性，少数出现假 阳性。 具体部位难确定 肿瘤分型困难 非肿瘤性疾病诊断研究少
良性－大小一致，核质细，核膜光。 恶性－大小不一，核质粗，核膜厚。

宫颈TCT涂片

正常
高度病变
胸水涂片 腺癌
4.细胞质的特征
核质比增加 嗜碱、粘液、空泡、吞噬
胞浆内粘液


5.涂片背景： 包括细胞成分和非细胞成分（血、粘 液、炎症、微生物） 恶性－坏死背景（肿瘤素质） 6.人为因素：制片不佳；污染。

固定时间：15－30分钟
采集、制备、染色、观察
四.常用染色方法
巴氏染色法（papanicolaou stain） （湿固定） 苏木素-伊红（H-E）染色法 瑞氏-吉姆萨染色法

巴氏染色法（Pap)
巴氏染色的来历

Papanicolaou(帕帕尼古拉乌) 子宫颈抹片这个检验是Papanicolaou 医生 在公元1928 年在美国首度提出。因为简便 易行，而且可以早期发现子宫颈癌或不正 常细胞以便早期治疗，而后风行全世界， 成为一个妇科不可或缺的重要例行检查。 为了纪念这位医师的贡献，在国际上这个 检查就叫作Pap test 或者Pap smear。
三.涂片的固定
固定不及时的腺癌细胞
固定及时的腺癌细胞
固定方法：
湿固定：是使细胞的原生质脱水、蛋白质 凝固达到固定的目的。可引起细胞皱缩。 干燥固定：是通过空气蒸发的方式达到固 定目的。细胞有增大的趋势。
固 定 方 法 的 比 较

A未固定细胞

B平铺在玻片上

C湿固定

D干固定
固定液种类： 乙醚乙醇固定液； 氯仿乙醇固定液； 95%乙醇固定液。

细胞分布不均
杂质成分阻碍视线 一个样本需涂多张涂片


标准化的细胞学技术

液基细胞学

卓越的标本质量 清晰的背景
标准化的标本制备过 程 均匀的细胞分布

一个样本只需一张具 有代表性的标本 剩余样本可进行其它 多种测试（免疫组化 等）

提高细胞学测试的敏感性和特异性
痰低分化鳞癌
改善背景 细胞清晰度
自然脱落细胞标本：咳出：痰 排出：尿、便 挤出：乳头分泌物等。 非自然脱落细胞标本：如气管，宫颈，皮肤， 乳头等。 穿刺细胞标本：浆膜腔积液 肿瘤穿刺
采集、制备、染色、观察
自然脱落细胞标本特点
包括痰，尿液，乳头分泌物，精液等。 容易获取标本 能多次采样
成分复杂，含多种细胞成分，炎细胞， 微生物及外源污染物 细胞成分保存较差
（1）薄层法ThinPrep

宫颈病变好发部位
(2) SurePath Prep 法

标本乙醇固定
悬浮于密度梯度溶液中 涡旋法使聚集的细胞团和粘液分开



密度梯度离心法使细胞成分和非上皮细胞成分分 开 细胞在重力作用下沉淀到载玻片上

传统细胞学状况


传统的制备方法（一 般是涂抹法）
标本质量不一致
细胞学诊断为二级诊断，需经活检组织学 证实后，方可进行治疗。

细胞病理学诊断是一个复杂的过程， 千万不能过分强调最终结论的重要性。

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①细胞病理学检查的影响因素
多！



患者信息：年龄和性别；激素水平；临床表现； 其它检查结果 病变部位：局部解剖；影像学特征 细胞特点：细胞量；类型；分布和粘附性；背 景 其它信息：电镜；免疫组化；流式细胞仪；细 胞遗传学