第26章 酶促反应法测定生物化学物质
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③床旁取血后应立即分离血清并尽快进行测定，防止外
源性氨的污染。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
二、酶偶联脱氢酶 指示系统测定法
待当待测物不可直接发生脱氢酶促反应时，可通
过一个或多个辅助酶反应，使其产物可发生脱氢
酶反应，并产生可检测的信号。
第24页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
第29页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
肌酐脱氢酶法性能评价 ①肌酐脱氢酶法与参考方法高效液相色谱法具有良好的相关 性，精密度好、准确度高、线性范围宽，不受黄疸、乳糜血 、溶血和临床常用治疗药物及体内代谢物的干扰，结果更趋 于真值，易于自动化分析，可用于血液及尿液的检测。 ②该方法的主要缺点是试剂不够稳定，且肌酐酶来源 困难，使得试剂盒价格昂贵，影响其在临床实验室的 普遍使用。
第10页
第二节 脱氢酶指示系统测定法
一、单酶反应直接测定法： （一）血液乳酸与丙酮酸测定 （二）血浆β –羟丁酸测定 （三）血氨测定 脱氢酶 1 指示系统
二、酶偶联脱氢酶指示系统 测定法： （一）尿素测定 （二）肌酐测定 （三）血浆碳酸氢根测定
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
概述
根据340nm处吸光度的变化，计算以NAD（H）或NADP（H）为辅酶的 酶促反应中待测物的浓度
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
贵阳医学院 潘卫
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
教学目标与要求
` 掌握
酶促反应法测定生物化学物质定义、分类及其应 用原理；UA、BIL、尿素、肌酐、葡萄糖、糖化 血清蛋白、TG、TCH、HDL-C、LDL-C、TBA 酶促反应法测定的原理及其优缺点与注意事项。 酶促反应法测定其它生物化学物质的原理及其优 缺点与注意事项。
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
酶法测定血浆碳酸氢根 性能评价 ① 在准备试剂和收集标本时，应严格密封，以最大限度 地减少干扰如标本中CO2的挥发； ②试剂浑浊或试剂空白吸光度小于1.0时都不能使用； ③内源性丙酮酸和LD对反应产生干扰，此干扰可由草氨酸 钠消除。
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第三节 过氧化物酶指示系统测定法
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
酶偶联脱氢酶法测定 尿素方法性能评价 尿素酶偶联脱氢酶法测定血清尿素方法简便、快速， 适用于临床常规分析 但该法存在内源性氨和外源性氨，以及内源性脱氢酶和还 原型辅酶的干扰，需采用含LD抑制剂（如高浓度丙酮酸） 的双试剂法来测定，否则测定结果偏高。
第27页
` 熟悉
` 了解
上述酶促反应法测定生物化学物质的方法学评价， 以及其方法的历史演变。
第 2页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
主要内容
酶反应前后光吸收变化测定法 脱氢酶指示系统测定法 过氧化物酶指示系统测定法 酶循环测定法 酶激活和酶抑制测定法
第 3页
第一节 酶反应前后光吸收变化测定法
一、血清尿酸测定 利用吸光度的 差值计算 1 物质的 含量 二、血清胆红素测定
酶法测定血浆碳酸氢根
血浆中的HCO3-在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下，与磷 酸烯醇式丙酮酸（ PEP ）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸 和苹果酸脱氢酶（ MDH ）反应，生成苹果酸，同时将 NADH 氧化成 NAD+；在340nm波长处吸光度的降低与样品中HCO3-含量成正比。
第32页
第19页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
脱氢酶法测定血浆β –羟丁酸 方法性能评价
① 由于易受饮食影响，原则上应空腹取血，β -羟丁 酸避免在室温放置，4℃可以稳定30d。
② 试剂中如含有草酸，可以抑制内源性 LD 对乳酸的 氧化反应。
第20页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血氨测定方法概述
尿酸氧化酶法
根据血清尿酸在尿酸酶的作用下生成尿囊素及 H2O2 ， 生成的 H2O2 与 4 － AA 和 TOOS 在 POD 的作用下最终生成紫 红色的醌亚胺，其颜色深浅与尿酸含量成正比。
尿酸 H 2 O O2 尿酸酶 尿囊素 CO 2 H 2 O2
POD H 2 O2 4 AA TOOS 紫红色醌亚胺 H 2 O
血氨的测定主要有两类方法： ①两步法，先从血浆中分离出氨，再进行测定，如离子交换树 脂法； ②一步法，即不需要分离就可以直接测定，如酶法和离子选择 电极法。 离子交换树脂法是血氨测定的参考方法；氨电极法由于氨气 敏电极选择性较高，所以方法特异性好，准确度高，但耐用性差 ，且电极的稳定性受温度、渗透压、中介液等多种因素影响。 目前，酶法由于方法简单、特异性高而被广泛应用。
第 6页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
尿酸紫外法
利用尿酸在 282-292nm 处有特异吸收峰，在尿酸酶作 用下，生成产物在此波长范围无吸收峰，因此，在此 波长下测量酶作用前后的吸光度之差，便可计算血清 尿酸的含量，该法为目前临床实验室的最佳方法。
第 7页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血清尿酸（UA）测定 方法性能评价 ①尿酸酶紫外法的特异性和抗干扰性好，标本用量少，无 需制备无蛋白滤液，而且方法简便快速； ②本方法需要高质量石英比色皿，在使用紫外分光光度计 前需对其波长进行校正，还要注意控制反应条件即温度、 时间及溶液的pH值等； ③自动生化分析仪通常不具备290nm左右的检测波长，因而 该法在临床实验室基本没有采用。
谷氨酸脱氢酶法测定血氨 方法性能评价 ①该法特异性强、快速，是较为理想的氨分析方法； ② 该法在 pH7.0 以上时， ADP 是 GLDH 的稳定剂和激活剂， 能加速反应；用 NADPH 取代原来的 NADH ，既可缩短反应时 间，又能防止假阳性（因为血浆中有许多以 NADH为辅酶的 脱氢酶，用NADH时易产生负反应）；
第37页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
葡萄糖氧化酶法测定 葡萄糖性能评价
③相比之下，肌氨酸氧化酶法具有灵敏度高，线性范
围宽，试剂稳定性好等优点。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血浆碳酸氢根 测定方法概述
血浆 HCO3- 测定方法主要有离子选择电极法、
滴定法和酶速率法等。酶速率法为HCO3-直
接参与化学反应，操作简单，反应特异， 更适合临床常规检测。
第31页
第 4页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
尿酸（UA）的酶法测定
包括尿酸氧化酶法、尿酸酶紫外法、尿酸氧化 酶传感器检测法等。由于各种方法受试剂、仪 器等不同的影响，各方法之间的检测结果偏差 较大，结果之间缺乏可比性。目前，临床上主 要采用尿酸氧化酶法和酶紫外法测定。
第 5页
一、血清尿酸（UA）测定
一、葡萄糖
二、糖化血清蛋白
过氧化物酶 指示系统 测定法
三、血清三酰甘油 四、血清总胆固醇 五、血清HDL-C和LDL-C
第34页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
概述
Trinder反应指示终点
生化物质在氧化酶的催化下，生成H2O2
过氧化物酶指示系统是临床生化物质 最常用的测定方法
第35页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血清胆红素测定 方法性能评价
①酶法特异性高，重复性较好；
②该法解决了长期以来用重氮反应法测定胆红素条件
的不同，包括试剂种类和浓度不同以及反应时间不同 而造成测定值变异大的问题；
③特别是对于CB，由于 BOD仅对血清CB 进行选择性氧
化, 而不对δ -胆红素和UB 发生氧化反应, 因此反应 具有较好的特异性。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
谷氨酸脱氢酶法测定血氨 在谷氨酸脱氢酶 (GLDH)作用下，血浆中氨与 α 酮戊二酸和 NADPH 反应，生成谷氨酸和 NADP+ ， NADPH 在 340nm 吸光度的下降程度与反应体系中氨的浓度呈 正比关系。
第22页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
肌酐测定方法概述
肌酐酶法测定主要有肌酐亚氨酸水解酶偶 联谷氨酸脱氢酶法和酶偶联肌氨酸氧化酶 法两种。
第28页
脱氢酶法测定肌酐
肌酐在肌酐亚氨基水解酶(CRDI)的作用下水解为N-甲基-乙内酰脲和NH4+ ，NH4+与NADPH和α -酮戊二酸在GLDH的作用下，生成L-谷氨酸和NADP+， 记录340 nm处吸光度的下降，进而计算出标本中肌酐的浓度。
血液乳酸与丙酮酸 测定方法概述
血液乳酸测定的方法有乳酸氧化酶法、酶电极 法和乳酸脱氢酶法。 血液丙酮酸的酶法测定主要包括乳酸脱氢酶法 和丙酮酸氧化酶法。 临床血液乳酸与丙酮酸测定大多采用乳酸脱 氢酶法。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
脱氢酶法测定乳酸
根据乳酸在乳酸脱氢酶（LD ）催化下脱氢生成丙酮酸，氧化 型NAD+ 接受氢转变成还原型 NADH 。加入硫酸肼可捕获产物丙 酮酸促成反应完成。生成的NADH与乳酸为等量摩尔，于340nm 波长测定NADH的吸光度，可计算出血液中的乳酸含量。
葡萄糖 测定方法概述
葡萄糖的检测方法较多，可归纳为氧化还
原法（无机化学法）、缩合法（有机化学
法）和酶法（生物化学法）三类。 酶法包括葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法、 己糖激酶（HK）法、葡萄糖脱氢酶法和葡 萄糖氧化酶-氧速率（GOD-POR）法。
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葡萄糖氧化酶法测定 葡萄糖
根据 GOD 可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸并同时产生 H2O2 ，生成的H2O2 参与 Trinder 反应，生成醌亚胺色素，在505nm 波长 下比色检测，生成的吸光度与葡萄糖浓度成正比。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
脱氢酶法测定丙酮酸
是乳酸测定的逆反应，丙酮酸在LD的催化下，接受NADH递 给的氢，还原为乳酸并生成NAD+。根据NADH吸光度的下降 值可测定样品中的丙酮酸。
第16页
脱氢酶法测定乳酸和丙酮酸 方法性能评价
①酮体易受饮食影响，剧烈运动时乳酸可在短时间内明显增加 ，因此，抽血前患者应保持空腹和完全静息至少2h； ②血中丙酮酸极不稳定，血液抽出后1min就会减低，如用偏磷 酸沉淀蛋白后放4℃时可稳定8d； ③丙酮酸标准应用液会发生聚合反应，其聚合体的酶促反应速 率与非聚合体不同，故丙酮酸标准应用液必须新鲜配制； ④本方法使用的偏磷酸易被氢离子催化成正磷酸而失去沉淀 蛋白的作用，偏磷酸溶液在4℃时仅能稳定1周； ⑤抗凝剂用肝素-氟化钠较好。
氧化时待测物脱下的氢交给了氧化型辅酶，使其转变为还原型辅酶； 还原时待测物需要的氢由还原型辅酶提供，使其转化为氧化型辅酶
生化物质在脱氢酶的催化下发生氧化还原反应
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
一、单酶反应 直接测定法
待测物可直接发生脱氢酶促反应，并产
生可检测的信号。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
第 8页
二、血清胆红素测定
胆红素氧化酶法
胆红素呈黄色，在450nm处有最大吸收峰，胆红素氧化酶催 化胆红素氧化形成胆绿素，随着胆红素被氧化，胆红素在450nm 处吸光度下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。在pH为8.0 的条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测 450nm吸光度的下降值反映的是总胆红素的含量。
第17页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血浆β–羟丁酸测定 方法概述
血浆β -羟丁酸的测定方法有酸氧化比色法、 气相色谱法、酶法和毛细管等速电泳法等
脱氢酶Baidu Nhomakorabea是血浆β -羟丁酸测定的常用方法。
第18页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
脱氢酶法测定血浆β –羟丁酸
β - 羟丁酸在 β - 羟丁酸脱氢酶的催化下，被氧化生成乙酰乙酸， 同时 NAD+ 被还原为 NADH ，在 pH8.5 时测定 340nm 波长下 NADH 吸光度 上升的速率，就可以计算出血浆中β -羟丁酸的浓度。
尿素测定方法概述
尿素的测定方法可分为化学比色法和
尿素酶法两大类。 尿素酶法简单、快速、准确、特异性 强，易于自动化。
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酶偶联脱氢酶法测定 尿素 尿素酶催化尿素分解产生氨，氨在谷氨酸脱氢酶（GLDH） 的作用下使 NADH 氧化为 NAD+ ，然后在 340nm 下测定吸光度 的降低值，用标准对照速率法即可计算出血清尿素的含量
源性氨的污染。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
二、酶偶联脱氢酶 指示系统测定法
待当待测物不可直接发生脱氢酶促反应时，可通
过一个或多个辅助酶反应，使其产物可发生脱氢
酶反应，并产生可检测的信号。
第24页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
第29页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
肌酐脱氢酶法性能评价 ①肌酐脱氢酶法与参考方法高效液相色谱法具有良好的相关 性，精密度好、准确度高、线性范围宽，不受黄疸、乳糜血 、溶血和临床常用治疗药物及体内代谢物的干扰，结果更趋 于真值，易于自动化分析，可用于血液及尿液的检测。 ②该方法的主要缺点是试剂不够稳定，且肌酐酶来源 困难，使得试剂盒价格昂贵，影响其在临床实验室的 普遍使用。
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第二节 脱氢酶指示系统测定法
一、单酶反应直接测定法： （一）血液乳酸与丙酮酸测定 （二）血浆β –羟丁酸测定 （三）血氨测定 脱氢酶 1 指示系统
二、酶偶联脱氢酶指示系统 测定法： （一）尿素测定 （二）肌酐测定 （三）血浆碳酸氢根测定
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
概述
根据340nm处吸光度的变化，计算以NAD（H）或NADP（H）为辅酶的 酶促反应中待测物的浓度
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
贵阳医学院 潘卫
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
教学目标与要求
` 掌握
酶促反应法测定生物化学物质定义、分类及其应 用原理；UA、BIL、尿素、肌酐、葡萄糖、糖化 血清蛋白、TG、TCH、HDL-C、LDL-C、TBA 酶促反应法测定的原理及其优缺点与注意事项。 酶促反应法测定其它生物化学物质的原理及其优 缺点与注意事项。
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
酶法测定血浆碳酸氢根 性能评价 ① 在准备试剂和收集标本时，应严格密封，以最大限度 地减少干扰如标本中CO2的挥发； ②试剂浑浊或试剂空白吸光度小于1.0时都不能使用； ③内源性丙酮酸和LD对反应产生干扰，此干扰可由草氨酸 钠消除。
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第三节 过氧化物酶指示系统测定法
第26页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
酶偶联脱氢酶法测定 尿素方法性能评价 尿素酶偶联脱氢酶法测定血清尿素方法简便、快速， 适用于临床常规分析 但该法存在内源性氨和外源性氨，以及内源性脱氢酶和还 原型辅酶的干扰，需采用含LD抑制剂（如高浓度丙酮酸） 的双试剂法来测定，否则测定结果偏高。
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` 熟悉
` 了解
上述酶促反应法测定生物化学物质的方法学评价， 以及其方法的历史演变。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
主要内容
酶反应前后光吸收变化测定法 脱氢酶指示系统测定法 过氧化物酶指示系统测定法 酶循环测定法 酶激活和酶抑制测定法
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第一节 酶反应前后光吸收变化测定法
一、血清尿酸测定 利用吸光度的 差值计算 1 物质的 含量 二、血清胆红素测定
酶法测定血浆碳酸氢根
血浆中的HCO3-在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下，与磷 酸烯醇式丙酮酸（ PEP ）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸 和苹果酸脱氢酶（ MDH ）反应，生成苹果酸，同时将 NADH 氧化成 NAD+；在340nm波长处吸光度的降低与样品中HCO3-含量成正比。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
脱氢酶法测定血浆β –羟丁酸 方法性能评价
① 由于易受饮食影响，原则上应空腹取血，β -羟丁 酸避免在室温放置，4℃可以稳定30d。
② 试剂中如含有草酸，可以抑制内源性 LD 对乳酸的 氧化反应。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血氨测定方法概述
尿酸氧化酶法
根据血清尿酸在尿酸酶的作用下生成尿囊素及 H2O2 ， 生成的 H2O2 与 4 － AA 和 TOOS 在 POD 的作用下最终生成紫 红色的醌亚胺，其颜色深浅与尿酸含量成正比。
尿酸 H 2 O O2 尿酸酶 尿囊素 CO 2 H 2 O2
POD H 2 O2 4 AA TOOS 紫红色醌亚胺 H 2 O
血氨的测定主要有两类方法： ①两步法，先从血浆中分离出氨，再进行测定，如离子交换树 脂法； ②一步法，即不需要分离就可以直接测定，如酶法和离子选择 电极法。 离子交换树脂法是血氨测定的参考方法；氨电极法由于氨气 敏电极选择性较高，所以方法特异性好，准确度高，但耐用性差 ，且电极的稳定性受温度、渗透压、中介液等多种因素影响。 目前，酶法由于方法简单、特异性高而被广泛应用。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
尿酸紫外法
利用尿酸在 282-292nm 处有特异吸收峰，在尿酸酶作 用下，生成产物在此波长范围无吸收峰，因此，在此 波长下测量酶作用前后的吸光度之差，便可计算血清 尿酸的含量，该法为目前临床实验室的最佳方法。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血清尿酸（UA）测定 方法性能评价 ①尿酸酶紫外法的特异性和抗干扰性好，标本用量少，无 需制备无蛋白滤液，而且方法简便快速； ②本方法需要高质量石英比色皿，在使用紫外分光光度计 前需对其波长进行校正，还要注意控制反应条件即温度、 时间及溶液的pH值等； ③自动生化分析仪通常不具备290nm左右的检测波长，因而 该法在临床实验室基本没有采用。
谷氨酸脱氢酶法测定血氨 方法性能评价 ①该法特异性强、快速，是较为理想的氨分析方法； ② 该法在 pH7.0 以上时， ADP 是 GLDH 的稳定剂和激活剂， 能加速反应；用 NADPH 取代原来的 NADH ，既可缩短反应时 间，又能防止假阳性（因为血浆中有许多以 NADH为辅酶的 脱氢酶，用NADH时易产生负反应）；
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
葡萄糖氧化酶法测定 葡萄糖性能评价
③相比之下，肌氨酸氧化酶法具有灵敏度高，线性范
围宽，试剂稳定性好等优点。
第30页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血浆碳酸氢根 测定方法概述
血浆 HCO3- 测定方法主要有离子选择电极法、
滴定法和酶速率法等。酶速率法为HCO3-直
接参与化学反应，操作简单，反应特异， 更适合临床常规检测。
第31页
第 4页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
尿酸（UA）的酶法测定
包括尿酸氧化酶法、尿酸酶紫外法、尿酸氧化 酶传感器检测法等。由于各种方法受试剂、仪 器等不同的影响，各方法之间的检测结果偏差 较大，结果之间缺乏可比性。目前，临床上主 要采用尿酸氧化酶法和酶紫外法测定。
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一、血清尿酸（UA）测定
一、葡萄糖
二、糖化血清蛋白
过氧化物酶 指示系统 测定法
三、血清三酰甘油 四、血清总胆固醇 五、血清HDL-C和LDL-C
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
概述
Trinder反应指示终点
生化物质在氧化酶的催化下，生成H2O2
过氧化物酶指示系统是临床生化物质 最常用的测定方法
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血清胆红素测定 方法性能评价
①酶法特异性高，重复性较好；
②该法解决了长期以来用重氮反应法测定胆红素条件
的不同，包括试剂种类和浓度不同以及反应时间不同 而造成测定值变异大的问题；
③特别是对于CB，由于 BOD仅对血清CB 进行选择性氧
化, 而不对δ -胆红素和UB 发生氧化反应, 因此反应 具有较好的特异性。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
谷氨酸脱氢酶法测定血氨 在谷氨酸脱氢酶 (GLDH)作用下，血浆中氨与 α 酮戊二酸和 NADPH 反应，生成谷氨酸和 NADP+ ， NADPH 在 340nm 吸光度的下降程度与反应体系中氨的浓度呈 正比关系。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
肌酐测定方法概述
肌酐酶法测定主要有肌酐亚氨酸水解酶偶 联谷氨酸脱氢酶法和酶偶联肌氨酸氧化酶 法两种。
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脱氢酶法测定肌酐
肌酐在肌酐亚氨基水解酶(CRDI)的作用下水解为N-甲基-乙内酰脲和NH4+ ，NH4+与NADPH和α -酮戊二酸在GLDH的作用下，生成L-谷氨酸和NADP+， 记录340 nm处吸光度的下降，进而计算出标本中肌酐的浓度。
血液乳酸与丙酮酸 测定方法概述
血液乳酸测定的方法有乳酸氧化酶法、酶电极 法和乳酸脱氢酶法。 血液丙酮酸的酶法测定主要包括乳酸脱氢酶法 和丙酮酸氧化酶法。 临床血液乳酸与丙酮酸测定大多采用乳酸脱 氢酶法。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
脱氢酶法测定乳酸
根据乳酸在乳酸脱氢酶（LD ）催化下脱氢生成丙酮酸，氧化 型NAD+ 接受氢转变成还原型 NADH 。加入硫酸肼可捕获产物丙 酮酸促成反应完成。生成的NADH与乳酸为等量摩尔，于340nm 波长测定NADH的吸光度，可计算出血液中的乳酸含量。
葡萄糖 测定方法概述
葡萄糖的检测方法较多，可归纳为氧化还
原法（无机化学法）、缩合法（有机化学
法）和酶法（生物化学法）三类。 酶法包括葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法、 己糖激酶（HK）法、葡萄糖脱氢酶法和葡 萄糖氧化酶-氧速率（GOD-POR）法。
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葡萄糖氧化酶法测定 葡萄糖
根据 GOD 可以高特异性的催化葡萄糖氧化成为葡萄糖酸并同时产生 H2O2 ，生成的H2O2 参与 Trinder 反应，生成醌亚胺色素，在505nm 波长 下比色检测，生成的吸光度与葡萄糖浓度成正比。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
脱氢酶法测定丙酮酸
是乳酸测定的逆反应，丙酮酸在LD的催化下，接受NADH递 给的氢，还原为乳酸并生成NAD+。根据NADH吸光度的下降 值可测定样品中的丙酮酸。
第16页
脱氢酶法测定乳酸和丙酮酸 方法性能评价
①酮体易受饮食影响，剧烈运动时乳酸可在短时间内明显增加 ，因此，抽血前患者应保持空腹和完全静息至少2h； ②血中丙酮酸极不稳定，血液抽出后1min就会减低，如用偏磷 酸沉淀蛋白后放4℃时可稳定8d； ③丙酮酸标准应用液会发生聚合反应，其聚合体的酶促反应速 率与非聚合体不同，故丙酮酸标准应用液必须新鲜配制； ④本方法使用的偏磷酸易被氢离子催化成正磷酸而失去沉淀 蛋白的作用，偏磷酸溶液在4℃时仅能稳定1周； ⑤抗凝剂用肝素-氟化钠较好。
氧化时待测物脱下的氢交给了氧化型辅酶，使其转变为还原型辅酶； 还原时待测物需要的氢由还原型辅酶提供，使其转化为氧化型辅酶
生化物质在脱氢酶的催化下发生氧化还原反应
第12页
第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
一、单酶反应 直接测定法
待测物可直接发生脱氢酶促反应，并产
生可检测的信号。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
第 8页
二、血清胆红素测定
胆红素氧化酶法
胆红素呈黄色，在450nm处有最大吸收峰，胆红素氧化酶催 化胆红素氧化形成胆绿素，随着胆红素被氧化，胆红素在450nm 处吸光度下降，下降程度与胆红素被氧化的量相关。在pH为8.0 的条件下，未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，因而检测 450nm吸光度的下降值反映的是总胆红素的含量。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
血浆β–羟丁酸测定 方法概述
血浆β -羟丁酸的测定方法有酸氧化比色法、 气相色谱法、酶法和毛细管等速电泳法等
脱氢酶Baidu Nhomakorabea是血浆β -羟丁酸测定的常用方法。
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第二十六章 酶促反应法测定生物化学物质
脱氢酶法测定血浆β –羟丁酸
β - 羟丁酸在 β - 羟丁酸脱氢酶的催化下，被氧化生成乙酰乙酸， 同时 NAD+ 被还原为 NADH ，在 pH8.5 时测定 340nm 波长下 NADH 吸光度 上升的速率，就可以计算出血浆中β -羟丁酸的浓度。
尿素测定方法概述
尿素的测定方法可分为化学比色法和
尿素酶法两大类。 尿素酶法简单、快速、准确、特异性 强，易于自动化。
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酶偶联脱氢酶法测定 尿素 尿素酶催化尿素分解产生氨，氨在谷氨酸脱氢酶（GLDH） 的作用下使 NADH 氧化为 NAD+ ，然后在 340nm 下测定吸光度 的降低值，用标准对照速率法即可计算出血清尿素的含量