耐药胞株构建

稳定/耐药细胞株构建

一、服务介绍

稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。本公司可提供普通脂质体转染后单克隆法筛选,以及病毒感染后筛选稳定株和耐药株

二、技术原理

稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞，根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上，得到单细胞长出的阳性单克隆，继而得到稳定转染细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）

三、操作流程

1、载体构建：将外源基因构建到合适的载体上，如需病毒转染，则包装病毒。

2、筛选浓度测定：以14 天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。

3、细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和

细胞形状而定

4、细胞转染：用构建好的载体（或包装好的病毒）转染目的细胞。

5、抗生素筛选。

6、鉴定筛选结果

四、客户提供

1.外源基因及相关基础数据；

2.生长状态良好的靶细胞系,特殊细胞需提供培养基

3.与该技术相关其它信息

五、实验结果提供形式

1、构建完成的稳定/耐药细胞株以及对照细胞株

2、稳转/耐药细胞株标准实验报告及相关的外源基因表达分析结果

3、实验流程及报告电子版本一份

六、实验服务周期

约5-8周左右，具体时间根据细胞生长,药物诱导情况而定。

七、质量承诺及舜百优势

a.稳定：舜百生物保证20代以内稳定转染细胞稳定表达。

b.迅速：一般控制在1.5个月以内完成构建。

c.经济：价格实惠，性价比高。

d.质量保证：对外源基因进行严格鉴定。