耐药细胞株耐药特性一般研究方案

耐药细胞株耐药特性一般研究方案

1 耐药谱

MTT法测定亲本株和耐药株对于不同抗肿瘤药物的IC50

计算耐药株的耐药指数，以检测耐药株的多药耐药性与了解耐药谱。

凯基现可免费提供的抗肿瘤药物：紫杉醇、阿霉素、依托泊苷、氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱

2 增殖能力

◆绘制生长曲线，计算倍增时间

MTT法检测亲本株和耐药株7天的数量（每天测一次），绘制细胞的生长曲线，计算细胞倍增时间，一般耐药株的倍增时间较亲本株变长。

◆流式细胞仪检测细胞周期

PI染色法检测亲本株和耐药株的细胞周期，比较G1期、S期、G2期的细胞比率。不同耐药细胞株各个时期的细胞比率无共同特征。

3 耐药能力

流式细胞仪检测罗丹明蓄积能力

测定亲本株与耐药株的P-gp糖泵对罗丹明的外排能力

4 耐药机制

测定亲本株与耐药株耐药基因与蛋白表达的变化

基因检测可采用RT-PCR、Real time-PCR等，蛋白检测可采用WB、IF、IHC等，基因和蛋白各采用一种方法检测，基因检测推荐采用Real time-PCR，蛋白检测推荐采用WB

常见耐药基因与蛋白：

◆MDR-1/P-gp（P糖蛋白）：分子量约为170 kD的磷酸糖蛋白，具有ATP依赖

性的药物外排泵功能。现已证实，P-gp高表达为产生MDR的主要机制，P-gp 可以和抗肿瘤药物及疏水亲脂性化合物结合，通过ATP水解供能，逆浓度梯

度将药物泵出细胞外，导致细胞内药物浓度降低而产生耐药。

◆MRP1（多药耐药相关蛋白1）：分子量约190kDa，结构和功能与P—gP的类

似

◆LRP（肺耐性蛋白）：分子量约ll0 kD胞质穹隆蛋白，LRP介导的MDR与细胞

核、细胞质运输有关，正常组织外，很多不同来源的肿瘤如直肠癌、白血病、卵巢癌等均发现有LRP的过度表达

◆BCRP（乳腺癌耐药蛋白）：是一种分子量约95 kD的磷酸糖蛋白药物转运体以上四种蛋白，一般检测P糖蛋白、多药耐药相关蛋白1