埃博拉病毒疫苗的研究进展
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埃博拉病毒疫苗的研究进展
袁嘉昊，胡璐妮，莫芸芳，钟雅婷，胡仪曼
2017.06.01
1 研究背景
2 埃博拉疫苗的发展历史及分类 3 重组病毒载体埃博拉疫苗简介 目录
Contents
4 重组牛痘病毒的制备与评价
5 总结与展望
Part
研究背景
病毒发现 结构形态 治病原理
1
1.1 病毒发现
引起最致命的病毒性出血热， 50%~90%的死亡率 疫情涉及到了多个国家和地区，出现 的病例和死亡数字超过了其它所有疫 情的总和 世界卫生组织列为“国际间关注 的公共卫生紧急事件”
Part
重组牛痘载体 疫苗的制备与评价
重组MVA的制备
4
重组MVA的评价
4.1 重组MVA的制备
GPT：鸟苷酸-黄嘌呤磷酸核糖转移酶 RFP：红色荧光蛋白
4.1 重组MVA的制备
GP-Z-EBOV：埃博拉-扎伊尔型病毒的糖蛋白基因
4.1 重组MVA的制备
目的基因 载体质粒
插入
侵染
MVA病毒 鸡胚层纤维细胞 重组质粒 感染病毒的细胞
优点： 缺点：
耐受性好，不易出现病毒血症
病毒颗粒剂量需求大
3.2 非复制型载体埃博拉疫苗
腺病毒载体疫苗（Ad） 极高剂量下才会发生不良反应 疟疾、艾滋病和丙肝
改良牛痘载体疫苗(MVA) 不复制产生后代，但可以有效表达 大量外源抗原 毒性极弱、宿主限制性较好
3 重组病毒载体埃博拉疫苗简介
疫苗名称 优点
复制型载体埃博拉疫苗（rVSV-EBOV,rCMV,HPIV3,RABV） 重组水泡性口炎病毒载体 可以产生抗体，没有致病性 疫苗 非复制型载体埃博拉疫苗（MVA,VEEV VLP,ChAd3,KUN VLP） 腺病毒载体疫苗 极高剂量下发生不良反应 不良反应分级轻 改良牛痘载体疫苗 (MVA) 基因组较大，可激发免疫反应 毒性极弱，宿主限制性好
亚基蛋白疫 苗 重组病毒载 体疫苗 病毒样颗粒 疫苗 灭活埃博拉 疫苗 类病毒颗粒
Part
重组病毒载体 埃博拉疫苗简介
复制型载体埃博拉疫苗
3
非复制型载体埃博拉疫苗
3.1 重组病毒载体埃博拉疫苗
定义：
• 以减毒或无毒病毒为载体 • 基因工程修饰病毒的基因组，使其表达埃博拉病毒的 相关蛋白作为抗原
1.2 形态结构
GP：
由病毒自身基因编 码并表达在病毒表面 参与病毒的吸附以 及病毒与细胞融合的 全过程
1.3 致病原理
ADE (Antibody-Dependent Enhancement) 抗体依赖性增强作用
发展历史及分类
发展历史
分类
2 埃博拉疫苗的
Part
2.1 埃博拉疫苗的发展历史与分类
转染
4.1 重组MVA的制备呤 和次黄嘌呤环境 敲除筛选标签片段 确认基因序列
逆转录PCR
4.1 重组MVA的制备
同时表达四种不同的埃博拉病毒蛋白抗原
4.2 重组MVA的活性评价
4.2.1 重组MVA接种后的抗体表达水平
三种病毒蛋白接 种后的抗体表达 水平均显著提高
请在这里输文字
4.2.2 重组MVA接种后抗线状病毒水平
Part
5
总结与展望
总结
展望
5 总结与展望
诱导灵长类动物的有 效免疫应答 有效解决了应急需求
存在潜在的安全性风险 距离正式批准上市仍有 一段路要走
参考文献
[1] Lambe T, Bowyer G, Ewer KJ. A review of Phase I trials of Ebola virus vaccines: what can we learn from the race to develop novel vaccines? Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2017; 372(1721). doi:10.1098/rstb.2016.0295. [2] Rojek A, Horby P, Dunning J. Insights from clinical research completed during the west Africa Ebola virus disease epidemic, Lancet Infect Dis. 2017. doi: 10.1016/S1473-3099(17)30234-7 [3] Pavot Vclin Immunol. Ebola virus vaccines: Where do we stand? 2016; 173:44-49. doi: 10.1016/j.clim.2016.10.016 [4] Ohimain EI, Recent advances in the development of vaccines for Ebola virus disease. Virus Res. 2016;211:174-85. doi: 10.1016/j.virusres.2015.10.021. [5] Wu XX, Yao HP, Wu NP, Gao HN, Wu HB, Jin CZ, Lu XY, Xie TS, Li LJ. Ebolavirus Vaccines: Progress in the Fight Against Ebola Virus Disease. Cell Physiol Biochem. 2015;37(5):1641-58. doi: 10.1159/000438531 [6] Wang Y, Li J, Hu Y, Liang Q, Wei M, Zhu F. Ebola vaccines in clinical trial: The promising candidates. Hum Vaccin Immunother. 2017;13(1):153-168. doi: 10.1080/21645515.2016.1225637. [7] Martin B, Canard B, Decroly E. Filovirus proteins for antiviral drug discovery: Structure/function bases of the replication cycle. Antiviral Res. 2017;141:48-61. doi: 10.1016/j.antiviral.2017.02.004. [8] Martin B, Hoenen T, Canard B, Decroly E. Filovirus proteins for antiviral drug discovery: A structure/function analysis of surface glycoproteins and virus entry. Antiviral Res. 2016;135:1-14. doi:10.1016/j.antiviral.2016.09.001. [9] VOLKMANN ARIANE; STEIGERWALD ROBIN; HOCHREIN HUBERTUS; DIRMEIER ULRIKE; LAUTERBACH HENNING; HAUSMANN JÜRGEN. RECOMBINANT MODIFIED VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) FILOVIRUS VACCINE. German. WO2015EP70161[P].2015-09-03
分类：
• 复制型载体埃博拉疫苗 • 非复制型载体埃博拉疫苗
3.1 复制型载体埃博拉疫苗
特点：免疫效率高，所需剂量少，但安全性较差 e.g. 重组水泡性口炎病毒载体疫苗（VSV）
• 替换糖蛋白 • 产生针对埃博拉病毒 的抗体 • 没有致病性
3.2 非复制型载体埃博拉疫苗
操作：
插入编码埃博拉病毒GP的基因 敲除病毒生命周期中重要的基因
袁嘉昊，胡璐妮，莫芸芳，钟雅婷，胡仪曼
2017.06.01
1 研究背景
2 埃博拉疫苗的发展历史及分类 3 重组病毒载体埃博拉疫苗简介 目录
Contents
4 重组牛痘病毒的制备与评价
5 总结与展望
Part
研究背景
病毒发现 结构形态 治病原理
1
1.1 病毒发现
引起最致命的病毒性出血热， 50%~90%的死亡率 疫情涉及到了多个国家和地区，出现 的病例和死亡数字超过了其它所有疫 情的总和 世界卫生组织列为“国际间关注 的公共卫生紧急事件”
Part
重组牛痘载体 疫苗的制备与评价
重组MVA的制备
4
重组MVA的评价
4.1 重组MVA的制备
GPT：鸟苷酸-黄嘌呤磷酸核糖转移酶 RFP：红色荧光蛋白
4.1 重组MVA的制备
GP-Z-EBOV：埃博拉-扎伊尔型病毒的糖蛋白基因
4.1 重组MVA的制备
目的基因 载体质粒
插入
侵染
MVA病毒 鸡胚层纤维细胞 重组质粒 感染病毒的细胞
优点： 缺点：
耐受性好，不易出现病毒血症
病毒颗粒剂量需求大
3.2 非复制型载体埃博拉疫苗
腺病毒载体疫苗（Ad） 极高剂量下才会发生不良反应 疟疾、艾滋病和丙肝
改良牛痘载体疫苗(MVA) 不复制产生后代，但可以有效表达 大量外源抗原 毒性极弱、宿主限制性较好
3 重组病毒载体埃博拉疫苗简介
疫苗名称 优点
复制型载体埃博拉疫苗（rVSV-EBOV,rCMV,HPIV3,RABV） 重组水泡性口炎病毒载体 可以产生抗体，没有致病性 疫苗 非复制型载体埃博拉疫苗（MVA,VEEV VLP,ChAd3,KUN VLP） 腺病毒载体疫苗 极高剂量下发生不良反应 不良反应分级轻 改良牛痘载体疫苗 (MVA) 基因组较大，可激发免疫反应 毒性极弱，宿主限制性好
亚基蛋白疫 苗 重组病毒载 体疫苗 病毒样颗粒 疫苗 灭活埃博拉 疫苗 类病毒颗粒
Part
重组病毒载体 埃博拉疫苗简介
复制型载体埃博拉疫苗
3
非复制型载体埃博拉疫苗
3.1 重组病毒载体埃博拉疫苗
定义：
• 以减毒或无毒病毒为载体 • 基因工程修饰病毒的基因组，使其表达埃博拉病毒的 相关蛋白作为抗原
1.2 形态结构
GP：
由病毒自身基因编 码并表达在病毒表面 参与病毒的吸附以 及病毒与细胞融合的 全过程
1.3 致病原理
ADE (Antibody-Dependent Enhancement) 抗体依赖性增强作用
发展历史及分类
发展历史
分类
2 埃博拉疫苗的
Part
2.1 埃博拉疫苗的发展历史与分类
转染
4.1 重组MVA的制备呤 和次黄嘌呤环境 敲除筛选标签片段 确认基因序列
逆转录PCR
4.1 重组MVA的制备
同时表达四种不同的埃博拉病毒蛋白抗原
4.2 重组MVA的活性评价
4.2.1 重组MVA接种后的抗体表达水平
三种病毒蛋白接 种后的抗体表达 水平均显著提高
请在这里输文字
4.2.2 重组MVA接种后抗线状病毒水平
Part
5
总结与展望
总结
展望
5 总结与展望
诱导灵长类动物的有 效免疫应答 有效解决了应急需求
存在潜在的安全性风险 距离正式批准上市仍有 一段路要走
参考文献
[1] Lambe T, Bowyer G, Ewer KJ. A review of Phase I trials of Ebola virus vaccines: what can we learn from the race to develop novel vaccines? Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2017; 372(1721). doi:10.1098/rstb.2016.0295. [2] Rojek A, Horby P, Dunning J. Insights from clinical research completed during the west Africa Ebola virus disease epidemic, Lancet Infect Dis. 2017. doi: 10.1016/S1473-3099(17)30234-7 [3] Pavot Vclin Immunol. Ebola virus vaccines: Where do we stand? 2016; 173:44-49. doi: 10.1016/j.clim.2016.10.016 [4] Ohimain EI, Recent advances in the development of vaccines for Ebola virus disease. Virus Res. 2016;211:174-85. doi: 10.1016/j.virusres.2015.10.021. [5] Wu XX, Yao HP, Wu NP, Gao HN, Wu HB, Jin CZ, Lu XY, Xie TS, Li LJ. Ebolavirus Vaccines: Progress in the Fight Against Ebola Virus Disease. Cell Physiol Biochem. 2015;37(5):1641-58. doi: 10.1159/000438531 [6] Wang Y, Li J, Hu Y, Liang Q, Wei M, Zhu F. Ebola vaccines in clinical trial: The promising candidates. Hum Vaccin Immunother. 2017;13(1):153-168. doi: 10.1080/21645515.2016.1225637. [7] Martin B, Canard B, Decroly E. Filovirus proteins for antiviral drug discovery: Structure/function bases of the replication cycle. Antiviral Res. 2017;141:48-61. doi: 10.1016/j.antiviral.2017.02.004. [8] Martin B, Hoenen T, Canard B, Decroly E. Filovirus proteins for antiviral drug discovery: A structure/function analysis of surface glycoproteins and virus entry. Antiviral Res. 2016;135:1-14. doi:10.1016/j.antiviral.2016.09.001. [9] VOLKMANN ARIANE; STEIGERWALD ROBIN; HOCHREIN HUBERTUS; DIRMEIER ULRIKE; LAUTERBACH HENNING; HAUSMANN JÜRGEN. RECOMBINANT MODIFIED VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) FILOVIRUS VACCINE. German. WO2015EP70161[P].2015-09-03
分类：
• 复制型载体埃博拉疫苗 • 非复制型载体埃博拉疫苗
3.1 复制型载体埃博拉疫苗
特点：免疫效率高，所需剂量少，但安全性较差 e.g. 重组水泡性口炎病毒载体疫苗（VSV）
• 替换糖蛋白 • 产生针对埃博拉病毒 的抗体 • 没有致病性
3.2 非复制型载体埃博拉疫苗
操作：
插入编码埃博拉病毒GP的基因 敲除病毒生命周期中重要的基因