抗肿瘤指导原则

TRTV

T/C % = ────×100%

CRTV

TRTV：治疗组RTV ；CRTV：阴性对照组RTV。

疗效评价标准：T/C % >40 %为无效；T/C % ≤40%，并经统计学处理P<为有效。

小鼠肿瘤模型

生长较慢小鼠肿瘤采用与裸鼠移植瘤同样的测量瘤径的评价方法。

生长较快小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价。试验结束后处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，称瘤重。阴性对照组肿瘤平均瘤重小于1克，或20%肿瘤重量小于400毫克，表示肿瘤生长不良，试验作废。

疗效评价公式：

给药组平均瘤重-阴性对照组平均瘤重

肿瘤生长抑制率= ───────────────────────────── ×100%

阴性对照组平均瘤重

评价标准：

肿瘤生长抑制率<40% 为无效；肿瘤生长抑制率≥40%，并经统计学处理P<为有效。

原位接种模型

不同原位接种模型可采用不同评价方法，主要有瘤重和生存时间评价法。如肝原位接种可用瘤重评价，颅内接种可用生存时间评价。评价方法、标准和注意事项同腹水瘤模型和小鼠肿瘤模型。

四、抗肿瘤药物的特殊要求

I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制的初步研究。非细胞毒类药物除完成体内外抗肿瘤试验，还应进行特定抗肿瘤作用研究。

1. 生物反应调节剂

药效学包括：体内抗癌试验和免疫功能研究。

体内抗癌试验注意点：

模型：裸鼠是免疫缺陷动物，一般应用正常免疫鼠肿瘤模型。

给药时间：可按常规给药，也可在接种前预先给药，接种后继续给药或停药。

105个瘤细胞/小鼠。肿瘤细胞接种量：可比细胞毒类药物低一个数量级，一般为(1-5)

给药方法：可单独给药，也可与其它抗肿瘤药物合并使用，观察增效或减毒作用。

免疫功能试验方法

具有抑瘤作用的生物反应调节剂，还需作免疫功能测定,以明确其抑瘤作用是否与免疫功能调控有关。免疫功能测定包括细胞免疫和体液免疫两方面。

免疫功能测定有：

（1）巨噬细胞功能测定

（2）天然杀伤细胞(natural kill cell) 测定

（3）淋巴细胞转化试验

（4）淋巴因子活化的杀伤细胞测定(lymphocyte- activated killer cell)

（5）各种细胞因子测定，如IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α等。

（6）迟发型超敏反应检测

2. 肿瘤耐药逆转剂

体外抗耐药活性试验

选择2-3对肿瘤耐药/敏感细胞株，采用MTT法或SRB法测定细胞毒性。一般在无毒剂量或相当于IC10的剂量下设三个剂量，并设立相应的阳性和阴性对照组。评价逆转效果用逆转倍数(fold reversal, FR)表示：FR=IC50(不加逆转剂)/IC50(加逆转剂)。

注意的方面：

耐药株的耐药性：耐药株因传代，尤其是撤药后耐药性可改变或消失；试验前必须对试验耐药株进行耐药倍数(FR)测定，确保试验的可*性。若非逆转多药耐药 (MDR) 而是逆转单药耐药，则实验的瘤株中需有针对该药的耐药细胞株。

阳性对照药建议采用

维拉帕米 (verap amil) 10μM

环孢菌素A (cyclosporin A) 3μM 。

体内抗肿瘤耐药活性试验

小鼠敏感和对应的耐药肿瘤和人癌裸鼠敏感和对应的耐药移植瘤。

耐药基因及其表达产物测定

可测定肿瘤细胞内的药物浓度变化和耐药基因及其表达产物，初步明确其逆转耐药机制。包括

多药耐药基因及其编码蛋白(multidrug resistance gene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-related protein, MRP)、肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein, LRP)、其它与耐药相关的基因/蛋白及酶等。

3. 抗肿瘤转移药物

肿瘤是否转移不仅依赖于肿瘤细胞本身具有的内在转移潜能，而且也取决于机体抗转移因素的消长。所以，抗转移药物只有在动物体内模型上才能得出符合实际的结果。

体外试验

测定候选化合物作用下肿瘤细胞对基底膜的侵袭、粘附和肿瘤细胞趋化性运动的能力。

体内试验

3.2.1模型：

小鼠B16黑色素瘤、小鼠Lewis肺癌等和人癌裸鼠移植高转移瘤模型。

3.2.2 接种方法：

常用静脉注射方法，也可用皮下接种等方法。

3.2.3 评价指标

接种给药后，观察记录动物死亡时间，计算生存天数。试验结束后，称动物体重、肺重、移植瘤重，解剖显微镜下计数肺转移瘤灶、测瘤径(计算肺转移瘤体积)和病理组织学切片观察等；计算转移率

转移抑制率 = 1 - (治疗组转移率/对照组转移率)×100%。

4. 肿瘤血管生成抑制剂

体外试验

体外试验模型有:

（1）人血管内皮细胞模型：

人脐静脉血管内皮细胞和人微血管（肺、皮肤等）内皮细胞。

（2）血管形成促进因子等刺激细胞DNA合成、增殖、迁移、血管形成(tube formation)来观察药物的抗血管形成作用。

如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)或碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)

（3）肿瘤细胞模型：

主要应用国内已建立的人实体癌细胞系，确定VEGF、FGF等高分泌的细胞株。检测细胞增殖、