沙眼衣原体检测
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
结果判断客观性强
缺 点
在低感染率的人群中敏感性差
与其它微生物可有交叉反应，出现假阳性结果
酶联免疫吸附试验（ELISA）
16
临床应用
适宜用于检测沙眼衣原体高流行率的人群 临床和健康体检 沙眼衣原体感染的筛查
抗原快速检测
17
1.原理：
2.方法：拭子＋I液－80℃10分－冷5分－滴加5滴－15分读结果
男性尿道 男性尿液 女性宫颈 女性尿液 合 计
CT实验室检测的进展
• • • • • • • • 核酸扩增法:测定CT最敏感,首选，金标准 国外抗原检测法 (EIA、DFA和 RDT):不再推荐 实时荧光PCR+自动化的核酸提取仪 瑞典的变异CT株E/SW2，目标序列在发生缺失突变 感染2种以上的CT株时，可能发生基因重组 双目标检测是NAAT改进的重要标志 美国CDC已经不再推荐对阳性结果进行确认 但当用于性虐待的评估时，阳性结果必须用检测另一个 目标区域的第二种NAAT试验确认
• NAAT适用的标本：尿道、宫颈、阴道、直肠、眼分 泌物、初段尿液、精液或组织 • 非侵入性的标本是首选，特别是对无症状者的筛查。 • 初段尿：男性 • 阴道拭子：（临床医生采集或自采）女性 • 盆腔检查采集宫颈分泌物拭子 • MSM人群：直肠或咽部，且无任何症状。 • PID或LGV检测：子宫内膜或淋巴结组织活检标本 • 确认LGV需要鉴定基因型L1，L2或L3
生殖道沙眼衣原体感染特点
7
近年来研究： 引起活动性关节炎，与动脉硬化、冠心病有关 与HIV感染的促进作用
沙眼衣原体感染已成为全世界范围的公 共卫生问题!
生殖道沙眼衣原体实验室检测方法
8
1.免疫学方法（抗原检测） ELISA 免疫荧光法（IFA） 胶体金法 2.细胞培养法
3.核酸检测： PCR (Roche), LCR ( Abbott), SDA (ProbeTec BD), TMA (Aptima Gene Probe) 荧光-PCR
抗原快速检测
18
结果判断
阳性标本在结果窗见一
条细线。另外，无论标
本为阳性或阴性，都应 在质控窗显示一条细线， 表明试剂质量合格，试 验步骤正确
抗原快速检测
19
优
点
简易，方便，快速，尤其适用于基层单位
缺
点 标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果
20
结论：女性尿道拭子：敏感性32.8%, 特异性99.2% 女性宫颈拭子：敏感性49.7%,特异性97.9% 结果显示特异性较好，而较低的敏感性，提示有较高的漏检率。
25
规范性病实验室的条件: CT核酸扩增法
直肠 将取样拭子插入肛门2～3cm，从紧靠肛环边的隐窝 中取材。避免接触粪便。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
11
原理：Ab－Ag－Ab-酶 －底物－显色
方法：加入标本（孵育后洗板）
酶标抗体（孵育后洗板）
底 物（孵育）
终止液－判读结果。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
12
结果判读 cutoff＝阴性对照＋？
•
• 女性CT感染下生殖道后，通过上行至上生殖道， 可诱导慢性感染，导致盆腔炎，引起宫外孕和输 卵管因素不孕不育症 • 许多国家采取筛查措施，通过定期检测发现无症 状的感染者，并治疗感染者和性伴 • 基因型A-K感染通常局限于黏膜上皮 • 而基因型L1、L2和L3则穿过上皮，通过淋巴扩散， 引起侵袭性感染，称为性病淋巴肉芽肿（LGV) • LGV存在于非洲、亚洲、南美和加勒比海部分地区 的地方性疾病 • 男男人群中，已经发生了数起基因型L2的爆发
阳性：OD > the cutoff value 灰区（Gray Zone）: 略低于 the cutoff 阴性：低于灰区
酶联免疫吸附试验（ELISA）
13
结果判读
阳性结果的确证
2002年美国 CDC推荐：所有非培养阳性结果应用另一种 方法确证为真正阳性。 EIA 阳性：可进一步将样本进行DFA、“blocking” assay 或基因诊断确证。
标本的采集（同淋球菌培养标本的采集）
9
男性患者尿道
用男用取材拭子插入尿道 2～3cm，稍用力转动， 保留数秒钟再取出， 以采集到粘膜上皮细胞。
女性患者尿道 用同男性相似的上述方法取材。
标本的采集（同淋球菌培养标本的采集）
10
Hale Waihona Puke Baidu
宫颈 仔细检查阴道壁和宫颈，如果宫颈口外面的分泌物较 多，先用无菌棉拭清除过多的宫颈粘液。将一取样 拭 子 插 入 宫 颈 管 内 1 ～ 2cm ， 稍 用 力 转 动 ， 保 留 10～30秒后取出。
生殖道沙眼衣原体感染特点
5
病原体检测: 镜检, 培养 抗原检测: 快速, EIA 核酸检测: PCR
高流行 无症状感染 严重并发症 依赖实验室诊断
6
生殖道沙眼衣原体感染特点
感染后：
约70％女性和50％男性为无症状 86％的女性和55％的男性感染者持续感染时间为1年 以上。
不寻求治疗…….
酶联免疫吸附试验（ELISA）
14
评 价
敏感性和特异性与直接免疫荧光法相似 敏感性：79－97％ 高 特异性: 97－99％ 高 试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙 眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故
酶联免疫吸附试验（ELISA）
15
优 点
快速、方便
自动化程度高，可同时检测大批量标本
生殖道沙眼衣原体感染 的实验室诊断
朱参胜
陕西省地方病防治研究所
陕西省皮肤性病防治所
陕西西安
1
CT感染的发病机理、基因型别以及临床表现
• CT细胞内寄生，细胞内的网状体复制形态，细胞外的原 体有感染性 • 原体内化后定位于包涵体内，防止被溶酶体融合 • 免疫反应相关的炎性反应通常不十分明显，多数表现为 隐性感染 • CT诱导多种防御机制的修改和破坏，引起CT持续感染 • 基因型A-C是眼部感染 • 基因型D-K引起泌尿生殖道、直肠、咽喉和眼结膜感染， 围产期孕妇感染CT可引起新生儿结膜炎、咽喉炎和肺炎 • 多数直肠、咽喉感染，以及下生殖道感染均不表现出临 床症状
沙眼衣原体快速检测方法的评价
21
沙眼衣原体快速检测试剂的现场评估
标本 敏感性 50% 49.7% 32.8% 特异性 93.5% 97.8% 99.2%
试剂1
男性尿道拭子 宫颈拭子 阴道拭子
试剂2
核酸扩增技术
22
标
本
敏感性（％） 98.0 93.5 94.4 95.7 95.0
特异性（％） 100.0 99.8 99.9 100.0 99.9
缺 点
在低感染率的人群中敏感性差
与其它微生物可有交叉反应，出现假阳性结果
酶联免疫吸附试验（ELISA）
16
临床应用
适宜用于检测沙眼衣原体高流行率的人群 临床和健康体检 沙眼衣原体感染的筛查
抗原快速检测
17
1.原理：
2.方法：拭子＋I液－80℃10分－冷5分－滴加5滴－15分读结果
男性尿道 男性尿液 女性宫颈 女性尿液 合 计
CT实验室检测的进展
• • • • • • • • 核酸扩增法:测定CT最敏感,首选，金标准 国外抗原检测法 (EIA、DFA和 RDT):不再推荐 实时荧光PCR+自动化的核酸提取仪 瑞典的变异CT株E/SW2，目标序列在发生缺失突变 感染2种以上的CT株时，可能发生基因重组 双目标检测是NAAT改进的重要标志 美国CDC已经不再推荐对阳性结果进行确认 但当用于性虐待的评估时，阳性结果必须用检测另一个 目标区域的第二种NAAT试验确认
• NAAT适用的标本：尿道、宫颈、阴道、直肠、眼分 泌物、初段尿液、精液或组织 • 非侵入性的标本是首选，特别是对无症状者的筛查。 • 初段尿：男性 • 阴道拭子：（临床医生采集或自采）女性 • 盆腔检查采集宫颈分泌物拭子 • MSM人群：直肠或咽部，且无任何症状。 • PID或LGV检测：子宫内膜或淋巴结组织活检标本 • 确认LGV需要鉴定基因型L1，L2或L3
生殖道沙眼衣原体感染特点
7
近年来研究： 引起活动性关节炎，与动脉硬化、冠心病有关 与HIV感染的促进作用
沙眼衣原体感染已成为全世界范围的公 共卫生问题!
生殖道沙眼衣原体实验室检测方法
8
1.免疫学方法（抗原检测） ELISA 免疫荧光法（IFA） 胶体金法 2.细胞培养法
3.核酸检测： PCR (Roche), LCR ( Abbott), SDA (ProbeTec BD), TMA (Aptima Gene Probe) 荧光-PCR
抗原快速检测
18
结果判断
阳性标本在结果窗见一
条细线。另外，无论标
本为阳性或阴性，都应 在质控窗显示一条细线， 表明试剂质量合格，试 验步骤正确
抗原快速检测
19
优
点
简易，方便，快速，尤其适用于基层单位
缺
点 标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果
20
结论：女性尿道拭子：敏感性32.8%, 特异性99.2% 女性宫颈拭子：敏感性49.7%,特异性97.9% 结果显示特异性较好，而较低的敏感性，提示有较高的漏检率。
25
规范性病实验室的条件: CT核酸扩增法
直肠 将取样拭子插入肛门2～3cm，从紧靠肛环边的隐窝 中取材。避免接触粪便。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
11
原理：Ab－Ag－Ab-酶 －底物－显色
方法：加入标本（孵育后洗板）
酶标抗体（孵育后洗板）
底 物（孵育）
终止液－判读结果。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
12
结果判读 cutoff＝阴性对照＋？
•
• 女性CT感染下生殖道后，通过上行至上生殖道， 可诱导慢性感染，导致盆腔炎，引起宫外孕和输 卵管因素不孕不育症 • 许多国家采取筛查措施，通过定期检测发现无症 状的感染者，并治疗感染者和性伴 • 基因型A-K感染通常局限于黏膜上皮 • 而基因型L1、L2和L3则穿过上皮，通过淋巴扩散， 引起侵袭性感染，称为性病淋巴肉芽肿（LGV) • LGV存在于非洲、亚洲、南美和加勒比海部分地区 的地方性疾病 • 男男人群中，已经发生了数起基因型L2的爆发
阳性：OD > the cutoff value 灰区（Gray Zone）: 略低于 the cutoff 阴性：低于灰区
酶联免疫吸附试验（ELISA）
13
结果判读
阳性结果的确证
2002年美国 CDC推荐：所有非培养阳性结果应用另一种 方法确证为真正阳性。 EIA 阳性：可进一步将样本进行DFA、“blocking” assay 或基因诊断确证。
标本的采集（同淋球菌培养标本的采集）
9
男性患者尿道
用男用取材拭子插入尿道 2～3cm，稍用力转动， 保留数秒钟再取出， 以采集到粘膜上皮细胞。
女性患者尿道 用同男性相似的上述方法取材。
标本的采集（同淋球菌培养标本的采集）
10
Hale Waihona Puke Baidu
宫颈 仔细检查阴道壁和宫颈，如果宫颈口外面的分泌物较 多，先用无菌棉拭清除过多的宫颈粘液。将一取样 拭 子 插 入 宫 颈 管 内 1 ～ 2cm ， 稍 用 力 转 动 ， 保 留 10～30秒后取出。
生殖道沙眼衣原体感染特点
5
病原体检测: 镜检, 培养 抗原检测: 快速, EIA 核酸检测: PCR
高流行 无症状感染 严重并发症 依赖实验室诊断
6
生殖道沙眼衣原体感染特点
感染后：
约70％女性和50％男性为无症状 86％的女性和55％的男性感染者持续感染时间为1年 以上。
不寻求治疗…….
酶联免疫吸附试验（ELISA）
14
评 价
敏感性和特异性与直接免疫荧光法相似 敏感性：79－97％ 高 特异性: 97－99％ 高 试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙 眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故
酶联免疫吸附试验（ELISA）
15
优 点
快速、方便
自动化程度高，可同时检测大批量标本
生殖道沙眼衣原体感染 的实验室诊断
朱参胜
陕西省地方病防治研究所
陕西省皮肤性病防治所
陕西西安
1
CT感染的发病机理、基因型别以及临床表现
• CT细胞内寄生，细胞内的网状体复制形态，细胞外的原 体有感染性 • 原体内化后定位于包涵体内，防止被溶酶体融合 • 免疫反应相关的炎性反应通常不十分明显，多数表现为 隐性感染 • CT诱导多种防御机制的修改和破坏，引起CT持续感染 • 基因型A-C是眼部感染 • 基因型D-K引起泌尿生殖道、直肠、咽喉和眼结膜感染， 围产期孕妇感染CT可引起新生儿结膜炎、咽喉炎和肺炎 • 多数直肠、咽喉感染，以及下生殖道感染均不表现出临 床症状
沙眼衣原体快速检测方法的评价
21
沙眼衣原体快速检测试剂的现场评估
标本 敏感性 50% 49.7% 32.8% 特异性 93.5% 97.8% 99.2%
试剂1
男性尿道拭子 宫颈拭子 阴道拭子
试剂2
核酸扩增技术
22
标
本
敏感性（％） 98.0 93.5 94.4 95.7 95.0
特异性（％） 100.0 99.8 99.9 100.0 99.9