钙镁磷的测定

实验十八 还原钼蓝法测血清磷
血液中的磷( phosphorus )主要有两种形式：有 机磷和无机磷。血清无机磷含量与血钙有一定关 系，两者浓度的乘积为一常数（以mg/dl浓度计算， 乘积等于40）。磷参与机体糖、脂类及氨基酸的 代谢，是骨盐的主要成分，也是转运能量的物质， 磷酸盐是调节酸碱平衡的重要缓冲体系之一。 【目的要求】 1.掌握此法测血磷的原理。 2.熟悉血磷测定的其他方法


【计算】 测定管吸光度 样品钙含量（mmol/L）= ×2.50 标准管吸光度 【参考范围】血清钙：2.1～2.6mmol/L 【临床意义】 （1）低钙血症见于 ①摄入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹泻、阻 塞性黄疸；②需要增加：妊娠后期及哺乳期妇女；③吸收减少：佝偻 病、甲状旁腺功能减退症；④肾脏疾病：急、慢性肾衰竭、肾病综合 征、肾小管性酸中毒；⑤坏死性胰腺炎。 （2）高钙血症见于 ①摄入钙过多：静脉用钙过量、大量饮用牛奶 等；②原发性甲状旁腺功能亢进症、肾癌等使血钙升高；③服用维生 素D过多，钙吸收作用增强；④骨病：变形性骨炎、转移性骨癌、多 发性骨髓瘤等，骨溶解增加；⑤具有异位内分泌作用的肿瘤；⑥长期 制动引起骨骼脱钙。
【参考范围】血清镁：0.67～1.04mmol/L
Βιβλιοθήκη Baidu
【评价】
1. 线性范围：2.0mmol/L±10%。 2. 精密度：批内、批间平均CV分别≤5.0% 3. 准确度：不准确度≤10% 4. 试剂空白吸光度值≤1.10。

【注意事项】 1. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。 2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应 保持反应体系恒温。 3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本 空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定1小时。 5. 所用试验器材必须清洁，没有镁污染。 6. 所用试剂具有毒性和腐蚀性，请勿用口吸吸管， 如有污染，应立刻用大量流水冲洗。
实验十七 偶氮胂Ⅲ法测 血钙

血浆中约含钙2.1mmol/(8.4～10.2mg/dl)，以三种形式存在：①非 扩散钙(non-difusional calcium)：是指与血浆蛋白相结合的钙，占血浆 总钙的45%；②离子钙(ion calcium)：是具有生理活性的部分，约占 血浆总钙的50%；③络合钙(chelating calcium)：主要指与枸橼酸结合 的钙，是体内钙的一种运输方式，约占血浆总钙的5%左右。钙离子和 络合钙都能透过毛细血管壁，故统称为扩散钙。血钙的测定方法很多， 一般可分为总钙测定和离子钙测定法。前者包括同位素稀释质谱法 (isotope diluting mass spectrometry)、原子吸收光谱法(atomic absorption spectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography) 和络合滴定法(chelating titration)等。AAS是最常用的准确测定血浆总 钙含量的参考方法，但费用昂贵，不适于常规工作；分光光度法中以 甲基百里香酚蓝比色法（methyl thymol blue colorimetry）和偶氮胂Ⅲ 比色法（Arsenazo Ⅲ colorimetry）最常用。络合滴定法简便易行， 但判断终点受主观因素影响，有被淘汰趋势，但不少基层实验室仍延 用。离子选择电极法测定离子钙已在临床广泛应用。分光光度法已被 广泛用自动生化分析议分析。

【实验原理】
利用磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷 钼酸复合物，用对甲氨基酚硫酸盐还原生 成钼蓝，与同样处理的标准液进行比色， 可求得血磷的含量。试剂中加入聚山梨酯80以抑制蛋白质干扰。
【操作步骤】


测定管（U）标准管（S）空白管（B） 去离子水（ml） --0.1 磷标准液（ml） -0.1 -血清 0.1 --显色液（ml） 4.0 4.0 4.0 混匀，37恒温10分钟，650nm波长，以空白管调零， 测定各管吸光度。

【评价】 1. 线性范围：0.00～6.00mmol/L，γ≥0.99。 2. 精密度：批内、批间平均CV分别≤5.0% 3. 准确度：不准确度≤10% 4. 试剂空白吸光度值≤0.35。
【注意事项】 1. 样品中钙含量超过5.00mmol/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘 以稀释倍数。


测定管吸光度 样品磷含量（mmol/L）= ×1.29 标准管吸光度

【计算】
【参考值】成人0.97 ～ 1.62 mmol/L；儿童1.45 ～ 2.10 mmol/L 【临床意义】

1. 低磷血症见于 ①摄入不足和吸收减少：饥饿或恶病质、吸收不 良综合征、呕吐、腹泻、长期应用含铝的制剂等；②磷转移入细胞内： 静脉注射葡萄糖、胰岛素及碱中毒、妊娠等；③丢失过多：血液透析、 肾小管酸中毒、急性痛风等；④其他：如酒精中毒、糖尿病酮症酸中 毒、维生素D缺乏症等。
实验十七
【目的要求】 1.掌握比色法测血镁
钙镁试剂比色法测血镁

2.熟悉血镁测定的其他方法 【实验原理】 血清中的镁在碱性条件下，与金属色原染料钙镁试剂 （calmagite)反应生成紫红色络合物。颜色深浅与美的浓 度成正比，与同样处理的标准品比较，可以求得镁的含量。
【操作步骤】
2. 高磷血症见于 甲状旁腺功能减退症、维生素D过多症、 Addison病、肢端肥大症、多发性骨髓瘤等。


体重约见5%的无机盐主要有Ca、Mg、K、Na、P和Cl， 这六种无机元素约占体内无机盐总量的60%~80%，主要存 在于体液。无机离子的测定方法主要有火焰光度法、化学 测定法、离子选择电极法、代谢物酶试剂法等。其中离子 选择电极法标本用量少（100μ l全血）,1min出结果，快 而准确，操作简便，是目前广为临床使用的方法。

测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） 试剂（ml） 37℃恒温5分钟 2.0 2.0 2.0


蒸馏水（ml）
标准液（ml） 血清
--0.02
-0.02 --
0.02
---
混匀，37恒温2分钟，540nm波长，以空白管调零，测定 各管吸光度。
【计算】
测定管吸光度 样品镁含量（mmol/L）= 标准管吸光度×1.0
【实验原理】
在碱性条件下，样品中钙与偶氮胂Ⅲ作 用生成蓝色复合物，其颜色深浅与钙浓度 成正比，通过在660nm波长处测定吸光度 的变化值，与经过同样处理的钙校准液进 行比较，即可计算出样品中钙含量。
【操作步骤】

测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） 试剂（ml） 2.0 2.0 2.0 37℃恒温5分钟 蒸馏水（ml） --0.02 标准液（ml） -0.02 -血清 0.02 --混匀，37恒温2分钟，660nm波长，以空白管调零，测定 各管吸光度。


2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应保持反应体系恒温。
3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定2小时。 5. 所用试验器材必须清洁，没有钙污染。 6. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。 7. 试剂使用后立即关紧瓶盖，避免污染。 8. 使用肝素作为抗凝剂时浓度不能太高，每毫升血液中肝素浓度应小 于50单位。不能使用草酸盐、枸橼酸盐、EDTA等作抗凝剂。