第三节动物的克隆

关于抗体检验
1.为什么要抗体检验（目的是什么）？
选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞
2.为什么要两次抗体检验？
3.怎么检验？
抗体检验方法资料补充
有限稀释法：把杂交瘤细胞悬液多倍稀释后， 转移到多孔培养板中，理论上希望每孔一个 细胞，并且对每一个孔进行抗体的特异性检 测，正确抗体对应的孔则为阳性孔。 但是，具体操作中，往往进行2-3次稀释并 抗体检验
（上海高考）——已知细胞合成DNA有D和S两条途径， 其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 淋巴细胞中有DNA合成的S途径，但一般不分裂增殖， 连续培养过程中无法长期存活。 鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但有D途径，能不 断分裂增殖。
小组讨论任务3: 利用所给的一段资料，尝试讨论筛选的思路
筛选思路：
加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有该 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的瘤细胞 就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合 后的杂交细胞可以利用淋巴细胞中的S途径合 成DNA而增殖 方法：目前普遍采用HAT选择性培养基 需在普通的动物细胞培养基中加入氨基喋呤（A）
为什么要2-3次稀释并抗体检验？
目的： 确保所选取的阳性细胞为单个细胞
Baidu Nhomakorabea
对筛选和检验后的单一杂交瘤细胞进行克隆培养, 获得足够数量的细胞，在体外培养或注射到小鼠 体内增殖。从细胞培养液或小鼠的腹水中，可提 取出大量抗体。（由于产生抗体的细胞来自一个 杂交瘤细胞,故产生的抗体称为单克隆抗体.）
小结及课后任务
弊端：
1.含有其他多种抗体， 2.不同批次动物之间
纯度低，所以灵敏度 的差异较大，不易于
和特异性较差
稳定和大量生产
免疫治疗史上有个很著名的病人——美国前总统卡特
卡特在90岁高龄查出黑色素瘤，全身多处扩散转移。 治疗团队采取传统的抗体导向治疗方案，但是效果并 不理想然而一种新药的出现竟然让这个高龄老人被神 奇地治愈了。这种新药叫做——帕博利珠单克隆抗体
小组任务2：细胞融合模拟 材料：两种细胞若干
要求： 1.四人一小组 2.决定一位汇报者 3.讨论并利用所给材料进行细胞融合模拟过程， 寻找可能出现的组合类型
讨论总结：
可能出现的结果有：
结论：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合过程 中可能出现多种融合结果，欲获得正确的 杂交瘤细胞，必须经过筛选。
筛选方法资料补充
自主学习任务
要求： 1.独立自主学习P31-33 “杂交瘤技术与单克隆抗体制备” 2.学习时长：5min 3.尝试理解该过程整体的流程框架， 同时标记好自己暂时无法充分理解的环节
小组任务1：流程图构建 材料：框架、x个词条
要求： 1.四人一小组 2.讨论并从多个词条中选取合适词条贴在框架相 应位置 （注意：词条中含干扰项，充分讨论后再选择）
思路整理：
已知： 1.动物细胞克隆技术 2.动物细胞融合技术
未知： 动物细胞融合技术与克隆技术的综合应用
免疫治疗史上有个很著名的病人——美国前总统卡特
卡特在90岁高龄查出黑色素瘤，全身多处扩散转移。 治疗团队采取传统的抗体导向治疗方案，但是效果并 不理想。
传统抗体药物制备：对实验动物多次注射抗原， 取全部血液，离心、纯化收集血清（含抗体）