样品的前处理方法(课堂PPT)

❖有更小内径，可用于微量样品的处理
❖ 高速离心
❖大于：10,000 rpm
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超滤
❖ 机理 超滤是一种基于分子量分离的技术
❖ 目的 根据分子量的不同把分子、细胞及病毒等 分为不同的馏份 除去小分子样品中的大分子蛋白 脱盐
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选择性沉淀
❖ 常用于生化样品中除蛋白
有机溶剂：乙腈、甲醇 强酸：三氯乙酸、过氯酸 盐：50% 硫酸铵
加速样品的制备时间 降低样品前处理的成本
提高分析的准确性及回收率
更容易自动化
减少样品处理步骤
降低对不稳定样品的影响 提高安全性
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SPE小柱
❖ SPE 小柱的应用领域 除去杂质及干扰组份 把样品分成不同极性的组进行分析 富集微量的组份
❖ SPE 小柱的主要种类 反相 正相 离子交换
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SPE小柱的种类
ASE 可用来替代索氏提取、超声萃取、手工 振摇、煮沸法和其他萃取方法
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三种不同型号的ASE
ASE100↑
ASE200 ↓
ASE300 ↑
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ASE的突出优点
❖ 快速，15分钟 ❖ 溶剂用量少 ❖ 萃取效率高 ❖ 样品基体影响小 ❖ 可同时选用四种溶剂萃取 ❖ 安全，全自动 ❖ ASE建立了环境, 药物, 聚合物, 食品, 和化妆品
（10）采样后应尽可能快的进行分析样品 的制备和分析，或使用适当的方法消除 可能产生的干扰，做好样品的保存。
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二、样品的采集
涉及的样品形式
气体（包括蒸汽） 液体（包括乳液） 固体（包括气体悬浮物、
液体悬浮物）
直接采集 主要采集方法 富集采集
化学反应法采集
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直接采集：只需将样品直接引进容器中，所用容 器最好是新的或洗净后干燥的，以防止其他样 品的残留影响。
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3、样品处理的原则（续）
（6）样品制备过程中尽可能防止和避免待测定组 分发生化学变化或丢失
（7）样品处理中，若进行待测定组分的化学反应， 则反应应是已知的和定量完成的。
（8）样品制备过程中，要防止和避免待测定组分 受到污染，减少无关化合物引入制备过程。
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3、样品处理的原则（续）
（9）处理过程应简单易行，所用样品处 理装置的尺寸应与处理样品的量相适应。
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ASE的应用领域
环境
农业、食品
聚合物
制药
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浓缩样品
❖ 浓缩样品的方法 萃取/吹干 沉淀/再溶解 色谱法 液固抽提/固相萃取小柱
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固相萃取（SPE）技术
❖ 固相萃取技术是基于同液相色谱同样技术开发的产 品，分离复杂样品中的不同组份
ห้องสมุดไป่ตู้
❖ 固相萃取技术（SPE）的重要性 实验室中60~80%的成本及工作量在样品制备上
富集采集：是在采集过程中，同时将待测组分富 集，如吸附采样中选择合适的吸附材料，在吸 附的同时使待测材料在吸附材料上富集
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使用采集方法的注意事项
（1）采集的样品应具有代表性，要注意采 样的时间、地点及采样位置的选择。
（2）所有样品都要采集双份，一份分析样 品，一份保存样品，备复查时使用。
（3）样品的采集和储存过程要作记录，详 列采样时间、地点、准确位置等。
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占样品分析时间的比例（ > 60%）
样品预处理所用时间远大于色谱分离的时间
占分析的消耗总成本最大
消耗大量的溶剂及其他化学品
是决定性的步骤
实验的重复性及准确性
最差的环节
影响实验结果好坏 的最重要因素
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3、样品处理的原则
（1）样品中可能存在的物质组成？浓度水平？ （2）样品中的主要组分？ （3）采样方法是非破坏性的还是破坏性的？ （4）收集的样品必须有代表性。 （5）采用方法必须和分析目的保持一致。
固定相 溶剂
反相
正相
非极性
极性
从极性到非极性 从非极性到极性
❖ 选择性沉淀
❖ 萃取
❖ 索氏抽提
❖ 衍生反应
❖ 加速溶剂萃取（ASE）
❖ 浓缩样品 液-固萃取 / 液-液萃取
固相萃取样品小柱
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样品预处理的过程
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去除微粒
❖ 过滤
可重复使用过滤装置/过滤膜
❖有机(0.22μm)/无机(0. 22 μm) ❖膜片可更换
一次性使用的膜
❖使用方便简单，交叉污染小
第三部分 样品预处理方法
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一、概述： 1、样品处理的目的
气相色谱
高效液相色谱
色谱分析技术 高效毛细管电泳
平面色谱
联用技术
气相色谱—质谱 液相色谱—质谱 液相色谱—核磁 气相色谱—红外
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色谱法应用
石化过程分析 工业卫生调查和评价 药物动力学和毒理学研究 食品分析 法庭取证分析 医疗诊断 核能和燃料分析 制药过程监测 化妆品和香料组成分析 商品质量检验
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（4）采集储存中待测组分不应有损失或发生化学 变化。 损失—包括挥发、在储存容器上的吸附等物 理原因 化学变化——包括被氧化、微生物引起的分 解、各组分间的化学反应等
（5）避免样品受到外界污染。 （6）采集后要尽快进行分析样品的制备和分析。
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三、样品预处理常用的方法
❖ 高速离心
❖ 过滤、超滤
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样品预处理的目的
除去微粒 减少干扰杂质 浓缩微量的组份 提高检测的灵敏度及选择性 改善分离的效果 有利于色谱柱及仪器的保护
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2、样品处理的必要性和重要性
色谱分析的全过程包括：样品采集、样 品制备、色谱分析、数据处理与结果表 述
样品种类繁多，其组成、浓度、物理形 态等均是色谱分析测定的影响因素。 样品处理技术就成为提高分析测定效 率、改善和优化色谱分析的重要环节
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样品衍生
❖ 提高检测的灵敏度 增加紫外基团以增强紫外检测的灵敏度
增加荧光基团使样品用高灵敏度荧光检测器
❖ 改变分离的选择性
改变组份的基团，如：变离子型化合物为非 离子型，用反相方法分离
❖ 典型的例子
氨基酸分析
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加速溶剂萃取（ASE）
ASE 是用溶剂对固体、半固体的样品进行萃 取的技术
ASE 的原理是选择合适的溶剂、通过增加温 度和压力来提高萃取过程的效率
工业的大量应用
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ASE工作流程
加样品
加溶剂
时间 (min) 0.5–1
加热
5
加压
静态萃取 新溶剂冲洗
5 循环
0.5
溶剂
泵 吹扫阀 萃取池
炉体
氮气吹扫
1–2
静态阀
萃取结束 准备分析
Total (min) 12–18
收集瓶
氮气瓶
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食品安全评价中ASE的应用
• 水果和蔬菜中的农药 • 动物组织中的二噁英和多氯联苯 • 粮食中的农药 • 粮食中的毒枝菌素 • 熏肉中的多环芳烃 • 葡萄干中的杀真菌剂 • 咸肉中的硝酸盐/亚硝酸盐 • 一些正在发展的方法