大豆小分子肽抗疲劳效果评价
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
time and bear anoxia ability of administered mice in middle and high dosage group were significantly longer and blood lactic
acid content obviously reduces in high dosage group . And t here is no significant difference in liver glycogen and urea nitrogen ( P < 0105) . While t he SOD activities of Hb in centre and high dosage group mice obviously increased ( P < 0105) . And t he SOD activities of liver in mice increased , but wit hout significant difference ( P > 0. 05) between groups. Conclusion The soybean minor peptides (MW300 - 700Da) have a potential anti - fatigue effect and t he bear anoxia ability in mice.
and liver were measured. Then biochemical index including liver glycogen ,blood lactic acid ,urea nitrogen were measured in 2 treated groups (One is p hysiological saline controlgroup) . Results Compared wit h control group , t he exhaustive swimming
关键词 : 大豆小分子肽 ;抗疲劳 ;力竭游泳时间 ;耐缺氧能力 ;超氧化物歧化酶
Evaluation on anti - fatigue effect of soybean minor peptides YA N Pi ng , L I M ao2hui , GU O Hong , et al . S henyang Med2 ical College ( S henyang 110034 , Chi na)
中国公共卫生 2008 年 2 月第 24 卷第 2 期 Chin J Public Healt h Feb 2008 V ol . 24 No. 2 文章编号 : 100120580 (2008) 0220217202 中图分类号 : R 151. 2 文献标志码 : A
217
【实验研究】
3 基金项目 : 沈阳市科技局基金项目 (1053125 - 1 - 39) 作者单位 : 11 沈阳医学院第三附属医院 ,沈阳 110034 ; 21 沈阳医
学院预防医学系卫生检验中心 ; 31 沈阳体育学院运动 生化教研室 作者简介 : 闫萍 (1970 - ) ,女 ,内蒙古包头人 ,主治医师 ,硕士 ,研究 方向 :生物制品与功能食品检测 。
Abstract : Objective To study anti - fatigue effect and biological mechanism of soybean minor peptides ( MW300～ 700Da) . Methods Soybean minor peptides was administered to mice in 3 treated groups for 25 days by 310 ,610 ,910 g/ kg· d) respectively ,and t he changes of exhaustive swimming time and t he bear anoxia ability were measured. Soybean minor pep2 tides was administered to Wister mice in same treated group for 50 days ,t he activities of superoxide dismutase ( SOD) of Hb
Key words : soybean minor peptides ;anti - fatigue ;swimming time ;bear anoxia ability ;SOD
研究表明 ,许多蛋白质水解产物具有多种生理活性的多 肽 ,多肽具有抗氧化 、抗衰老 、降血压 、降血脂等多种生理功 效 ,因此人们开始研究以来源丰富 、质优价廉的大豆蛋白为原 料的活性肽开发 。目前我国在大豆多肽的研究开发中主要研 究多为大豆小分子多肽与生理功能的关系〔1〕。为了解大豆小 分子肽增强体能 、抗疲劳作用 , 采用自制的大豆小分子肽 ,并 通过动物实验观察抗疲劳的作用 ,为大豆小分子肽开发提供 理论依据 。 1 材料与方法 111 材料 用来自辽宁省昌图县的脱脂大豆饼制成大豆小 分子肽 ,采用高效凝胶过滤色谱法 ( HP GFC) 测定 ,小分子多 肽峰值分子量范围为 300～700 Da 之间 。 112 实验动物及分组 实验动物昆明种小白鼠 ,Wistar 种大 白鼠 (沈阳医学院实验动物中心) 。小白鼠 320 只 ,雌雄各半 , 体重 (18 ±2) g ,按雌雄 、体重随机分为 1 个对照组和 3 个剂量 实验组 ,每组 80 只 。适应性饲养 3 d 后灌胃 ,空白对照组适 量生理盐水灌胃 ,而 3 个实验剂量组分别给予大豆小分子肽 溶液 3 ,6 ,9 g/ (kg·d) 剂量 ,连续 25 d 。实验期间 ,小鼠自由摄
食及饮水〔2〕。取 Wistr 大白鼠 40 只 ,体重 (200 ±20) g ,按雌 雄 、体重随机分为 1 个对照组和 3 个剂量组 ,每组 10 只 。适 应性饲养观察 3 d 后灌胃 ,对照组生理盐水 5 ml/ d ,实验组大 豆小分子肽溶液灌胃 ,3 个剂量分别为 3 ,6 ,9 g/ ( kg·d) 。饲 养 50 d ,实验期间 ,大鼠自由摄食及饮水〔3〕。 113 小鼠游泳耐力实验 实验至第 25 d 时 ,每实验剂量组 及对照组各取小鼠 15 只 。小鼠右侧臀负重体重 6 % ,放入水 温 (25 ±1) ℃、水深 40 cm 的水槽中游泳 ,记录小鼠从入水至 运动疲劳发生时的游泳时间 。小鼠头部没入水面以下 7s 不 再上浮判定为疲劳 。记录疲劳时间 。 114 低压缺氧实验 实验至第 25 d 时 ,灌胃 2 h 后 ,每实验 剂量组及对照组各取小鼠 20 只 ,放入减压箱减压至负压 8 mmHg ,持续时间为 5 min ,记录小白鼠死亡只数 。 115 大白鼠各组超氧化物歧化酶 ( SOD) 活性测定〔4〕 大鼠 连续灌胃 50 d 后 ,分别剪断股动脉 ,血用肝素抗凝 ,取肝脏用 冰生理盐水冲洗 ,滤纸吸干 ,精确称重 ,加入冰生理盐水 ,玻璃 匀浆器制成 10 %的组织匀浆 ,离心后吸取上清液备用 。按微 量邻苯三酚快速测定红细胞 ,肝脏的超氧化物歧化酶活性 。 116 血清尿素氮含量的测定〔5〕 小鼠末次灌胃后 30 min ,每 实验剂量组和对照组各取 15 只 ,在温度 (25 ±1) ℃ 的水中游 泳 60 min ,采血测定 。小鼠拔眼球采血 015 ml 。草酸盐 、肝素 或乙二胺四乙酸抗凝的血清中尿素在氮化高铁一磷酸溶液中 与二乙酰一肟和硫氨共煮 ,形成Байду номын сангаас种红色的化合物 ,其颜色的
表 1 不同组别大鼠红细胞( Hb) 及肝脏 SOD 活性 检测结果( U/ mg , x ±s)
大豆小分子肽抗疲劳效果评价 3
闫萍1 ,李茂辉2 ,郭红1 ,高淑杰3
摘 要 : 目的 通过动物实验研究大豆小分子肽 (分子量 300～700Da) 的抗疲劳作用 。方法 将昆明种小鼠分为 低 、中 、高大豆小分子肽 (3 ,6 ,9 g/ kg/ d) 3 个剂量组灌胃 25 d ,测定小鼠的力竭游泳时间以及耐缺氧能力 。将 Wister 大 白鼠 ,按同样剂量分组大豆小分子肽灌胃 50 d ,测血红细胞和肝脏中超氧化物歧化酶 (SOD) 活力 。同时测定 2 个实验 组 (各设一个生理盐水灌胃对照组) 肝糖原 、血乳酸 、血尿素氮 。结果 大豆小分子肽 (分子量 300～700Da) 的中 、高剂 量组小鼠负重游泳时间明显延长 ,高剂量组具有明显耐缺氧能力 。并且高剂量组小鼠运动后血乳酸含量与对照组比 较明显降低 。肝糖原和血尿素氮含量与对照组比较差异无统计学意 ( P > 0105) 。而中 、高剂量组的大鼠的血红细胞 SOD 活力明显高于对照组 ( P < 0105) ,而肝脏组织 SOD 酶活性有升高趋势 ,但差异无统计学意义 ( P > 0105) 。结论 大豆小分子肽 (分子量 300～700Da) 具有一定增强小鼠抗疲劳和耐缺氧的能力 。
218
中国公共卫生 2008 年 2 月第 24 卷第 2 期 Chin J Public Healt h Feb 2008 V ol . 24 No. 2
深浅与尿素含量成正比〔6〕,与同样处理的尿素标准管比较 ,可 求出其含量 。 117 肝糖原测定〔6〕 小鼠末次灌胃后 30 min ,每实验剂量组 和对照组各取 15 只在温度为 (25 ±1) ℃的水箱游泳 90 min , 立即处死 ,取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干 ,精确称取肝 脏 200 mg ,加入 4 ml 三氯乙酸 ,每管匀浆 1 min ,将匀浆液倒 入离心管 ,以 3 000 r/ min 离心 15 min ,将上清液转移至另一 试管内 。在沉淀中再加入 4 ml 三氯乙酸 ,匀浆 1 min ,再次 3 000 r/ min离心 15 min ,取上清液 ,并与第一次离心的上清合 并 ,充分混匀 ,于 620 nm 处测定其吸光度 ( A ) 值 。 118 乳酸测定〔7〕 小鼠末次灌胃 30 min ,每实验剂量组和对 照组各取 15 只后负重 2 %(体重) 在温度 (25 ±1) ℃的水中游 泳 60 min 后停止 ,安静 15 min 后采血备用 ,拔眼球采血 。在 铜 离子催化下 ,乳酸与浓硫酸在沸水中反应 ,乳酸转化为乙 醛 ,乙醛与对羟基苯反应呈紫色化合物 ,在波长 560 nm 处测 定吸光度 。 119 统计分析 采用 SPSS 1010 软件进行单因素方差分析 , 组间比较用 t 检验 。 2 结 果 211 大豆小分子肽对小鼠游泳时间影响 大豆小分子肽实 验组中高剂量组与对照组 (生理盐水组) 比较 ,力竭游泳时间 明显延长 ( P < 0105) 。实验组随剂量增加 ,游泳时间分别为 (4012 ±1119) , (5419 ±1019) , (5214 ±913) min ,中 、高剂量组 小鼠游泳时间均长于对照组 (4117 ±613) min 。 212 大豆小分子肽对小鼠低压缺氧影响 大豆小分子肽实 验组的高剂量组与对照组 (生理盐水组) 比较 (小白鼠死亡只 数) ,耐低压缺氧能力明显增强 ( P < 0105) 。高剂量组 5 min 动物死亡 10 只 ,而对照组 5 min 死亡 17 只 。 213 大豆小分子肽对大白鼠 SOD 活性影响 (表 1) 大豆小 分子肽实验组中的 3 个剂量组与对照组比较 ,中高剂量组的 红细胞 ( Hb) 的 SOD 活性显著增加 ( P < 0105) ,但 2 组无剂量 相关性 。而肝脏的 SOD 活性有增加趋势 ,但差异无统计学意 义 ( P > 0105) 。
acid content obviously reduces in high dosage group . And t here is no significant difference in liver glycogen and urea nitrogen ( P < 0105) . While t he SOD activities of Hb in centre and high dosage group mice obviously increased ( P < 0105) . And t he SOD activities of liver in mice increased , but wit hout significant difference ( P > 0. 05) between groups. Conclusion The soybean minor peptides (MW300 - 700Da) have a potential anti - fatigue effect and t he bear anoxia ability in mice.
and liver were measured. Then biochemical index including liver glycogen ,blood lactic acid ,urea nitrogen were measured in 2 treated groups (One is p hysiological saline controlgroup) . Results Compared wit h control group , t he exhaustive swimming
关键词 : 大豆小分子肽 ;抗疲劳 ;力竭游泳时间 ;耐缺氧能力 ;超氧化物歧化酶
Evaluation on anti - fatigue effect of soybean minor peptides YA N Pi ng , L I M ao2hui , GU O Hong , et al . S henyang Med2 ical College ( S henyang 110034 , Chi na)
中国公共卫生 2008 年 2 月第 24 卷第 2 期 Chin J Public Healt h Feb 2008 V ol . 24 No. 2 文章编号 : 100120580 (2008) 0220217202 中图分类号 : R 151. 2 文献标志码 : A
217
【实验研究】
3 基金项目 : 沈阳市科技局基金项目 (1053125 - 1 - 39) 作者单位 : 11 沈阳医学院第三附属医院 ,沈阳 110034 ; 21 沈阳医
学院预防医学系卫生检验中心 ; 31 沈阳体育学院运动 生化教研室 作者简介 : 闫萍 (1970 - ) ,女 ,内蒙古包头人 ,主治医师 ,硕士 ,研究 方向 :生物制品与功能食品检测 。
Abstract : Objective To study anti - fatigue effect and biological mechanism of soybean minor peptides ( MW300～ 700Da) . Methods Soybean minor peptides was administered to mice in 3 treated groups for 25 days by 310 ,610 ,910 g/ kg· d) respectively ,and t he changes of exhaustive swimming time and t he bear anoxia ability were measured. Soybean minor pep2 tides was administered to Wister mice in same treated group for 50 days ,t he activities of superoxide dismutase ( SOD) of Hb
Key words : soybean minor peptides ;anti - fatigue ;swimming time ;bear anoxia ability ;SOD
研究表明 ,许多蛋白质水解产物具有多种生理活性的多 肽 ,多肽具有抗氧化 、抗衰老 、降血压 、降血脂等多种生理功 效 ,因此人们开始研究以来源丰富 、质优价廉的大豆蛋白为原 料的活性肽开发 。目前我国在大豆多肽的研究开发中主要研 究多为大豆小分子多肽与生理功能的关系〔1〕。为了解大豆小 分子肽增强体能 、抗疲劳作用 , 采用自制的大豆小分子肽 ,并 通过动物实验观察抗疲劳的作用 ,为大豆小分子肽开发提供 理论依据 。 1 材料与方法 111 材料 用来自辽宁省昌图县的脱脂大豆饼制成大豆小 分子肽 ,采用高效凝胶过滤色谱法 ( HP GFC) 测定 ,小分子多 肽峰值分子量范围为 300～700 Da 之间 。 112 实验动物及分组 实验动物昆明种小白鼠 ,Wistar 种大 白鼠 (沈阳医学院实验动物中心) 。小白鼠 320 只 ,雌雄各半 , 体重 (18 ±2) g ,按雌雄 、体重随机分为 1 个对照组和 3 个剂量 实验组 ,每组 80 只 。适应性饲养 3 d 后灌胃 ,空白对照组适 量生理盐水灌胃 ,而 3 个实验剂量组分别给予大豆小分子肽 溶液 3 ,6 ,9 g/ (kg·d) 剂量 ,连续 25 d 。实验期间 ,小鼠自由摄
食及饮水〔2〕。取 Wistr 大白鼠 40 只 ,体重 (200 ±20) g ,按雌 雄 、体重随机分为 1 个对照组和 3 个剂量组 ,每组 10 只 。适 应性饲养观察 3 d 后灌胃 ,对照组生理盐水 5 ml/ d ,实验组大 豆小分子肽溶液灌胃 ,3 个剂量分别为 3 ,6 ,9 g/ ( kg·d) 。饲 养 50 d ,实验期间 ,大鼠自由摄食及饮水〔3〕。 113 小鼠游泳耐力实验 实验至第 25 d 时 ,每实验剂量组 及对照组各取小鼠 15 只 。小鼠右侧臀负重体重 6 % ,放入水 温 (25 ±1) ℃、水深 40 cm 的水槽中游泳 ,记录小鼠从入水至 运动疲劳发生时的游泳时间 。小鼠头部没入水面以下 7s 不 再上浮判定为疲劳 。记录疲劳时间 。 114 低压缺氧实验 实验至第 25 d 时 ,灌胃 2 h 后 ,每实验 剂量组及对照组各取小鼠 20 只 ,放入减压箱减压至负压 8 mmHg ,持续时间为 5 min ,记录小白鼠死亡只数 。 115 大白鼠各组超氧化物歧化酶 ( SOD) 活性测定〔4〕 大鼠 连续灌胃 50 d 后 ,分别剪断股动脉 ,血用肝素抗凝 ,取肝脏用 冰生理盐水冲洗 ,滤纸吸干 ,精确称重 ,加入冰生理盐水 ,玻璃 匀浆器制成 10 %的组织匀浆 ,离心后吸取上清液备用 。按微 量邻苯三酚快速测定红细胞 ,肝脏的超氧化物歧化酶活性 。 116 血清尿素氮含量的测定〔5〕 小鼠末次灌胃后 30 min ,每 实验剂量组和对照组各取 15 只 ,在温度 (25 ±1) ℃ 的水中游 泳 60 min ,采血测定 。小鼠拔眼球采血 015 ml 。草酸盐 、肝素 或乙二胺四乙酸抗凝的血清中尿素在氮化高铁一磷酸溶液中 与二乙酰一肟和硫氨共煮 ,形成Байду номын сангаас种红色的化合物 ,其颜色的
表 1 不同组别大鼠红细胞( Hb) 及肝脏 SOD 活性 检测结果( U/ mg , x ±s)
大豆小分子肽抗疲劳效果评价 3
闫萍1 ,李茂辉2 ,郭红1 ,高淑杰3
摘 要 : 目的 通过动物实验研究大豆小分子肽 (分子量 300～700Da) 的抗疲劳作用 。方法 将昆明种小鼠分为 低 、中 、高大豆小分子肽 (3 ,6 ,9 g/ kg/ d) 3 个剂量组灌胃 25 d ,测定小鼠的力竭游泳时间以及耐缺氧能力 。将 Wister 大 白鼠 ,按同样剂量分组大豆小分子肽灌胃 50 d ,测血红细胞和肝脏中超氧化物歧化酶 (SOD) 活力 。同时测定 2 个实验 组 (各设一个生理盐水灌胃对照组) 肝糖原 、血乳酸 、血尿素氮 。结果 大豆小分子肽 (分子量 300～700Da) 的中 、高剂 量组小鼠负重游泳时间明显延长 ,高剂量组具有明显耐缺氧能力 。并且高剂量组小鼠运动后血乳酸含量与对照组比 较明显降低 。肝糖原和血尿素氮含量与对照组比较差异无统计学意 ( P > 0105) 。而中 、高剂量组的大鼠的血红细胞 SOD 活力明显高于对照组 ( P < 0105) ,而肝脏组织 SOD 酶活性有升高趋势 ,但差异无统计学意义 ( P > 0105) 。结论 大豆小分子肽 (分子量 300～700Da) 具有一定增强小鼠抗疲劳和耐缺氧的能力 。
218
中国公共卫生 2008 年 2 月第 24 卷第 2 期 Chin J Public Healt h Feb 2008 V ol . 24 No. 2
深浅与尿素含量成正比〔6〕,与同样处理的尿素标准管比较 ,可 求出其含量 。 117 肝糖原测定〔6〕 小鼠末次灌胃后 30 min ,每实验剂量组 和对照组各取 15 只在温度为 (25 ±1) ℃的水箱游泳 90 min , 立即处死 ,取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干 ,精确称取肝 脏 200 mg ,加入 4 ml 三氯乙酸 ,每管匀浆 1 min ,将匀浆液倒 入离心管 ,以 3 000 r/ min 离心 15 min ,将上清液转移至另一 试管内 。在沉淀中再加入 4 ml 三氯乙酸 ,匀浆 1 min ,再次 3 000 r/ min离心 15 min ,取上清液 ,并与第一次离心的上清合 并 ,充分混匀 ,于 620 nm 处测定其吸光度 ( A ) 值 。 118 乳酸测定〔7〕 小鼠末次灌胃 30 min ,每实验剂量组和对 照组各取 15 只后负重 2 %(体重) 在温度 (25 ±1) ℃的水中游 泳 60 min 后停止 ,安静 15 min 后采血备用 ,拔眼球采血 。在 铜 离子催化下 ,乳酸与浓硫酸在沸水中反应 ,乳酸转化为乙 醛 ,乙醛与对羟基苯反应呈紫色化合物 ,在波长 560 nm 处测 定吸光度 。 119 统计分析 采用 SPSS 1010 软件进行单因素方差分析 , 组间比较用 t 检验 。 2 结 果 211 大豆小分子肽对小鼠游泳时间影响 大豆小分子肽实 验组中高剂量组与对照组 (生理盐水组) 比较 ,力竭游泳时间 明显延长 ( P < 0105) 。实验组随剂量增加 ,游泳时间分别为 (4012 ±1119) , (5419 ±1019) , (5214 ±913) min ,中 、高剂量组 小鼠游泳时间均长于对照组 (4117 ±613) min 。 212 大豆小分子肽对小鼠低压缺氧影响 大豆小分子肽实 验组的高剂量组与对照组 (生理盐水组) 比较 (小白鼠死亡只 数) ,耐低压缺氧能力明显增强 ( P < 0105) 。高剂量组 5 min 动物死亡 10 只 ,而对照组 5 min 死亡 17 只 。 213 大豆小分子肽对大白鼠 SOD 活性影响 (表 1) 大豆小 分子肽实验组中的 3 个剂量组与对照组比较 ,中高剂量组的 红细胞 ( Hb) 的 SOD 活性显著增加 ( P < 0105) ,但 2 组无剂量 相关性 。而肝脏的 SOD 活性有增加趋势 ,但差异无统计学意 义 ( P > 0105) 。