PD模型行为学实验

行为学实验各组小鼠于实验前5天每日进行2次爬杆、悬挂行为训练。分别于实验前1天(首次注射MPTP前1天),第7天(注射药物后1小时),第14天和第21天上午10:00(天元冲剂灌胃后1小时)进行爬杆和悬挂行为学观察以检测其肢体运动协调情况。

详细为爬杆实验(pole test)[7]:

将一直径为2·5cm的泡沫塑料小球固定于一根长60cm、粗1cm的木杆顶端,木杆上缠2层纱布以防打滑。将小鼠放到球顶,记录以下3个时间:

小鼠爬完杆长的上半部分所需时间; 小鼠爬完杆长的下半部分所需的时间; 小鼠爬完杆长的全长所需时间。按以下标准打分:3秒内完成上述某一动作记3分;6秒内完成记2分;超过6秒记1分。

悬挂实验(traction test)[8]:将小鼠双前肢悬挂于一水平电线上,如小鼠用双后肢抓住电线记3分;仅用一只后肢抓住电线记2分;两只后肢均抓不住记1分;小鼠跌落记为0分

[7]DonnanGA,WillisGL,KaezmarczykSJ,etal·Motorfunetioninth1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy dmpyridine-treated mouse[J]·J NeuroS-ci,1987,77:185-19·

[8]殷盛明,于德钦·MPTP对小鼠空间学习和记忆能力的影响[J]·中国行为医学科学,2005,14(1):18-20·

自主活动计数参照Kawai H［1］的测试方法，自制30 cm×30 cm×15 cm的有机玻璃盒，底部刻出6 cm×6 cm的格子，在恬静、光线较暗的环境中检测.小鼠适应环境10 min后，计数5 min内小鼠移动的格子数，连续测5次取平均值. 中央格停留时间、跨格数（一三爪或三爪以上进入一格为准）、直立次数、清洁次数及粪便粒数。

Rotarod检测Rotarod实验需要动物在滚轴上保持平衡并连续运动，是广泛采用的检测运动协调性的实验.滚轴直径6 cm，转速20 r/min，连续测20次取平均值.

游泳实验参照Donnan GA［2］的测试方法，将受试小鼠放入一个20 cm×30 cm×20 cm规格的有机玻璃水箱中，水深10 cm，水温为22～25℃.评分标准如下摘要：在1 min内能连续不断游泳者记30分；大部分时间游泳仅偶然漂浮者记25分；漂浮时间占整个受试时间50％以上者记20分；偶然游泳者记15分；偶然用后肢游动并漂浮在水箱一边者记10分.检测5次取平均值.

［1］Kawai H, Makino Y, Hirobe M, et al. Novel endogenous 1,2,3,4tetrahydroisoquinoline derivatives摘要: Uptake by dopamine transporter and activity to induce parkinsonism ［J］. Neurochem, 1998;70摘要:745-751.［2］Donnan GA, Willis GL, Kaczmarczyk SJ, et al.Motor function in the 1methyl4pheny1,2,3,6tetrahydropyridinetreated mouse ［J］.J Neurol Sci, 1987;77(2-3)摘要:185-191.

依据我们对鱼藤酮PD大鼠模型建立的神经行为学评分体系[5],将大鼠行为变化分6个等级记分:

①大鼠出现拒捕行为减弱、竖毛、毛色变黄变脏、弓背、主动活动减少,记1分。

②有得1分的表现,主动活动减少明显、动作迟缓,并有震颤,或有步态不稳,记2分。

③有得2分的表现,步态不稳,或不能直线行走、或行步时向一侧旋转,记4分。

④向单侧斜卧,单侧前肢和(或)后肢瘫痪,行走困难、进食困难,记6分。

⑤单侧,前肢和/或后肢完全瘫痪,四肢拘挛,体重大幅度减轻,不能进食,记8分。

⑥濒死状态或死亡,记10分。

[5]陈忻,张楠,赵晖,等.鱼藤酮致帕金森大鼠行为学与黑质病理损伤的关系[J].中国神经精神疾病杂志, 2008, 34(4):232-234·