免疫球蛋白A分析方法

免疫球蛋白A的分析方法探讨

摘要：本文探讨了免疫球蛋白a的几种测定方法及原理，并对其特性进行比较，分析其优缺点；以及简单介绍了测定免疫球蛋白a 的临床意义。

关键词：免疫球蛋白a 分析方法临床意义

中图分类号： tq460.1文献标识码：a文章编号：

1674-098x(2011)12(c)-0000-00

免疫球蛋白（immunoglobulin,ig）普遍存在于血液、组织液、淋巴液和外分泌液中,在人类免疫应答中起关键作用。iga有血清型和分泌型两种，存在于血清中的称血清型iga，占血清总蛋白量的10%~15%。测定血清中免疫球蛋白a的含量对诊断和指导治疗肝脏疾病、结缔组织疾病和肾病有实际的临床意义[1]。目前，检测iga 的方法主要有琼脂单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法[2]、酶免疫分析法（eia）、免疫荧光法、金标记阳极溶出伏安免疫分析法[3]及免疫比浊法[4]（表1）等。

1 免疫球蛋白a的分析方法

1.1单向环状免疫扩散法（rid）

其原理是将抗iga血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖胶内，待胶液凝固后于其上打孔，将待测抗原滴加于含相应抗iga血清的琼脂板小孔中，检样中抗原放射状向含抗iga血清的胶内扩散，形成乳白色的沉淀环，在一定浓度范围内，iga的含量与沉淀环直径成正比，与用标准抗原iga的沉淀环直径所形成的标准曲线比较，即可达到

体液免疫球蛋白测定

体液免疫球蛋白测定第一节血清IgG、IgA、IgM测定血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。一、血清IgG、IgA、lgM测定（一）单向环状免疫扩散法该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。（二）免疫比浊法该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义（一）年龄新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。（二）免疫球蛋白IgG、IgA、IgM均升高慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见3种Ig均升高。慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血IgG可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以IgM增高为主。（三）单一免疫球蛋白升高主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g／L以上，这种异常增多的免疫球蛋白其理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即M蛋白。此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白。由它所致的疾病称为免疫增殖病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。（四）免疫球蛋白降低先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。IgA缺乏患者，易发生反复呼吸道感染。IgG缺乏患者，易发生化脓性感染。IgM缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。第二节血清IgD和IgE测定正常人血清中IgD含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%。膜结合型IgD（mIgD）构成BCR，是B 细胞分化发育成熟的标志。未成熟的B细胞仅表达mIgM，成熟B细胞可同时表达mIgM和mIgD。活化的B 细胞或记忆B细胞其表面的mIgD逐渐消失。 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量高达12%。IgE为亲细胞抗体，可引起Ⅰ型超敏反应。IgE可能与机体抗寄生虫免疫有关。第1页

免疫比浊法检测免疫球蛋白

免疫比浊法检测免疫球蛋白一、实验目的利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。（本小组检测的为IgG样品）二、实验原理 1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。影响因素有：电解质、温度、酸碱度。 2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。本实验采用透射法。 3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。三、实验材料免疫球蛋白A,G(IgA,IgG)测定试剂(试剂1[PEG]，试剂2[羊抗人IgA, IgG]）（1管/每组）免疫球蛋白A, G(IgA,IgG)校准品，蒸馏水，血清样本（1管）微量加样枪、ep管（1.5mL离心管）酶标仪、水浴箱四、实验步骤 1.在7个EP管中各加250μL IgG试剂1（PEG）。 2.7管分别加入蒸馏水、校准品原液、1：2校准品、1：4校准品、1：8校准品、1：16校准品、样本各2μL。 3.混匀后37℃水浴5min。 4.7管各加入85μL IgG试剂2（羊抗人IgG）。 5.混匀后37℃水浴10min。 6.分别吸取200μL至96孔酶标板中，用酶标仪在700nm处读取OD值。五、实验结果与数据处理 2.标准曲线

免疫球蛋白的试题及答案

第四章免疫球蛋白名词解释： 1．抗体(antibody) 2．Fab(fragment antigen binding) 3．Fc(fragment crytallizable) 4．免疫球蛋白(Immunoglobulin Ig) 5．超变区(hypervariable region，HVR) 6．可变区(variable region，V区) 7．单克隆抗体（Monoclonal antibody， mAb） 8．ADCC(Antibody –dependent cell-mediatedcytotoxicity) 9．调理作用(opsonization) 10．J链（joining chain） 11．分泌片（secretory piece） 12．Ig功能区（Ig domain） 13．Ig折叠（Ig folding） 14．CDR(complementary-determining region) 问答题 1．简述抗体与免疫球蛋白的区别和联系。 2．试述免疫球蛋白的主要生物学功能。 3．简述免疫球蛋白的结构、功能区及其功能。 4．简述单克隆抗体技术的基本原理。参考答案名词解释 1．抗体(Antibody) ：是B 细胞特异性识别Ag后，增殖分化成为浆细胞，所合成分泌的一类能与相应抗原特异性结合的、具有免疫功能的球蛋白。 2．Fab(Fragment antigen binding)：即抗原结合片段，每个Fab 段由一条完整的轻链和重链的VH和CH1功能区构成，可以与抗原表位发生特异性结合。 3．Fc片段(fragment crytallizable)：即可结晶片段，相当于IgG的CH2和CH3功能区，无抗原结合活性，是抗体分子与效应分子和细胞相互作用的部位。 4. 免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)：是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。可分为分泌型和膜型两类。 5．高变区（hypervariable region ，HVR）：在Ig分子VL和VH 内，某些区域的氨基酸组成、排列顺序与构型更易变化，这些区域为超变区。 6．可变区（V区）：在Ig多肽链氨基端(N端)，L链1/2与H链1/4 区域内，氨基酸的种类、排列顺序与构型变化很大，故称为可变区。 7．单克隆抗体(Monoclonal antibody ，mAb)：是由识别一个抗原决定簇的B淋巴细胞杂交瘤分裂而成的单一克隆细胞所产生的高度均一、高度专一性的抗体。 8．ADCC(Antibody –dependent cell-mediatedcytotoxicity)：即抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。是指表达Fc受体细胞通过识别抗体的Fc段直接杀伤被抗体包被的靶细胞。NK细胞是介导ADCC的主要细胞。

实验室血清学常用检测方法

常用血清学检测方法介绍一、酶联免疫吸附试验诊断技术目前，该项技术已在兽医学上得到广泛的应用,大多数动物传染病都已经研制成 ELISA检测方法。 1、酶联免疫吸附试验的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应o用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相矢，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 2、ELISA的类型根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型： ①?双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA，就是根据这种原理设计的。 ②?双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。乙肝HBs的检测常采用本法。本法尖键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于于间接法。此外，该方法不受被检动物种属差异的限制。 ③?间接法测抗体

免疫球蛋白A测定试剂盒(免疫比浊法)产品技术要求baiding

免疫球蛋白A测定试剂盒（免疫比浊法）适用范围：本试剂用于体外定量测定人血清中免疫球蛋白A的含量。 1.1 包装规格 1×40mL 1×50mL 1×36mL 4×60mL 12×60mL 4×80mL 8×80mL 2×50mL （2×200tests） 36×4.5mL （400tests）校准品（单水平，选配）：1×1mL 产品组成：成分浓度试剂咪唑缓冲液，pH7.5 0.1mol/L 羊抗人IgA抗体≥1mg/L 防腐剂0.95g/L 校准品（单水平，选配）人血清基质免疫球蛋白A 靶值范围5.5g/L -6.5g/L，靶值批特异，详见瓶标签 2.1 外观 2.1.1 试剂为无色透明液体，无混浊，无未溶解物。 2.1.2 校准品为无色透明液体，无混浊，无未溶解物。

2.1.3 标签内容清晰，字迹牢固不易脱落。 2.2 试剂装量液体试剂的净含量不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 A≤0.10（光径1.0cm，340nm±20nm 波长）。 2.4 分析灵敏度测定0.50g/L样本，吸光度变化在0.02～0.20范围内。 2.5 线性区间 2.5.1 [0.037,6.50]g/L。在规定的线性范围内，测定值与样本浓度值的相关系数（r）应不低于0.990。 2.5.2[0.037,0.5]g/L范围内，线性绝对偏差应不超过±0.05g/L； (0.50,6.50]g/L范围内，线性相对偏差应不超过±10%。 2.6 精密度 2.6.1 重复性变异系数CV≤6.0%。 2.6.2 批间差批间相对极差≤8.0%。 2.7 准确度相对偏差在±10%范围内（测定国际参考物质ERM-DA470k（IFCC））。 2.8 稳定性原装试剂2℃～8℃保存，有效期12个月，有效期满后2个月内测定结果应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、和2.7要求。

第四章免疫球蛋白

第四章免疫球蛋白第一节基本概念 1、抗体：B淋巴细胞在有效的抗原刺激下分化为浆细胞，产生具有与相应抗原发生特异性结合功能的免疫球蛋白，这类免疫球蛋白称为抗体。 1937年，Tiselius用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，其后又证明抗体的活性部分是在γ球蛋白部分。因此，相当长一段时间内，抗体又被称为γ球蛋白（丙种球蛋白）。实际上，抗体的活性除γ球蛋白外，还存在于α和β球蛋白处。 20世纪40年代初期，Tiselius和Kabat用肺炎球菌多糖免疫家兔，证实了抗体活性与血清丙种球蛋白组分相关。肺炎球菌多糖免疫家兔后可获得高效价免疫血清。然后加入相应抗原吸收以除去抗体，将除去抗体的血清进行电泳图谱分析，发现丙种球蛋白（γ-G）组分明显减少，从而证明了抗体活性是存在于丙种球蛋白内。 2、免疫球蛋白：具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。区别：抗体都是免疫球蛋白，而免疫球蛋白并不都是抗体。如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血症、冷球蛋白血症等患者血清中存在的异常免疫球蛋白结构与抗体相似，但无抗体活性。免疫球蛋白可分为分泌型（secreted Ig,SIg）和膜型（membrane Ig, mIg）。前者主要存在于血清及其他体液或外分泌液中，具有抗体的各种功能；后者是B细胞表面的抗原识别受体。第二节免疫球蛋白结构

一、免疫球蛋白的基本结构（一）重链和轻链免疫球蛋白分子是由两条相同的重链（heavy chain，H链）和两条相同的轻链（light chain，L链）通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。X 射线晶体结构分析发现，IgG分子由3个相同大小的节段组成。 1. 重链分子量约为50～75kD，由450～550个氨基酸残基组成。免疫球蛋白重链恒定区由于氨基酸的组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链和ε链。不同的同种型具有不同的特征，包括链内二硫键的数目和位置、连接寡糖的数量、功能区的数目以及铰链区的长度等。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类。如IgG可分为IgG1～IgG4；IgA可分为IgA1和IgA2。IgM、IgD和IgE尚未发现有亚类。 2.轻链免疫球蛋白轻链的分子量约25 kD，由214个氨基酸残基构成。轻链可分为两型，即κ(kappa)型和λ(lambda)型，一个天然Ig分子上两条轻链的型别总是相同的,两型轻链的功能无差异。不同种属中，两型轻链的比例不同，正常人血清免疫球蛋白κ:λ约为2:1，而在小鼠则为20:1。κ:λ比例的异常可能反映免疫系统的异常，例如人类免疫球蛋白λ链过多，提示可能有产生λ链的B细胞肿瘤。根据λ链恒定区个别氨基酸的差异，又可分为λ1、λ2、λ3和λ 4 四个亚型。（二）可变区和恒定区通过分析不同免疫球蛋白重链和轻链的氨基酸序列，发现重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，称为可变区（variable

免疫球蛋白的结构

第一节免疫球蛋白的结构（The Structure of Immunoglobulin) B淋巴细胞在抗原刺激下增殖分化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的免疫蛋白，这类免疫球蛋白被称为抗体（antibody, Ab）。 1937年，Tiselius用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，其后又证明抗体的活性部分是在γ球蛋白部分。因此，相当长一段时间内，抗体又被称为γ球蛋白（丙种球蛋白）。实际上，抗体的活性除γ球蛋白外，还存在于α和β球蛋白处。1968年和1972年的两次国际会议上，将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。 Ig是化学结构的概念，它包括正常的抗体球蛋白和一些未证实抗体活性的免疫球蛋白，如骨髓瘤病人血清中的M蛋白及尿中的本周氏（Bence Jones, BJ）蛋白等。免疫球蛋白可分为分泌型（secreted Ig,SIg）和膜型（membrane Ig, mIg）。前者主要存在于血清及其他体液或外分泌液中，具有抗体的各种功能；后者是B细胞表面的抗原识别受体。 ☆☆相关素材☆☆ 图片正常人血清电泳分离图一免疫球蛋白的基本结构 The basical structure of immunoglobulin 免疫球蛋白分子是由两条相同的重链（heavy chain，H链）和两条相同的轻链（light chain，L链）通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。 X射线晶体结构分析发现，IgG分子由3个相同大小的节段组成，位于上端的两个臂由易弯曲的铰链区（hinge region）连接到主干上形成一个"Y"形分子，称为Ig分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本单位。

抗体药物的临床应用

抗体药物的临床应用以细胞工程技术和基因工程技术为主体的抗体工程药物近年来取得了突破性进展，并成功应用于临床。一方面，随着功能基因组学与蛋白质组学的研究进展，将发现与确定越来越多新的与疾病相关的分子靶点，而与这一发展相适应的、具有高度特异性、针对疾病相关分子靶点的抗体药物将被陆续研制成功；另一方面，抗体药物用于癌症、心脑血管疾病、病毒感染以及类风湿性关节炎等疾病的治疗，受到广泛关注。日前，在由中国工程院医药卫生学部和中国医药生物技术协会共同在深圳主办“抗体靶向药物研究与临床应用研讨会”上，多位专家学者详细阐述了这一前沿领域中的成绩、问题和未来发展方向，共同推动我国抗体药物研究与临床应用的发展。自抗体被发现以来，人们有计划地对抗体基因序列进行改造，使抗体及其相关产品在多种疾蓑病诊断和治疗中发挥着重要的作用．简述了抗体改造研究经历的3个不同阶段，即免疫血清学研究阶段、单克隆抗体研究阶段和基因工程抗体研究阶段，以及抗体的研究现状。抗体在疾病的诊断、治疗和预防中发挥着重要的作用．抗体的2条重链和2条轻链根据氨基酸序列变化程度分为V区和C区，其抗原结合特异性主要由V区中高度变异的超变区决定，3个超变区共同形成1个抗原决定簇互补的表面，故又称为互补决定区(complementarity dewrminingregion，CDR)．抗体的改造研究过程经历了免疫血清学研究、单克隆抗体研究和基因工程抗体研究3个不同阶段。开发多功能抗体正如沈倍奋院士所言，制备双功能和多功能抗体是对治疗性抗体进行结构改造的重要途径之一。我国研究人员目前在这方面取得了令人可喜的进展。 SM-FL双功能抗体SM5-1是一个新的具有高度特异性的肿瘤靶向治疗单抗。Flt3配体(FL)是一种能够刺激早期造血的细胞因子，可促进树突状细胞(DC)、自然杀伤(NK)细胞的增殖、分化和成熟。为了克服单抗用于恶性肿瘤治疗中出现的肿瘤不能彻底治愈的问题，第二军医大学肿瘤研究所郭亚军教授说，他们设计构建了SM5-1人源化抗体和FL的双功能抗体分子，并使其在CHO细胞中获得了高效表达。体外实验表明，SM-FL双功能抗体具有与FL相似的扩增人脐血CD34+细胞的作用，并能有效地诱导人肝癌细胞、黑素瘤细胞凋亡，提示所构建的双功能抗体同时具有SM5-1单抗和FL的双向功能。深入研究表明，与单纯应用SM5-1单抗或/和FL相比，双功能分子的抗肿瘤作用明显增强，更为重要的是，双功能抗体激发机体产生了有效的抗肿瘤特异性主动免疫反应，使机体产生对肿瘤的“特异性免疫力”，对肿瘤复发有良好的预防作用。郭亚军教授强调，这种治疗药物模式亦可应用于其他的抗肿瘤单抗，使其治疗效果显著增加。 (scFv)2VH型单链抗肿瘤三特异抗体北京安波特基因工程技术有限公司王祥斌博士等将抗CEA单链抗体、抗CD3单链抗体和抗CD28单域抗体串联融合，构建了一种(scFv)2VH型单链抗肿瘤三特异抗体(抗CEA/CD3/CD28scTsAb)。由于提供辅刺激信号的抗CD28单域抗体亲和力较弱，该三特异抗体有可能克服非

血清免疫球蛋白测定.docx

血清免疫球蛋白测定 B-淋巴细胞受抗原刺激后，引起一系列细胞形态与生化特性变化，转化为淋巴母细胞并增生繁殖，最后演化为浆细胞，合成免疫球蛋白。免疫球蛋白普遍存在于生物体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。免疫球蛋白是一组具有抗体特性的球蛋白，其分子量很大，含有1000个以上的氨基酸分子，均由其共同抗原的两个相同的轻链（L链）和具有特异性抗原的两个不同的重链（H链）组成。 1分类根据重链的氨基酸组成不同，免疫球蛋白可分为分五类：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。 1.1IgG IgG是人体的主要免疫球蛋白，也是唯一能通达胎盘的免疫球蛋白。根据IgG的重链氨基酸顺序的差别，可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4各亚类。IgG是主要抗感染抗体，对各种细菌、病DU有抗体活性，并有激活补体的作用。 1.2IgA IgA是分泌液中主要抗体，可分为IgA1和IgA2两个亚类。存在于血清中的称血清型IgA，存在于泪液、乳汁、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道分泌液中的称分泌型IgA，对局部粘膜有抗菌和抗病DU作用。

1.3IgM IgM可分为IgM1和IgM2两个亚类。是抗原刺激最先产生的免疫球蛋白，有较强的固定补体、溶解细菌及细胞的能力。IgM是抗革兰氏阴性菌和异体红细胞的主要抗体，也是存在于B淋巴细胞表面的主要免疫球蛋白。 1.4IgD 其作用与过敏反应有关。据报道，IgD可对某些抗原起反应，如青霉素、胰岛素、核抗原、甲状腺抗原等。它存在于B淋巴细胞表面，构成早期的膜受体，具有识别抗原，制动B淋巴细胞的分化作用。 1.5IgE 与I型变态反应有关，具有亲细胞特性。IgE通过Fc段与肥大细胞、嗜碱粒细胞上的Fc受体结合，故属亲同种细胞性抗体。当机体再次接触同种抗原后，过敏原即与结合在细胞表面的IgE作用，使细胞释放介质，引起平滑肌痉挛，血管通透性增加等过敏反应，还具有抗寄生虫感染作用。 2正常参考值 IgG：8～16g/L，IgA：1～4g/L，IgM：0.5～1.9g/L，IgD：0.01～0.4g/L，IgE：0.001～0.009g/L。 3临床意义 3.1血清免疫球蛋白降低血清免疫球蛋白水平取决于免疫球蛋白合成和分解代谢的速率以及由体内丢失的程度。血清免疫球蛋白降低可由于合成不足，丢失

##(已经打印)分泌型免疫球蛋白A的研究进展

分泌型免疫球蛋白A的研究进展张宝中1，2，冉多良2，童贻刚1 1．军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071； 2．新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐830052 ［摘要］大部分感染都起源于黏膜表面，而黏膜免疫的主要抗体是分泌型免疫球蛋白A（SIgA），它能有效地阻断病原体的感染和侵入。SIgA是由1个IgA二聚体、1条J链和1个分泌片（SC）共价结合构成的异源十聚体。IgA和J链由活化B细胞产生，SC则由黏膜上皮细胞合成。SIgA分子具有极高的稳定性和极强的抗微生物活性。我们就SIgA合成的相关机制、IgA 单体和SIgA的结构与功能，以及重组SIgA的研究进展简要综述。［关键词］分泌型免疫球蛋白A；多聚免疫球蛋白受体；重组分泌型免疫球蛋白A ［中图分类号］R392．1［文献标识码］A［文章编号］1009－0002(2009)02－0263－03 Advances in Research on Secretory Immunoglobulin A ZHANG Bao－Zhong1,2,RAN Duo－Liang2,TONG Yi－Gang1 1．State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Med-ical Sciences,Beijing100071;2．College of Veterinary Science,Xinjiang Agricultural University,Urumqi,830052;China ［Abstract］The majority of infections origin from the mucous membrane surface．The mucosa immunity mainly relies on secretory immunoglobulin A(SIgA),which blocks infection and invasion of the pathogens effectively．SIgA is composed of an IgA dimer,a J chain and a secretory component(SC),which forms a hetero－decamer by covalent interactions．IgA and J chain are produced by activated B cells,while SC is synthesized by mucous membrane epithelial cells．SIgA molecules are extremely stable and have very high anti－microbe activity．In this review we summarized the SIgA synthesis related mechanism,structure and functions of IgA monomer and SIgA,as well as the advances in recombinant SIgA．［Key words］secretory immunoglobulin A(SIgA);poly immunoglobulin receptor;recombinant SIgA doi:10．3969／j．issn．1009－0002．2009．02．032综述分泌型免疫球蛋白A（secretory immunoglobulin A，SIgA）是20世纪60年代初在外分泌液中发现的一种IgA抗体，主要存在于乳汁、胃肠液、呼吸道分泌液等外分泌液中。SIgA分子是由2个IgA单体（每个单体含2条轻链和2条重链）、1条J链和1条分泌片（secretory component，SC，为多聚免疫球蛋白受体的胞外裂解片段）构成的异源十聚体[1]，为了与血清IgA单体相区别而被命名为SIgA。研究表明，SIgA是外分泌液中存在的一种主要抗体，是呼吸道、消化道、泌尿生殖道等抵御病原体及有害物质的第一道免疫防线，是机体黏膜免疫最重要的抗体[2－4]。 1分泌型IgA合成的相关机制二聚体IgA（dIgA）或多聚体IgA（pIgA）从浆细胞分泌出来后，在上皮细胞的嗜碱性侧与多聚免疫球蛋白受体（poly im-munoglobulin receptor，pIgR）以共价健形成dIgA－pIgR或pIgA－pIgR复合物，然后通过内吞作用和转运被运输到黏膜外侧，此后完整的SIgA分子通过pIgR分裂（pIgR C端跨膜部分和胞内部分在黏膜上皮细胞内降解）释放出来。SIgA在保护机体免受黏膜表面的微生物侵袭方面起着非常重要的作用，其合成与抗原提呈、淋巴细胞归巢迁移（trafficking）及周围环境中的细胞因子均有很大关系[5]。在黏膜免疫诱导部位，抗原加工、提呈后，形成针对抗原的IgA型B细胞。在此过程中，B细胞的分化、增殖有赖T 细胞的帮助[6]。其中多种Th2样因子参与了诱导部位B细胞增殖、分化，相关因子包括TGF－β、IL－4等。前体B细胞在诱导部位内进行同种型转换（isotype switch），形成膜表面抗体IgA阳性的B细胞，同种型转换是形成IgA型浆细胞的关键之一。体外研究发现[7]，在TGF－β作用下，B细胞基因重排，使Cα基因得以表达，从而使其转型为IgA型B细胞。但有研究证实IL－4的作用远高于TGF－β。在体内实验中[8]，证实IL－4是调控B细胞在PP （潘氏结）内分化的主要因子，IL－4－／－小鼠失去合成IgA的功能，提示IL－4对于IgA的合成十分重要。 2SIgA的结构特征 IgA在分泌物中主要以二聚体形式存在，SIgA是由十肽组成的免疫球蛋白，来自2个不同的细胞系，沉降系数为11S，它包含2个单体的IgA、1条J链和1个分泌片，它们通过共价结合就形成所谓的SIgA。［收稿日期］2008－08－06 ［基金项目］国家自然科学基金（30872223）［作者简介］张宝中（1982－），男，硕士研究生［通信作者］童贻刚，（E－mail）tongyg＠hotmail．com

免疫球蛋白IgE

免疫球蛋白I g E This manuscript was revised on November 28, 2020

免疫球蛋白IgE 免疫球蛋白lgE（人体的一种抗体），存在于血中。是正常人血清中含量最少Ig，可以引起I型超敏反应球蛋白偏高，与慢性肝病，机体免疫系统有关。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（γ-球蛋白）中。可分为五类，即免疫球蛋白G （IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。其中IgG是最主要的免疫球蛋白，约占人血浆丙种球蛋白的70%，分子量约15万，含糖2～3%。IgG分子由4条肽链组成。其中分子量为2.5万的肽链，称轻链，分子量为5万的肽链，称重链。轻链与重链之间通过二硫键（—S—S—）相连接。免疫球蛋白是机体受抗原（如病原体）刺激后产生的，其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，从而阻断病原体对机体的危害，使病原体失去致病作用。另一方面，免疫球蛋白有时也有致病作用。在慢性乙肝患者，长期白、球比例倒置，警惕有肝硬化迹象免疫球蛋白Ig的医学定义是具有免疫功能或结构与抗体相似的球蛋白，其基本结构是：两条相同的重链和两条相同的轻链由链间二硫键连接而成。重链根据恒定区中氨基酸种类和排列顺序不同分为5种：α，γ，δ，ε，μ。分别对应5种含相应重链的免疫球蛋白：IgA,IgG,IgD,IgE,IgM。血清免疫球蛋白E(IgE)又称为反应素，是血清中含量最少的一类免疫球蛋白，只占血清总量的0.001%。IgE测定用国际单位IU或ng表示， 1IU=2.4ng，相当于WHO标准冻干血清制剂0.00928内所含的IgE量。 IgE是正常人血清中含量最少的Ig，正常浓度是5×10的-5次方 mg/ml。正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、年龄、检测方法及取样标准等因素的影响，各家各医院的正常值相差甚远。它是一种亲细胞抗体，与具有吞噬作用的肥大细胞，嗜中性粒细胞(可以吞噬被细菌，病毒等有害病原体感染的细胞)有很高的亲和力。因此可以介导Ⅰ型超敏反应，即我们平时所说的过敏反应。此外，IgE可能与抗寄生虫感染有关。一般大于100-333IU/ml（ku/L）即大于250-800ng/ml(μg/L)即表现为增高，主要见于过敏性体质及过敏性疾病，如哮喘、过敏性鼻炎、荨麻疹等。

免疫球蛋白分哪几类各类都有哪些特性和作用

免疫球蛋白分哪几类?各类都有哪些特性和作用? 免疫球蛋白分五类，分别命名为免疫球蛋白G、A、M、D、E，简称：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。各类免疫球蛋白的特性和作用不一。 1、IgG IgG是人类血清中含最高的一种免疫球蛋白，约占成人血清中免疫球蛋白总量的70~75％。IgG是唯一能通过胎盘，可由母体传递至胎儿血循环的抗体。这种传递不是一种简单的过滤或被动扩散，而是通过IgG的Fc片段选择性地与胎盘微血管发生可逆性结合而传递过去的。IgG可固定补体，各亚类固定补体的能力是lgG3>IgG1>IgG2>IgG4，但是IgG 是一个免疫球蛋白单体，其结合固定补体只一个单位的IgG不行，而需要两个单位或更多的IgG分子相聚才能起作用。此外，IgG的Fc段可和巨噬细胞上的Fc受体结合，增强巨噬细胞吞噬细菌或杀伤靶细胞的作用。金黄色葡萄球菌A蛋白也可和IgG的Fc段特异结合，可用金黄色葡萄球菌A蛋白代替抗IgG的抗体，进行一些免疫学试验。IgG是体内重要的抗感染抗体，初生婴儿可由母体被动获得这种抗体，抵抗某些传染病。出生3个月后能合成自身的IgG，5岁达到成人水平，大部分抗菌、抗毒素、抗病毒抗体都属于此型。IgG还是重要的自身抗体成分，某些抗核抗体、抗甲状腺抗体都属于IgG型。总之，IgG是重要的抗感染抗体，可视其为抗感染的主力军，在抗感染免疫发生时，它不仅产量大，而且作用时间持久，效果可靠。 2、IgA在血清免疫球蛋白中，IgA约占总量的15％左右，其结构有单体或双体、三体等多聚体。血清中主要是单体IgA，唾液、泪液、初乳、鼻和支气管分泌液、胃肠液、尿液、汗液等外分泌液中主要是双体IgA，又称分泌型IgA，其含量较血清中高6～8倍。分泌型IgA的结构为两个单体IgA，中间夹着一个分泌片和一个连接链(J链)，两个单体IgA 和一个J链是浆细胞产生的，J链是一种酸性糖肽，通过二硫键连接两个单体IgA，分泌片是由粘膜上皮细胞合成的糖蛋白成分，其本身无免疫活性，但可保护IgA抵抗分泌液中蛋白酶的水解。分泌型IgA是局部抗感染免疫的重要因素，如初生婴儿易患呼吸道和胃肠道感染，共济失调毛细血管扩张症者易并发呼吸道感染，或慢性气管炎反复发作，或肠道菌群失调所发生的脂肪痢，以及儿童扁桃体摘除后小儿麻痹发病率增高等，都与分泌型IgA产生不足或

血清免疫球蛋白测定(一)

血清免疫球蛋白测定(一) B-淋巴细胞受抗原刺激后，引起一系列细胞形态与生化特性变化，转化为淋巴母细胞并增生繁殖，最后演化为浆细胞，合成免疫球蛋白。免疫球蛋白普遍存在于生物体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。免疫球蛋白是一组具有抗体特性的球蛋白，其分子量很大，含有1000个以上的氨基酸分子，均由其共同抗原的两个相同的轻链（L链）和具有特异性抗原的两个不同的重链（H链）组成。 1分类根据重链的氨基酸组成不同，免疫球蛋白可分为分五类：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。 1.1IgG IgG是人体的主要免疫球蛋白，也是唯一能通达胎盘的免疫球蛋白。根据IgG的重链氨基酸顺序的差别，可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4各亚类。IgG是主要抗感染抗体，对各种细菌、病毒有抗体活性，并有激活补体的作用。 1.2IgA IgA是分泌液中主要抗体，可分为IgA1和IgA2两个亚类。存在于血清中的称血清型IgA，存在于泪液、乳汁、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道分泌液中的称分泌型IgA，对局部粘膜有抗菌和抗病毒作用。 1.3IgM IgM可分为IgM1和IgM2两个亚类。是抗原刺激最先产生的免疫球蛋白，有较强的固定补体、溶解细菌及细胞的能力。IgM是抗革兰氏阴性菌和异体红细胞的主要抗体，也是存在于B淋巴细胞表面的主要免疫球蛋白。 1.4IgD 其作用与过敏反应有关。据报道，IgD可对某些抗原起反应，如青霉素、胰岛素、核抗原、甲状腺抗原等。它存在于B淋巴细胞表面，构成早期的膜受体，具有识别抗原，制动B淋巴细胞的分化作用。 1.5IgE 与I型变态反应有关，具有亲细胞特性。IgE通过Fc段与肥大细胞、嗜碱粒细胞上的Fc受体结合，故属亲同种细胞性抗体。当机体再次接触同种抗原后，过敏原即与结合在细胞表面的IgE作用，使细胞释放介质，引起平滑肌痉挛，血管通透性增加等过敏反应，还具有抗寄生虫感染作用。 2正常参考值 IgG：8～16g/L，IgA：1～4g/L，IgM：0.5～1.9g/L，IgD：0.01～0.4g/L，IgE：0.001～0.009g/L。3临床意义 3.1血清免疫球蛋白降低血清免疫球蛋白水平取决于免疫球蛋白合成和分解代谢的速率以及由体内丢失的程度。血清免疫球蛋白降低可由于合成不足，丢失增多和分解加快引起。合成不足：血清免疫球蛋白降低可由于原发性或继发性合成缺陷所致。原发性免疫缺陷病有性联先天性丙种球蛋白缺乏症、婴儿暂时性丙种球蛋白低下症、伴IgM升高的性联低丙种球蛋白血症、选择性IgA缺乏症、选择性IgM缺乏症、选择性IgG亚类缺乏症等。继发性免疫缺陷病有慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症和恶性肿瘤等。丢失增多：从胃肠道丢失的见于溃疡性结肠炎、消化道癌肿、吸收不良综合征、淋巴瘤、肠淋巴管扩张症。从皮肤丢失的有急性灼伤、特异反应性皮炎。从浆膜腔丢失的有胸膜炎、腹膜炎、反复抽胸腹水。从肾脏丢失的有肾小球肾炎（微小病变型、膜性、增殖性）、肾静脉血栓形成、SLE和淋巴瘤。主要是由于蛋白从尿中丢失或毒素抑制免疫球蛋白合成，后者首先影响IgM，其次影响IgA，然后再影响IgG。分

0免疫球蛋白

0免疫球蛋白 1、具有J链的Ig是( ) A．IgG1 B．IgG C．sIgA D．IgE E．IgD 2、外分泌液中含量最高的Ig是( ) A．IgM B．IgG C．IgA D．IgE E．IgD 3、再次免疫应答的主要抗体是( ) A．IgA B．IgD C．IgM D．IgE E．IgG 4、体内抗病毒、中和毒素、抗真菌最重要的抗体为( ) A．IgA B．IgM C．IgG D．IgE E．IgD 5、胎儿合成的第一种Ig是( ) A．IgM B．IgG C．IgA D．IgD E．IgE 6、与蛋白质载体结合后才具有免疫原性的物质是( ) A．完全抗原 B．TD抗原 C．TI抗原 D．半抗原 E．自身抗原 7、从免疫血清中粗提γ球蛋白最简便的方法为( ) A．亲和层析 B．离子交换层析 C．凝胶过滤 D．超速离心 E．硫酸铵盐析 8、Ig分子的Fab片段能( ) A．通过胎盘 B．激活补体 C．结合抗原 D．结合细胞 E．以上说法都不正确 9、根据生物分子间所具有的专一性亲和力而设计的分离纯化技术为( ) A．离子交换层析法 B．免疫亲和层析法 C．盐析法 D．免疫电泳法 E．凝胶过滤法 10、与肥大细胞和嗜碱性粒细胞有亲和力的Ig 是( ) A．IgG B．IgA C．IgD D．IgE E．IgM 11、新生儿从母乳中获得的Ig是( ) A．IgA类抗体 B．IgM类抗体 C．IgG类抗体 D．IgD类抗体 E．IgE类抗体 12、制备组织细胞抗原时，所用的组织必须( ) A．新鲜或低温保存 B．121℃、15min灭菌 C．甲醛固定5min D．应用蒸馏水灌注以清洗血液及有形成分 E．25℃保存 13、亲和层析支持物最常用的是( ) A．聚丙烯酰胺 B．Sepharose4B C．硝酸纤维素 D．多孔玻璃球 E．琼脂粉 14、分离亚细胞成分或大分子蛋白质最常用的方法为( ) A．超速离心法 B．高速离心法 C．低速离心法 D．凝胶过滤法 E．选择性沉淀法 15、独特型决定基存在于Ig分子的( ) A．CH区 B．CL区

血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定

实验八血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定为了初步掌握蛋白质的分离纯化技术，选择了从家畜血清中分离纯化免疫球蛋白G （Immunoglobulin G，简称IgG）的实验。血清中的蛋白质有数十种之多，IgG是球蛋白的一种。分离纯化蛋白质的方法是利用不同蛋白质的某些物理、化学性质（如在一定条件下带电的情况、分子量、溶解度等）的不同而建立起来的，其中有盐析、离子交换、凝胶过滤、亲和层析、制备电泳和超速离心等。在分离纯化时，要根据情况选用几种方法互相配合才能达到分离纯化一种蛋白质的目的。本实验采用硫酸铵盐析、DEAE-纤维素离子交换及凝胶过滤等方法，提取家畜血清中IgG。其原理及操作如下：㈠硫酸铵盐析 1.试剂饱和硫酸铵溶液pH7.0：称取（NH4）2SO4760g,加蒸馏水至1000ml，加热至5℃，使绝大部分硫酸铵溶解，置室温过夜，取上清液，用氢氧化铵调pH至7.0。（内含0.15mol/L NaCl，简称PBS）：取0.2mol/L Na2HPO4磷酸缓冲溶液（0.01mol/L，pH7.0）溶液30.5ml，0.2mol/L NaH2PO4溶液19.4ml，加NaCl8.5g，加蒸馏水至1000ml。磷酸缓冲溶液（0.0175mol/L，pH6.7）（不含NaCl，简称PB）：取0.2mol/L Na2HPO4溶液43.5ml，0.2mol/L NaH2PO4溶液56.6ml混合，用蒸馏水稀释至1000ml。 2.操作①取家畜血清5ml，加磷酸缓冲溶液（0.1mol/L，pH7.0）5ml，混匀，滴加（边摇边搅拌）饱和硫酸铵4ml（此时溶液硫酸铵饱和度约为20%）。静置20min，以3000r/min 离心15min，沉淀为纤维蛋白（弃去），上清液中含清蛋白、球蛋白。②取上清液，再加饱和硫酸铵溶液6ml（方法同前），此时溶液硫酸铵饱和度为50%，静置20min，以3000r/min 离心15min，上清液中含清蛋白，沉淀为球蛋白。③倾去上清液，将沉淀溶于5ml磷酸缓冲液（0.01mol/L pH7.0），再加饱和硫酸铵 3.2ml，此时溶液硫酸铵的饱和度约为33%，静置20min，以3000r/min离心15min，除去上清液，沉淀即为γ-球蛋白。㈡凝胶过滤脱盐 1.试剂①Sephadex G-25：用前以蒸馏水浸泡5h或在沸水浴中溶胀2h；②磷酸盐缓冲液（pH6.7，0.0175mol/L）：见前；③磷酸盐缓冲液（pH7.0，0.01mil/L）见前；④奈氏试剂； ⑤20%磺酰水杨酸。 2.操作①取层析柱一根（1.5cm×20cm），垂直于固定架上，夹住流出口。加10ml磷酸缓冲液（0.0175mol/L, pH6.7）于柱中。将已溶胀好的Sephadex G-25倾倒去水，加入磷酸盐缓冲液并搅拌成悬浮液，慢慢装入柱中，打开流出口，继续加入Sephadex G-25使自然沉降至15cm高，关闭出口。②打开出口，使柱中多余的磷酸缓冲液流出凝胶柱床面（切勿低于柱床面）。用吸管吸取盐析所得的蛋白质溶液2ml，沿管壁加入凝胶面上，打开流出口，让样品进入凝胶柱，再用滴管小心加入磷酸盐缓冲液至离凝胶面2～3cm高，编号，按顺序放在试管架上。③在收集的同时，检查蛋白质是否流出。于每管中取出1滴放在黑色比色板孔中（按编号顺序），再分别加入1滴20%磺酰水杨酸，如出现白色沉淀即表示蛋白质已流出凝胶柱，如此直检查到蛋白质全流出为止。与此同时，再从含蛋白质的管中取出1滴于白色比色板中，加入奈氏试剂1滴，如蛋白管中不出现棕色，即表示蛋白质中的硫酸铵已除去，合并无硫酸铵的蛋白质管，待用。㈢DEAE-纤维素纯化免疫球蛋白G 1.试剂①DEAE-纤维素：DE-11、DE-22、DE-32、DE-52均可；②0.5mol/L HCl溶液；③0.5mol/L NaOH溶液；④pH6.7，0.0175mol/L磷酸盐缓冲液。 2.操作