固定化糖化酶实验

糖化酶的固定化实验

一 实验目的

1、掌握制备固定化酶的方法、原理及固定化酶的特点

2、在固定化糖化酶作用下测定底物糊精转化成糖的转化率

二 实验原理

1、固定化酶（细胞），就是把游离的水溶性酶（细胞），限制或固定于某一局部的空间或固体载体上。

2、与游离酶（细胞）相比，固定化酶（细胞）具有如下优点：

① 容易将固定化酶（细胞）与底物、产物分开，产物溶液中没有酶（细胞）的残留，简化了提纯工艺；

② 可以在较长时间内反复使用，有利于工艺的连续化；

③ 反应过程可控性提高，有利于工艺自动化和微电脑化；

④ 在绝大多数情况下提高了酶（细胞）的稳定性；

⑤ 较能适应于多酶反应；

⑥ 酶的使用效率、产物得率提高，产品质量有保障。

3、酶的固定化方法：通常的固定化方法可以概括为三种：a 、载体结合法 b 、交联法 c 、包埋法

4、包埋法

包埋法是将酶（细胞）包在凝胶微小格子内，或是将酶（细胞）包裹在半透性聚合物膜内的固定化方法。

该法的优点是：酶分子（细胞）本身不参加格子的形成，大多数酶都可用该法固定化，且方法较为简便；酶分子（细胞）仅仅是被包埋起来而未受到化学作用，故活力较高。其缺点是不适用于大分子底物。

三 固定化糖化酶催化糊精生成葡萄糖的反应

固定化糖化酶催化淀粉液化产物——糊精反应生成葡萄糖。本实验操作的工艺流程如下：

糖化酶 2%的淀粉溶液

↓ ↓

缓冲液溶解 糊精

↓ ↓

海藻酸钠→溶解→ 混合→造粒→固定糖化酶颗粒→混合→催化反应pH4.6→葡萄糖 标准曲线公式：

还原糖（葡萄糖）计算公式

思考题：

凝胶包埋 d 微胶囊包埋

1、固定化酶（细胞）的方法有哪些？并分别简要说明。

2、结合本实验说明固定床固定化酶反应器的优缺点。

点名、检查预习报告、写一份报告样本