总三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书医学检验

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文件名称: 总三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02
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表号: KM-MP03•02•04
文件名
Title of Doc.(Doc.
Code)
总三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书（KM-SOP0300•303）
版本号(Edition No.) Edition 生效日期(Operative
date)
2008-03-13
文控部门
(Doc. Control Dept.)
实验室文控室
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1 实验室文控室（陈彬）
2 化学发光室（段学成）
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袁意彬
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陈建波
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总三碘甲状腺原氨酸检测作业指导书（Analysis of 3,5,3'triiodothyronine（TT3） by IMMULITE 2000)
1.原理（Test principle）:
固相、竞争法化学发光免疫量度检测。

采用化学发光法：包括免疫反应和化学反应,利用在化学反应中释放大量自由能成为激发态中间体,当其回到稳定的基态时,同时也发射出光子，利用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量
2. 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:
标本收集（Specimen collection）:类型（Type）:血清(Serum);用量(Volume)，仪器加样量(Sampling volume)25μL
拒收标本（Specimen rejection）：EDTA抗凝血样本应拒收。

推荐使用超速离心清除脂血（lipoprotein）样本。

溶血（hemolysis）样本提示样本在送达实验室之前处理不当，因此检测结果将受到影响，应予以注意。

血清（serum）样本在未充分凝集前离心将导致纤维蛋白的存在。

为避免纤维蛋白对结果的影响必须确保离心处理前样本已经完全充分凝集。

对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。

源于不同生产商的血样收集试管，由于原材料和添加剂不同，包括凝胶或物理涂层、促凝剂和/或抗凝剂，可能导致得到不同的结果。

本试剂盒没有对所有可能应用的收集管类型进行测试。

标本储存条件(Specimen storage conditions)：室温(Room temperature):1天；2-8℃7天； -20℃2个月；十天后处理标本
3. 试剂(Reagent)：
美国DPC IMMULITE 2000 原装试剂。

3.1.1试剂内组份(Components)：
Total T3包被珠（L2T312）
包被珠包装带有条码。

一个包装200个。

包被有单克隆鼠抗T3抗体。

2～8℃可稳定保存至失效期。

(Stored in 2～8℃based on manufacturer instruction)
L2KT32：1个L2KT33M：15个
L2KT36：3个L2KT36M：30个
Total T3试剂楔（L2T3A2）
试剂楔带有条码。

碱性磷酸酶（小牛肠）标记的抗配基缓冲液。

2～8℃可稳定保存至失效期。

L2KT32：1个L2KT33M：15个
L2KT36：3个L2KT36M：30个
使用前将试剂楔顶部穿孔部位的胶条撕开，注意不要损坏条码。

揭掉试剂楔顶部的铝箔封条，将试剂楔滑盖的顶部搭扣在下方的斜坡上。

Total T3校正（LT3L，LT3H）
两瓶（低、高）冻干的含TT3的经处理人血清。

复溶每瓶加蒸馏水或去离子水。

复溶后2～8℃可稳定保存30天，-20℃可以保存（分装）6个月。

L2KT32：1套L2KT33M：3套
L2KT36：2套L2KT36M：4套
校正前将相应的分装标签（随试剂盒提供）贴于实验管上，以便分析仪上的读码器能够读取条码。

3.1.2未随试剂盒提供的组分
L2SUBM：化学发光底物
L2PWSM：探针清洗液
L2KPM：探针清洗试剂盒
L2RXT：反应管（一次性）
CON6：三水平、多成分的质控
其它必需：蒸馏水或去离子水、实验试管、
试剂准备( Reagent preparation)：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。

Put reagent from refrigerator to room temperature for proper time;New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Record the results.
4. 仪器（Instrument）：美国DPC IMMULITE 2000.
仪器准备（Prepare apparatus）：使用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的蒸馏水，清冼液，底物及样本杯。

然后运行仪器操作软件。

而后排水及底物，防止内有残留气柱。

将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。

5. 安全防范（Safety Precautions）：
操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。

6. 校准（Calibration）：
校准品储存和使用(Calibration material storage and usage)：美国IMMULITE 2000 原装校准品。

要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。

Stop using overdue calibration material. use it within expiration date, storage in 2-8℃
配制（Calibration material redissolve）：用复溶专用加样枪准确吸取4mL去离子水于瓶中，溶解静置1小时，混匀并用有盖小子弹头分装600μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于－20℃冻存备用。

Label confecting date, calibration lot, person who confected, expiration date. then storage it at －20℃.
复溶后校准品成分的稳定性：保存于15~25℃，可稳定8小时
保存于2~8℃，可稳定30天
保存于-20℃，可稳定6个月（不可反复冻融）。

当下列任何一种情况出现时，请重新校准：(If one of the two happens, recalibration )
⑴试剂批号改变 (Reagent lot changes)
⑵根据质控需要进行校准(Recalibration based on quality control problem) （3）校准周期（Frequency of calibration）：两周(Two weeks)。

步骤：将两个样本管中分别加入至少500ul的A，B校准品，并一一对应分别贴上校准条码，放入样本架上。

将样品架推入样品槽中，点击RUN。

然后在计算机屏幕上选择kits项，用扫码器扫描药盒上的条码，选择worklist项，输入校正信息，输入是需在ADJUSTOR中的Kit lot一栏中输入校正信息，并申请T3检测项目，开始校准。

校准结果判断标准: 仪器自动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必须跟做所有
浓度的质控，如质控在控则校准通过。

7. 操作过程：(Procedural Steps)
将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的样本管。

取出空样本架，将含有血清的样本管加入样品架中，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架推入样品槽中。

因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul。

（样本用量100ul）交待清楚实验号与样本架号的对应关系，便于联机。

点击RUN。

在[WORKLIST]中输入实验号，在[Assign Tube Position]中指定样品位置，在TesTs中指定TT3项目。

结果出来后，在菜单[tool]中的export按日期打出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。

数据联机入系统( Send data to LIS )
数据审核(Data checkup)：联机是否正确？审查结果是否正确?实验号与样本架号的对应，原始导出结果与系统结果是否对应等。

8质量控制(Quality control)：
使用CON6质控品做质控，每工作日至少做两个浓度的值，,并作好记录并分析质控结果，质控在控才能发报告。

T3最大允许误差ALE为25%，室内质控CV为L: %;H: %，偏移为%,过程稳定性<2%.根据公式:△SEc=（ALE-Bias）/利用计算软件可得, 低值选择的质控规则: 13s/22s/R4s/41s N=2; 高值选择的质控规则13s/22s/R4s/41s N=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理
9. 稀释（Dilution）：
9．1 分析测试范围（AMR）：40～600 ng/dl（～ nmol/L）
9．2病人结果报告范围（CRR）：N/A~ ng/ml
当结果超过AMR时，需要稀释，如果需要手工稀释，按以下标准
稀释材料（Dilution material）:TT3 diluent
最大稀释倍数（Dilution times）:1:9(20ul sample: 180ul diluent)
混匀后放入样本架，之后同样本操作。

但是要在Manual Dilution中指定手工稀释的稀释倍数。

同样本一样处理，但要将稀释液加入样本管并贴上条码，这同样本操作相同。

仪器自动稀释的样本在Dilution中指定稀释倍数。

TT3最大稀释倍数10倍.
10计算(Calculations)：N/A
11 参考范围（Expect Values）：95％范围：84～172 ng/dl（～ nmol/l）。

12 结果解释（Interpretation of Results）：
[1]许多生理、药理、病理和遗传因素都可影响对总T3结果的判读。

（参见“概述与说明”部分）
[2]20％以上的非甲状腺疾病危重患者伴有血清总T3水平降低。

人血清中的嗜异性抗体可与试剂盒组份中的免疫球蛋白反应，对体外免疫检测产生影响。

【见Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies：a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988：34：27-33】从经常接触动物或动物血清制品的病人采样检测，表明这种干扰潜在导致异常结果。

这些试剂经过设计，干扰的风险已经最小化；但是，稀有血清和检测组份之间还是有可能产生交叉反应。

此项测定结果应始终结合临床检查、病史和其它相关资料才能作出正确诊断。

13方法的局限性（Method Limitations）：
精密度（Precision）:
精密度（Precision）:
13.1.1批间精密度：
Mean SD CV(%)
%
%
13.1.2批内精密度：
Mean SD CV(%)
%
灵敏度（Sensitivity）：19 ng/dl（ nmol/l）
特异性（Specificity）：使用高度特异性T3抗体
分析测试范围（AMR）：40～600 ng/dl（～ nmol/l）
病人结果报告范围（CRR）：N/A~ ng/ml
干扰物质（Interfering Substances）：
[1]胆红素影响（Bilirubin）：样本中胆红素的浓度直至200 mg/L，在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。

[2]溶血影响（Hemolysis）：样本中压积红细胞的浓度直至30µL/m l，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。

[3]脂血影响（Lipemia）：样本中甘油三酯的浓度直至5000 mg/dl，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。

注意事项（Notices）: 仅供体外诊断使用(Use only for invitro diagnosis)
●试剂：2～8℃保存。

其处理应遵守相应的法律规定。

●对于所有组份都要将其视为传染原，按照全球传染病预防法来处理和防范。

源自人血的原材料全部经过检验，与梅毒、HIV 1&2抗体、HBsAg和HCV抗体没有反应。

●加入浓度小于0.1g/dL的叠氮钠作为防腐剂。

其处理措施应采用在铅或铜质容
器中以大量水冲洗，避免易爆的金属叠氮化合物聚集而产生潜在爆炸危险。

●化学发光底物：避免污染和日光直射。

（参见说明）
●水：使用蒸馏水或去离子水
14. 临床意义（Clinical Significance）：
（1）增高：毒性弥漫性甲状腺肿、多结节性甲状腺肿伴甲亢又称毒性结节状甲状腺肿（Plummer病）包括毒性单个性和多个性结节状甲状腺肿、自主性高功能性甲状腺结节或腺瘤、碘甲亢、甲状功能亢进性甲状腺癌、垂体性甲亢、卵巢甲状腺肿、异位性TSH综合症，绒毛膜癌，支气管癌和直肠癌等均可分泌TSH样物质而亢进、甲状腺炎性甲状腺毒病、药物性甲状腺毒症、甲亢危象、甲亢性心脏病、腺机能亢进症、T3型甲状腺机能亢进症、甲状腺机能亢进复发先兆、T3型甲状腺功能亢进症、甲状腺功能亢进早期及甲状腺功能亢进复发的指标。

血清T3测定是诊断甲亢最灵敏的一项指标。

甲亢时血清T3可高于正常人4倍许，而T4仅为倍，故根据T3测定结果，较易和正常人区别开来。

若病人T3正常，又排除 TBG降低的因素，则可排除甲亢。

T3测定是T3型甲亢的一种特异性诊断指标，T4正常而仅有T3增高的甲亢，可据此诊断，在功能亢进性甲状腺瘤或多发性甲状腺结节性肿大患者中以及缺碘地区较多见此类型甲亢。

有些甲亢患者在TT4升高之前，有一段TT3升高期，可能为甲亢的前驱期。

甲亢病人经抗甲状腺药物治疗，症状未完全控制，血清T4已降至正常，此时T3仍可高于正常。

甲亢复发时，以T3升高较早，故T3值升高可作为甲亢复发的先兆诊断。

甲亢时用131I治疗后，若T3值仍高，常提示治疗失败。

服用口服避孕药、激素类药、
妊娠等都会使体内血清T3水平增高，而甲状腺功能并未发生亢进
（2）降低：甲状腺功能减低症、单纯性甲状腺肿及低 T3综合症（在日常生活中，甲状腺功能正常的人，如长期禁食或患重病时，由于T4转变为T3的减少，可使患者血清TT3值明显下降,称为低T3综合征。

）常见于胃癌、急性或慢性肾衰、慢性肝炎、肝硬化未控制的糖尿病、急性心肌梗塞等、长期营养不良或某些重症全身性疾病时，虽然甲状腺功能正常，病人T4正常，而T3可下降，严重者可出现甲状腺机能减退症状。

婴儿脐带血的T3值比正常人血清明显为低，可能由于胎儿T4转变为T3也明显减少所致。

服用雄性激素治疗、肾上腺皮质激素治疗、肾病综合症、肝功能衰竭、药物(如苯妥因钠、保泰松)治疗、遗传性甲状腺激素结合蛋白减少等均可能使血清T3水平下降。

15. 参考文献（References）：
①Boscato LM，Stuart MC. Heterophilic antibodies：a problem for all
immunoassays. Clin Chen 1988：34：27-33
②IMMULITE 2000 Total T3 kit instruction
③<<中华医学检验全书>>
④IMMULITE 2000 operation instruction。