免疫学检测技术的基本原理及其应用
常用免疫学检验检测技术
要点一
总结词
要点二
详细描述
蛋白质分析的常用技术
免疫印迹技术是一种用于分离、检测和识别蛋白质的常用 技术。该技术通过将蛋白质混合物在凝胶上进行电泳分离 ，然后将其转移到膜上，再与特异性抗体结合，最后通过 显色反应检测目标蛋白质。免疫印迹技术具有高灵敏度、 高特异性和可同时检测多个蛋白质的特点，广泛应用于生 物学、医学和生物工程领域。
注意事项
由于放射性同位素具有放射性，操作过程中需要注意安全防护，避免对操作人员和环境造成污染。同 时，由于放射免疫分析需要使用放射性同位素标记的抗原，因此成本较高。
优缺点分析
优点
放射免疫分析具有较高的灵敏度和特异性， 可以用于痕量物质的定量检测；操作简便， 易于自动化；测量结果准确可靠。
缺点
由于使用放射性同位素，操作过程中存在安 全风险；成本较高，需要特殊仪器和实验室 条件；对于某些样品，可能存在交叉反应或 非特异性干扰。
化学发光免疫分析（CLIA）
总结词
快速、高灵敏度的定量检测技术
详细描述
化学发光免疫分析是一种基于化学发光反应 的免疫分析技术，通过测量化学发光反应过 程中释放的光子数量来检测抗原或抗体的浓 度。该技术具有快速、高灵敏度和低背景干 扰的优点，广泛应用于传染病、肿瘤标志物
和激素等生物分子检测领域。
免疫印迹技术（Western Blot）
05
其他常用免疫学检验检测技术
时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）
总结词
高灵敏度、高特异性的定量检测技术
详细描述
时间分辨荧光免疫分析是一种基于荧光能量共振转移的免疫分析技术，通过测量荧光标 记物的发射光谱来检测抗原或抗体的浓度。该技术具有高灵敏度、高特异性和低背景干
临床免疫学检验方法与应用
临床免疫学检验方法与应用免疫学是一门研究机体对抗病原体、维持免疫平衡的科学，其在临床诊断中起着举足轻重的作用。
免疫学检验方法多种多样，能够准确地检测机体的免疫状态，有助于诊断和治疗各种疾病。
本文将介绍几种常见的临床免疫学检验方法及其应用。
1. ELISA法ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学检验方法，通过酶标法测定抗体或抗原的存在量。
ELISA法可用于检测HIV、乙肝、梅毒等疾病的抗体水平，也可用于测定药物浓度或病毒载量。
由于ELISA法操作简便、灵敏度高，因此在临床诊断中得到广泛应用。
2. 免疫荧光法免疫荧光法是一种通过检测抗体或抗原在细胞或组织中的荧光信号来进行免疫检测的方法。
免疫荧光法被广泛用于自身免疫性疾病的诊断，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
通过观察免疫荧光信号的强度和分布，可以判断患者的免疫状态和疾病程度。
3. 免疫印迹法免疫印迹法（Western Blot）是一种通过检测抗体与特定抗原结合而形成的免疫复合物来进行检测的方法。
免疫印迹法主要用于检测蛋白质的表达水平和鉴别不同蛋白质。
在临床上，免疫印迹法常用于肿瘤标记物的检测和分析，有助于早期发现恶性肿瘤。
4. 细胞免疫学方法细胞免疫学是研究机体免疫细胞及其功能的学科，其方法主要包括细胞毒活性测定、淋巴细胞亚群分析、细胞因子测定等。
这些方法在免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应的诊断和治疗中起着关键作用。
5. 其他免疫学检验方法除了上述几种常见的免疫学检验方法外，还有许多其他方法，如流式细胞仪、PCR法、化学发光法等。
这些方法在特定疾病的诊断和治疗中有其独特的应用价值，为临床医生提供了更多的诊断手段和治疗选择。
总结免疫学检验方法在临床诊断中发挥着不可替代的作用，能够帮助医生准确判断患者的免疫状态和疾病情况，指导治疗方案的制定和调整。
不断发展的免疫学技术为医学进步提供了强大的支持，相信随着科学技术的不断创新和进步，免疫学检验方法将在临床应用中发挥越来越重要的作用。
现代医学中的免疫学鉴定技术
现代医学中的免疫学鉴定技术随着科技的不断发展，现代医学已经发展到了一个新的高度。
免疫学作为现代医学中一个重要的领域，对于诊断、治疗和预防疾病都有着重要的作用。
在现代医学中，有很多免疫学鉴定技术被广泛应用。
本文将分别介绍其中的几种技术。
1. 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA是一种非常常见的免疫学鉴定技术。
ELISA可以用于测定样本中某种特定的蛋白质或抗体，从而对疾病进行诊断。
该技术通常是通过酶标记的抗体来实现的。
它具有敏感度高、特异性好等优点，已被广泛应用于癌症、艾滋病、结核病等疾病的检测。
2. 免疫印迹（Western Blotting）Western Blotting是一种用于验证抗体特异性的技术，通常是用于分析血清中的抗体反应。
该技术的基本原理是将分离出的蛋白质进行电泳分离，再将其转移到膜上，并进行固定和印迹处理。
最后，用与特定蛋白质结合的抗体标记来检测目标蛋白质是否存在。
该技术在艾滋病、乳腺癌等疾病的鉴定中被广泛使用。
3. 免疫荧光技术（IFA）IFA是一种通过荧光显微镜来检测抗体或抗原的技术。
具体来说，IFA应用特定的抗体标记对待检测的细胞或病原体进行染色，并通过荧光显微镜来观察目标蛋白质是否存在。
IFA通常用于季节性感冒、风疹等疾病的诊断中。
4. 免疫电泳免疫电泳是一种通过电泳将具有不同电荷的蛋白质分离开，并通过抗体与特定的蛋白进行反应，从而诊断某种疾病的技术。
免疫电泳通常用于血液蛋白质异常的检测、肾病的诊断等。
5. 免疫荧光细胞排序（FACS）免疫荧光细胞排序是一种通过荧光激发分选单个细胞或微粒的技术。
FACS可以通过多种荧光标记来分别测定特定蛋白质的表达、淋巴细胞分类、溶酶体活性等。
该技术在肿瘤研究、免疫细胞研究等领域被广泛应用。
综上所述，现代医学中的免疫学鉴定技术具有广泛的应用，可以用于人类疾病的预防、治疗和诊断。
虽然每种技术有着自身的优缺点，但是这些技术的发展和应用，将在未来几年中对人类的健康产生更为深远的影响。
简述间接elisa法的基本原理
简述间接elisa法的基本原理
间接酶联免疫吸附试验（indirect enzyme-linked immunosorbent assay，简称indirect ELISA）是一种常用的免疫学检测技术，广泛应用于医学、生物学、农业、环境等领域。
本文将简述间接ELISA法的基本原理。
基本原理
间接ELISA法是利用酶标记的二抗来检测样品中的特定抗原或抗体。
其基本原理如下：
1. 将要测定的抗原或抗体与特异性一抗结合，形成免疫复合物。
2. 将未结合的一抗洗脱，将酶标记的二抗加入，与免疫复合物结合。
3. 加入底物，使酶标记的二抗发生化学反应，生成可测量的产物。
4. 通过检测产物的光学密度，来确定样品中的特定抗原或抗体的浓度。
优点和缺点
间接ELISA法的优点是灵敏度高、特异性强、操作简单、成本低、适用范围广。
其缺点是需要进行多次洗涤，操作时间较长，对于复杂的样品矩阵，可能会产生假阳性或假阴性的结果。
应用领域
间接ELISA法广泛应用于血清学检测、病原体检测、免疫学研究、药物研发等领域。
例如，在临床应用中，间接ELISA法可以用于检测病毒、细菌、真菌等感染性疾病的诊断；在药物研发中，可以用于筛选药物的效力和剂量。
总之，间接ELISA法是一种简单、快捷、敏感、特异的免疫学检测技术，对于研究各种生物分子的表达、诊断疾病、药物研发等领域具有重要意义。
免疫学的应用领域及原理
免疫学的应用领域及原理1. 概述免疫学是研究生物体对抗外界病原体侵袭的科学，它在医学、生物工程、农业等领域都有重要的应用。
本文将介绍免疫学的应用领域及其原理。
2. 医学领域在医学领域，免疫学的应用主要是用于预防和治疗疾病。
以下是免疫学在医学中的一些应用：•疫苗：疫苗是通过引入抗原物质来引发免疫系统产生免疫应答的物质。
通过接种疫苗，可以预防多种疾病，如流感、水痘、麻疹等。
•免疫疗法：免疫疗法利用免疫系统来治疗疾病，例如采用抗体疗法治疗癌症、使用免疫调节剂治疗自身免疫性疾病等。
•自身免疫疾病诊断：免疫学的方法可以用来诊断自身免疫性疾病，如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等。
3. 生物工程领域在生物工程领域，免疫学的应用广泛用于生物制药、治疗和预防疾病等方面。
以下是免疫学在生物工程中的应用：•单克隆抗体制备：利用免疫学的原理，可以制备单克隆抗体，用于治疗疾病和检测目标物质。
单克隆抗体可以根据需要定制，并且具有高度特异性和亲和力。
•重组蛋白表达：通过免疫学技术，可以利用基因工程手段表达大量的重组蛋白。
这些重组蛋白可以应用于药物研发、工业生产和科研等领域。
•检测技术：免疫学的技术方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA）等，广泛应用于检测目标物质的存在和浓度。
4. 农业领域免疫学在农业领域也有重要应用，主要用于预防和控制农作物和动物疾病。
以下是免疫学在农业中的应用：•动物免疫：免疫学技术可以用于动物的免疫疾病预防和治疗，如家禽免疫和畜牧免疫等。
通过接种免疫疫苗，可以提高动物的免疫力，防止病原体侵害。
•农作物抗病性培育：通过免疫学技术，可以培育抗病性强的农作物品种，提高生产力。
这种方法是通过培育携带特定抗性基因的农作物品种，使其对病原体具有抵抗能力。
•疫苗接种：与人类疫苗类似，对于某些植物病害，也可以采用疫苗接种的方法进行预防和控制，增强植物的免疫系统功能。
5. 免疫学的原理免疫学的原理主要包括以下几个方面：•免疫系统：免疫系统是由一系列细胞、分子和器官组成的复杂网络。
免疫学检测方法
免疫学检测方法
免疫学检测方法是一种通过检测人体免疫系统对特定病原体的反应来诊断疾病的方法。
这种方法已经被广泛应用于临床诊断、药物研发和疫苗研究等领域。
根据不同的检测原理和技术手段，免疫学检测方法可以分为以下几类。
1. 免疫荧光法
免疫荧光法是一种通过检测特定抗原和抗体之间的结合来诊断疾病的方法。
这种方法利用荧光染料标记抗体或抗原，通过荧光显微镜观察样品中的荧光信号来确定是否存在特定的抗原或抗体。
免疫荧光法可以用于检测多种病原体，如细菌、病毒和真菌等。
2. 酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附法是一种通过检测特定抗原和抗体之间的结合来诊断疾病的方法。
这种方法利用酶标记抗体或抗原，通过检测酶的活性来确定是否存在特定的抗原或抗体。
酶联免疫吸附法可以用于检测多种病原体，如HIV、乙肝病毒和肺结核杆菌等。
3. 免疫印迹法
免疫印迹法是一种通过检测特定抗原和抗体之间的结合来诊断疾病的方法。
这种方法利用电泳将样品中的蛋白质分离出来，然后用抗体检
测特定的蛋白质。
免疫印迹法可以用于检测多种疾病，如癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病等。
4. 免疫电泳法
免疫电泳法是一种通过检测特定抗原和抗体之间的结合来诊断疾病的方法。
这种方法利用电泳将样品中的蛋白质分离出来，然后用抗体检测特定的蛋白质。
免疫电泳法可以用于检测多种疾病，如癌症、自身免疫性疾病和感染性疾病等。
总之，免疫学检测方法是一种非常重要的诊断工具，可以帮助医生快速准确地诊断疾病，为患者提供更好的治疗方案。
随着技术的不断发展，免疫学检测方法将会越来越成熟和完善，为人类健康事业做出更大的贡献。
免疫检测技术
基本步骤
原理
1
包被
洗涤
3 使结合在固相
上
的抗原抗体复 合物
2
反应
加入待测抗
体或
抗原和酶标 抗原
4
或抗体
底物显色
定性或定量的分 析
五种常见的检测方法
1 双抗夹心法（测定抗原） 2 测定抗体的间接法 3 竞争法（测定抗原） 4 捕获包被法测IgM抗体 5 ABS-ELISA法
1 双抗夹心法测抗原
适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗 原及低于二价的小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心
3.免疫电泳技术
免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。 这种技术有两大优点：一是加快了沉淀反应的速度， 二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分 开，再分别与抗体反应，以此作更细微的分析。
免疫电泳包括:血清免疫电泳、对流免疫电泳、 火箭电泳、免疫印迹等
血清免疫电泳
将抗原混合物（病人血清）在凝胶中用电泳 分离后，沿电泳方向挖一平行的小槽，加入 抗血清，进行双向扩散。沉淀线的特点显示 病人血清与正常人血清存在的差异，即血清 蛋白组分的缺少或增加。
2 间接法测抗体
几种标记/检测技术灵敏度的比较
灵敏度(mol/L)
10-18 10-15 10-12 10-9
酶标
荧光
放免
发光
几种标记/检测试剂的有效期比较
有效期（月）
18
15
12
9
6
3
酶标
荧光
放免
发光
人人民民币币
100,000 80,000 60,000 40,000 20,000 0
放免
三、补体结合实验 （2个系统，5种成分）
单分子免疫检测技术
单分子免疫检测技术摘要：单分子免疫检测技术是近年来免疫学研究的热点之一。
该技术采用单分子水平的检测技术，即通过检测单个免疫分子的信号，实现对生物分子的高灵敏度检测。
本文介绍了单分子免疫检测技术的原理、方法和应用，并探讨了该技术在生物医学研究中的前景。
关键词：单分子、免疫检测、高灵敏度、生物医学研究1. 简介单分子免疫检测技术作为当前生物医学研究的前沿技术，近年来备受关注。
该技术采用高灵敏度的免疫检测方法，能够在单分子水平对生物分子进行检测，有很大的潜力在生物医学领域得到广泛应用。
2. 原理在单分子免疫检测技术中，一般采用分子间距离的检测方法。
这种方法利用特定的荧光标记对目标物质进行标记，然后将标记后的物质压缩到纳米尺度的玻璃管中，实现单分子尺度的检测。
3. 方法（1）样品制备：将待测物质与免疫特异性分子结合，标记待测物质，制备标记物质浓度一定的样品。
（2）玻璃管制备：制备玻璃管并将标记过的待测物质注入玻璃管中，其中玻璃管的内径与样品分子尺寸相当，以便形成单分子水平的检测。
（3）荧光显微镜检测：利用荧光显微镜等高灵敏度的检测设备检测待测物质与特定分子识别物的相互作用，并将其转化成荧光信号。
4. 应用（1）疾病诊断：单分子免疫检测技术可以在高灵敏度下检测生物分子，例如病毒、癌症等生物标志物，有助于疾病的早期诊断。
（2）药物研发：单分子免疫检测技术可以在单分子水平对药物和生物分子之间的相互作用进行检测，有助于快速研发出更加高效的药物。
（3）生物学研究：单分子免疫检测技术在分子生物学、细胞生物学等领域中有着很广泛的应用，例如检测细胞内各种分子的运动、互作等。
5. 展望单分子免疫检测技术具有高灵敏度、高精度等显著优点，因此在生物医学研究中有着广泛的应用前景。
未来，该技术有望应用于更多领域，例如早期癌症筛查、药物研发等领域，同时还有望提高生物医学的研究水平和治疗效果。
随着近年来免疫学的不断发展，单分子免疫检测技术也得到了更多的研究和应用。
免疫学临床应用ppt课件
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等 ）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等
其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷 、 严重感染、 肿瘤
抗体为基础的免疫治疗
一、免疫血清
抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗 淋巴细胞丙种球蛋白等
二、单克隆抗体（mAb）：用于靶向治疗等。 三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A
有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者
1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法
③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
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如类风湿因子的测定等。
呈色反应 抗原抗体比例对反应现象的影响 缺点--非特异性荧光增加。 * 双抗体夹心法：用于检测抗原。 如类风湿因子的测定等。 可溶性抗原（血清蛋白、组织浸液等）与 用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标记抗体 其检测的敏感度可达pg-ng/ml水平。 如肥达氏反应。 藻红蛋白（PE），显红色。 C 酶联免疫斑点试验（ELISPOT） B 免疫组化技术—检测组织中或细胞表面的抗原。 5．免疫印迹法（Western blotting） 1．免疫荧光技术(Immunofluorescence Technique) 对抗原进行定性、定量、定位检测。 用于定量测抗原。 其方法是先电泳、后扩散。 颗粒性抗原（RBC、细菌等）与相应抗体
1．免疫荧光技术(Immunofluorescence Technique)
用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本的抗 原反应，，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出 荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。 （1）常用荧光素 异硫氰酸荧光素（FITC）， 显黄绿色。 免疫酶技术
主要用于定性检测抗原或抗体，抗原组成及两 种抗原相关性分析。
藻红蛋白（PE），显红色。 在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成免疫复合物。
免疫标记技术主要有三种基本类型： C 酶联免疫斑点试验（ELISPOT）
（2）方法 如ABO血型鉴定，细菌的鉴定、分型等。
（2）试管凝集试验：用于定量测抗体
*直接荧光法： 免疫学检测技术的基本原理
标记物质与抗体（或抗原）的化学连接未改变 可溶性抗原（血清蛋白、组织浸液等）与
用酶标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIA 将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性 相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。
免疫实验 免疫学及免疫检测技术试验
2、加于淋巴细胞分离液上层，离心：500g 20min
（小于1000rpm)
！沿管壁滴加
!淋巴细胞分离液取法
离心
单个核细胞 （斜面！）
3、吸出细胞，悬于营养缓冲液（1～2倍量含5IU/ml 肝素、2％灭活小牛血清的PBS液 ），离心：200g 10min，除去血小板。
4、洗涤：同样营养液洗涤2次，洗去淋巴细胞分离 液，离心： 500g 10min
免疫学实验
实验一、外周血单个核细胞的分离
单个核细胞： 一、基本原理 ?常用哪些方法分离细胞，免疫学可采用哪些方法 本实验是利用不同的细胞之间密度不同的性质，通过 速度沉降法来分离制备外周血中单个核细胞。 二、操作： 1、稀释血：1ml血+1ml缓冲液（含5～10IU/ml肝素的 PBS，无血清 ）（用滴管）
•荧光各孔：阴性对照：Ab-Ag-FITC-Ab，阳性对照用 200ng/ml，500ng/ml
37℃，1hr，洗涤液洗涤三次
3、加酶标抗体、荧光标记抗体：
•所有ELISA各孔均加100ul（已稀释好,稀释倍数：2000
•各荧光孔不加酶标抗体，加荧光标记抗体100ul,(已稀释 好，稀释倍数：50)
实验四、免疫荧光检测技术
一、基本原理：
荧光双抗夹心法定位与定量抗原
二、操作：
1、抗体包被：（同实验二） 2、加样本：同实验二，但在本实验中不做标准曲 线，样品加两个稀释浓度，如1：20，1：40，另外 加一个阳性对照（用人IgG标准），每孔做一个复 孔，加空白对照共计8孔。 3、加荧光抗体：从这里开始与实验二不同之处是 一定要记得避光操作。按照要求加入一定稀释度的 荧光标记抗人IgG抗体（一般为1：80倍左右），避 光37℃保温箱中保温30-45分钟。
常用免疫学检验检测技术
• 6、捕获法测IgM抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间 接ELISA一般仅适用于检测IgG抗体。如用酶标记的抗 人IgM作为二抗进行间接ELISA测定IgM抗体，标本中 同时存在的不同浓度的IgG抗体将与IgM抗体竞争，而 使结合在固相抗原上的IGM抗体相应减少。另外标本 中如含有类风湿因子、也会产生干扰。因此用一般的 间接法测定IgM抗体不能得到准确的结果。
• （二）酶联免疫电转移印斑法
• Burnette于1981年建立酶联免疫电转移印斑法 （enzyme linked immunolectrotransfer blot, EITB），并称之为西部印斑(Western blot). EITB分三个阶段进行。
第一阶段为SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳（SDSPAGE）。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷， 在聚丙烯酞胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量 越小，泳动速度越快。此阶段分离效果肉眼不可 见（只有在染色后才显出电泳区带）．
• （4）加底物显色。夹心式复合物中的酶催化底物 成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原 的定性或定量。
• 在临床检验中，此法适用于检测各种蛋白质等 大分子抗原，例如乙型肝炎病毒表面抗原 （HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）、促绒毛膜性腺 激素（HCG）等。双抗体夹心法只适用于二价或 二价以上较大分子抗原的检出和定量分析，而 不能用于半抗原等小分子的测定。
速率散射比浊法有三大特点： • 一、时间快，一般在30-60s之内就可完成测试； • 二、比较准确，因其测定形成速率，抗原多，
速率快； • 三、节省试剂。
• （三）粒子强化免疫浊度测定法
粒子强化免疫浊度测定法的基本原理是，选择 一种大小适中，均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗 体后，当遇到相应抗原时，则发生聚集，单个胶乳 颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个胶乳 颗粒凝聚时，则使透射光减少，这种减少的程度与 胶乳凝集成正比，当然也与抗原量成正比。
免疫pcr的原理和应用
免疫PCR的原理和应用1. 引言免疫PCR是一种结合了免疫学和聚合酶链式反应（PCR）的技术方法。
它通过将特定的抗原与待检测样本中的目标物进行结合，再利用PCR扩增和检测目标物，从而实现对待检测物质的高灵敏度和高特异性检测。
2. 原理免疫PCR的原理可以分为三个主要步骤：抗原结合、PCR扩增和目标物检测。
具体流程如下：2.1 抗原结合首先，将特异性的抗原与待检测样本中的目标物质进行结合。
这个过程类似于免疫学中的抗体结合原理，通过抗原与目标物质之间的特异性结合，实现对目标物质的富集和选择性识别。
2.2 PCR扩增在抗原结合的基础上，利用PCR技术对目标物质进行扩增。
PCR是一种体外扩增DNA片段的方法，通过不断循环加热、退火和延伸，使得目标DNA片段得以扩增。
在免疫PCR中，PCR扩增的关键是引入标记在目标物质上的引物。
2.3 目标物检测扩增完成后，可以通过多种方法对目标物进行检测。
其中，常用的方法包括凝胶电泳、荧光标记、放射性标记等。
这些检测方法既可以定性分析目标物质的存在与否，也可以定量分析目标物质的含量。
3. 应用免疫PCR在生物医学领域有着广泛的应用。
下面列举了部分常见的应用领域和例子：3.1 临床诊断免疫PCR可以用于临床诊断，例如检测病原微生物的存在，分析感染病人的免疫状态等。
例如，可以利用免疫PCR检测人类乳头状瘤病毒（HPV）的存在，辅助宫颈癌的诊断。
3.2 基因表达分析免疫PCR可以用于分析基因的表达情况，例如免疫PCR可以检测特定基因在不同组织中的表达水平，从而研究其功能和调控机制。
3.3 食品安全检测免疫PCR可以用于食品安全检测，例如检测食品中的致病菌、过敏原等有害成分。
免疫PCR的高灵敏度和高特异性使得食品检测更加准确和可靠。
3.4 毒物检测免疫PCR可以用于毒物检测，例如检测体内或环境中的重金属、农药等有害物质。
免疫PCR不仅能够提供快速可靠的检测结果，还可以追踪物质的来源和分布情况。
双抗原夹心法原理
双抗原夹心法原理
双抗原夹心法是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗
原或抗体的存在。
其原理是利用两种特异性抗体将待检测的抗原
“夹在中间”，通过检测两种抗体的结合情况来确定待检测物质的
存在与否。
下面将详细介绍双抗原夹心法的原理及其应用。
首先，双抗原夹心法的原理是基于特异性抗体与抗原的结合反应。
在实验中，首先需要一种特异性抗体，它能够与待检测的抗原
特异性结合。
其次，还需要另一种与第一种抗体结合的抗体，这种
抗体可以与标记物质结合，如酶、放射性同位素或荧光素。
这样，
当待检测的抗原存在时，第一种抗体与其结合，再加入第二种抗体，形成“夹心”结构，最终通过检测标记物质的活性来确定抗原的存在。
双抗原夹心法的应用非常广泛。
首先，在临床诊断中，双抗原
夹心法可用于检测某些特定疾病的标志物，如肿瘤标志物、病毒抗
原等。
其次，在生物学研究中，双抗原夹心法也常用于检测蛋白质
相互作用、细胞表面受体的表达等。
此外，在食品安全领域，双抗
原夹心法也被广泛应用于检测食品中的有害物质，如农药残留、重
金属等。
总之，双抗原夹心法作为一种重要的免疫学实验技术，其原理
简单清晰，应用范围广泛。
通过合理选择特异性抗体和标记物质，
可以实现对待检测物质的高灵敏度、高特异性检测，为临床诊断、
生物学研究和食品安全监测提供了有力的工具和支持。
希望通过本
文的介绍，读者能够更加深入地了解双抗原夹心法的原理及其应用，为相关领域的研究和实践提供帮助。
免疫学检测技术在食品安全中的应用
免疫学检测技术在食品安全中的应用杨明（甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070）食品安全问题在21世纪的今天已经成为全世界关注的重大问题，对国家的经济发展和消费者的身体健康产生了重大影响。
随着我国市场经济的的不断完善和发展，食品行业对外贸易与日剧增，食品的质量与安全问题已成为影响农业和食品工业产品竞争力的关键因素。
同时，由于我国人民生活已由温饱型食物结构转向营业健康型食物结构，全民食品营业卫生知识得到普及。
人民的饮食消费观念也由数量型转向质量型，对食品卫生质量标准的要求越练越高，这就对食品检测技术提出更高的要求。
由于食品种类丰富，食品中检测的有毒有害物质种类和组分繁多，需要检测的物质质量极低，样品中待检物的浓度常为μg、ng甚至pg级，除此之外，许多检测物除需检测物质本身，还涉及其衍生物和降解物测定。
区别同位异构体以及元素的价态等。
因此食品检测要求检测方法更加准确、快速、方便，也使得其他学科的先进技术不断应用于食品检测领域中来，由于新技术的引入，食品行业开发出了许多自动化程度和精确度很高的检测仪器，这不仅缩短了分析时间，减少了人力误差，也大大提高了食品分析检测的速度、灵敏度和准确度。
现代食品检测技术主要包括以下几个方面：①计算机视觉技术；②现代仪器分析技术；③食品物性的力学、声学和电学检测技术；④电子传感检测技术；⑤生物传感技术；⑥核酸探针检测技术；⑦PCR基因扩增技术；⑧免疫学检测技术。
免疫学检测技术是食品检测技术中的一个重要组成部分，特别是三大免疫技术——荧光免疫技术、酶免疫技术、放射免疫技术在食品检测中得到了广泛应用。
利用免疫学检测技术可检测细菌、病毒、真菌、各种毒素、寄生虫等，还可用于蛋白质、激素、其他生理活性物质、药物残留、抗生素等的检测，其检测方法简便、快速、灵敏度高、特异性强，特别是单克隆抗体的发展，使得免疫检测方法特异性更强，结果更准确。
免疫分析是抗原与抗体的特异性、可逆性结合为基础的分析技术。
免疫学检测技术的基本原理
免疫学检测技术的基本原理“哇，这免疫学检测技术到底是啥玩意儿啊？”我，一个对世界充满好奇的小学生，最近对免疫学检测技术产生了浓厚的兴趣。
咱先说说这免疫学检测技术的基本原理是啥吧。
就好像警察抓坏人一样，免疫学检测技术就是要找出身体里的“坏家伙”。
这里面有一些关键的部件呢！比如说抗体，它就像是勇敢的小卫士，专门去识别那些“坏家伙”。
还有抗原，这抗原呢，就像是那些“坏家伙”身上的标志，抗体一看到这个标志，就知道要去攻击谁了。
那这免疫学检测技术都有啥主要技术和工作原理呢？嘿嘿，这可有意思啦！有一种叫酶联免疫吸附测定法，简称ELISA。
这就好比一场大搜索行动。
先把可能有“坏家伙”的东西放在一个盘子里，然后加入特定的抗体。
如果有“坏家伙”，抗体就会和它们结合在一起。
接着再加入一些其他的东西，让它们发生反应，最后就能看出有没有“坏家伙”啦！还有一种叫免疫荧光技术，这就像在黑夜里用手电筒找东西。
给抗体加上一些会发光的东西，这样一旦抗体找到了“坏家伙”，就会发出亮光，我们就能看到啦！现在咱来说说这免疫学检测技术在日常生活中的应用场景吧。
有一天，我和爸爸妈妈一起去医院看望生病的奶奶。
医院里人来人往，医生和护士们都忙得不可开交。
我看到医生拿着一些小瓶子和纸片，在那里摆弄着。
我好奇地问：“爸爸，医生在干什么呀？”爸爸说：“医生在给奶奶做检查呢，用的就是免疫学检测技术。
”我又问：“这技术有啥用呀？”妈妈接过话茬说：“这技术可以帮助医生知道奶奶身体里有没有病毒或者细菌，这样就能对症下药，让奶奶快点好起来。
”我似懂非懂地点点头。
在医院里，我还看到其他病人也在做各种检查。
我心想，这免疫学检测技术可真厉害啊！就像超级英雄一样，能把那些让人生病的“坏家伙”给找出来。
要是没有它，医生们可就不好给病人治病了。
这免疫学检测技术不就像我们生活中的小侦探吗？它默默地守护着我们的健康，让我们能远离疾病的困扰。
我觉得这技术真的太神奇了！它让我明白了，科学的力量是无穷的。
免疫球蛋白技术的原理应用
免疫球蛋白技术的原理应用1. 什么是免疫球蛋白技术？免疫球蛋白技术是一种利用免疫学原理来检测、治疗疾病的技术。
它利用免疫系统产生的抗体的高特异性和高亲和力来实现对特定目标的检测和治疗。
2. 免疫球蛋白技术的原理免疫球蛋白技术的原理基于人体免疫系统的工作原理。
当人体受到外来抗原的侵袭时，免疫系统会产生特异性抗体来攻击和清除这些抗原。
抗体是一种由B细胞产生的蛋白质分子，它能够与抗原结合并形成抗原-抗体复合物。
免疫球蛋白技术利用这种抗原-抗体相互作用的原理，通过检测或利用特定抗体与特定抗原结合的能力来实现相关应用。
3. 免疫球蛋白技术的应用领域免疫球蛋白技术在许多领域都有广泛的应用，下面列举了几个常见的应用领域：•免疫诊断：免疫球蛋白技术可以用于检测和诊断各种疾病。
例如，ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫诊断方法，可以用于检测病毒、细菌、肿瘤标记物等。
•药物治疗：免疫球蛋白技术可以用于治疗许多疾病。
例如，单克隆抗体疗法通过使用单个特异性抗体来治疗癌症、自身免疫性疾病等。
•免疫疫苗：免疫球蛋白技术可以用于制备免疫疫苗。
例如，疫苗中可以含有特定抗原，刺激免疫系统产生相应的抗体来提供免疫保护。
•生物安全：免疫球蛋白技术可以用于生物安全领域，例如用于检测和识别生物恐怖袭击事件中的病原体。
•生物工程：免疫球蛋白技术可以用于生物工程领域，例如用于基因工程中的定点突变和抗原鉴定。
4. 免疫球蛋白技术的优势•高特异性：免疫球蛋白技术利用抗体的特异性识别能力，可以高度准确地检测和诊断特定目标。
•高亲和力：抗体与抗原结合的亲和力较高，具有较好的结合稳定性和检测灵敏性。
•多样性：人体可以产生数百万种不同的抗体，可以用于检测和治疗各种疾病。
•可定制化：通过改变抗体的结构或序列，可以制备特定的抗体来满足特定需求。
5. 免疫球蛋白技术的发展趋势免疫球蛋白技术在过去几十年中取得了重大的发展，未来还有更大的发展潜力。
以下是一些免疫球蛋白技术的发展趋势：•单克隆抗体疗法的发展：单克隆抗体疗法在癌症和其他疾病治疗中已取得了显著的成果，未来将进一步发展和应用。
免疫学检测技术
A. Wassermann
梅毒补体结合反应
1935
M. Heidelberger, F. Kendall
纯化抗体,定量沉淀反应
1941
A. Coons
免疫荧光标记
1946
J. Oudin
凝胶内沉淀反应
1948
O. Ouchterlony, S. Elek
双扩散沉淀反应
1953
P. Grabar, C. Williams
最适比（optimal ratio）：其中有一管反应最快，沉淀物形成最多，上清液中几乎无游离抗原或抗体存在，表明抗原与抗体浓度的比例最为合适。
带现象（zone phenomenon）：等价带前后分别为抗体或抗原过剩则无沉淀物形成。
前带（prezone）：抗体过量
后带（postzone）：抗原过剩。
抗原抗体比例对反应现象的影响
⑥免疫印迹法-Western blotting
一级抗体（第一抗体） 属识别系统，特异性识别来自样本的靶抗原。 常用单抗或多抗，实验前-20 ℃— -40℃保存（1-2年有效），应用液4℃约一周。一抗的使用浓度在不同实验中是不一样的，最佳用量需经预实验确定，一般选顶准阳性的稀释度。
抗原抗体反应被人为分为2阶段。
阶段性
当抗原与同型抗体相遇时，在合适条件下，不论彼此量的多少，都立即发生特异性的结合形成抗原抗体复合物，这一过程通常只需要几秒的时间便可完成，称为反应的一级阶段。 反应阶段：在一级阶段之后，继发出现抗原与抗体间进一步交联而形成网络状凝集物，进而出现可见的凝集和沉淀，称为反应的二级阶段。这一阶段是抗原抗体网格生长的阶段，速率要慢的多，且在很大程度上依赖于温度、离子强度等外界条件，但更重要的是需要合适的抗原抗体分子比例。只有当二者的结合价彼此饱和时，才能连接成一个大网格样凝集物，出现凝集或沉淀。
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流式细胞仪工作ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ理
酶免疫测定 (Enzyme Immunoassay, EIA)
用酶（常用辣根过氧化物酶，即HRP或碱 性磷酸酶，即ALP) 标记的抗体与相应抗原 反应。通过酶作用于底物后显色来判定结 果。
常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫 组化法，前者测定可溶性抗原或抗体， 后 者测定组织中或细胞表面的抗原。
酶联免疫吸附试验 (Enzyme Linked Immunosorbent
Assay, ELISA)
是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 （聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原 抗体反应在固相表面进行。用洗涤法将 液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹 心法、间接法等。
ELISA 检测抗体
放射免疫测定法 (Radioimmunoassay, RIA)
抗原抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 中和反应 用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应
凝集反应 (Agglutination)
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结 合、凝集的现象。
1、直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗 体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集 现象。又分为玻片法（定性试验）和试管 法（半定量试验）。
(1)抗凝 静脉血
(2)加等 量NS
(3) 混匀后，缓 慢加于分离液上
(4)密度梯度离心
血浆
PBMC 分离液 PMN RBC
T细胞功能测定
体外法：T细胞增殖试验 形态学检查 3H-TdR掺入法 MTT法
体内法：用生物抗原或化学抗原作皮内试验。 OT-PPD皮试
淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图
间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结 合，再用荧光素标记的二抗染色。优点 ：敏感性比直接法高，制备一种荧光素 标记的二抗可用于多种抗原的检测。
补体结合免疫荧光法：在间接法的第一 步抗原-抗体反应时加入补体，使之与抗 原-抗体复合物结合；再用荧光素标记的 抗C3抗体进行示踪。
间接免疫荧光法示意图
特点：需时较短，用于快速沉淀标本中 抗原含量的测定。
火箭电泳示意图
免疫标记技术
用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标 记抗体（或抗原）进行抗原-抗体反应。 能极大地提高了反应的灵敏度，可以对 微量物质进行定量、定性或定位检测。
三种基本类型：免疫荧光技术、免疫酶 技术和同位素标记技术。
免疫荧光显微技术 (Immunofluorescence
Technique)
将荧光素（异硫氰酸荧光素，FITC、藻红 蛋白，PE) 与抗体连接成荧光抗体，再与 待测标本的抗原反应，置荧光显微镜下观 察，抗原抗体复合物散发出荧光，对标本 中抗原的鉴定和定位。
包括直接荧光法、间接荧光法和补体法。
直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作 标本染色。优点：是特异性强。缺点： 每检测一种抗原必须制备相应的荧光抗 体。
用放射性核素标记抗原进行的免疫学检 测技术。放射性核素显示的高灵敏性， 使检测的敏感性达pg水平。
常用于标记的放射性核素有I125和I131。 常用于胰岛素、生长激素、药物等微量
物质的测定。
免疫印迹法（Immunoblotting）
将凝胶电泳与固相免疫测定结合，先把电 泳分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶 免疫、放射免疫等技术测定。
培养液
PHA
3H-TdR
淋巴细胞 离心
过滤
测量放射性 全血
分层液
细胞毒试验（51Cr释放法）示意图： （Na51CrO4标记靶细胞）
靶细胞
51Cr
洗涤
去除游离 的51Cr
效应细胞
测量上清液中 释放的51Cr
细胞毒试验（乳酸脱氢酶释放法）
正常情况下，乳酸脱氢酶（LDH）存在于 细胞内，细胞损伤时，细胞膜通透性增加， LDH释放，酶促显色反应。
特异性结合阶段；
可见的反应阶段。 是否呈现可见的反应现象，与抗原和抗体 两者的分子浓度和比例密切相关。
抗原抗体比例对反应现象的影响
抗原-抗体反应的影响因素
1.电解质：抗原-抗体反应通常应用 0.85%的氯化钠（适当浓度的电解质） 作为稀释液。
2.温度：反应常在37℃水浴或孵育箱中 进行。
3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度 为PH6-8。
酶联免疫斑点法 （Enzyme-Linked Immunospot,
ELISPOT) 在ELISA的基础上建立的检测抗体
生成细胞及细胞因子产生细胞的方法
。
加入淋巴细胞
抗原包被的反应板 加入酶标记二抗
加入底物
T细胞产生CK的检测
加入淋巴细胞 CK
CK抗体包被的反应板 加入酶标的CK抗体
加入底物
检测抗原特异性B细胞
免疫学检测技术的基本 原理及其应用
2020年4月25日星期六
提要
免疫学检测技术主要应用： 对多种免疫性疾病的诊断、疗效评估、发
病机制探讨; 对抗原性物质、免疫细胞、细胞因子、粘
附分子或细胞受体等的定性、定量检测。
第一节 抗原或抗体的检测
抗原-抗体反应包括： 沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结
凝集反应 (Agglutination)
2、间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞 或乳胶颗粒表面，形成致敏颗粒，与相应 抗体反应出现的颗粒凝集现象。
血球凝集
沉淀反应 （Precipitation)
• 血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可 溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，称 为沉淀反应。
沉淀反应 （Precipitation)
• 常用于抗原或抗体的定性 、组成和两种抗原相关性 分析的检测。
勇于开始，才能找到成 功的路
免疫电泳 （Immunoelectrophoresis)
• 将待测血清标本作琼脂 凝胶电泳，不同分子量 蛋白组分开，然后与电 泳方向平行挖一小槽， 加入相应的抗血清，与 不同区带的蛋白抗原作 双向免疫扩散，在各区 带相应的位置形成沉淀 弧。
勇于开始，才能找到成 功的路
• 常用于测定血清IgG、
IgM、IgA 和 C 3等的含 量。
双向免疫扩散 （Double Immunodiffusion)
• 将抗原与抗体分别加入琼 脂凝胶的小孔中，二者自 由扩散并相遇，在比例合 适处形成沉淀线。
• 含两种以上的抗原抗体系 统，可出现两条以上的沉 淀线。
MTT(四甲基偶氮唑盐）法
原理： 在细胞培养终止前数小时加入MTT，活
细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶分解MTT产生 紫褐色甲攒（Formazan)沉积于细胞内或 细胞周围，形成甲攒的量与细胞增殖程度成 正相关。
能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分 子量。常用于检测多种病毒（如HIV） 的 抗体或抗原。
免疫印迹法示意图
第三节 免疫细胞的检测
检测各种淋巴细胞的数量与功能是观察 机体免疫状态的重要手段。
外周血是病人主要的检测标本，但仅代 表再循环的淋巴细胞。
实验动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作 为标本进行检查。
合反应、中和反应等。 抗原-抗体反应可用已知的特异性抗体检测
未知的抗原；也可用已知的抗原检测未知的 抗体。
第一节 抗原或抗体的检测
免疫标记技术包括： 免疫酶技术、免疫荧光技术、同位素标
记技术、化学发光免疫技术、免疫胶体金 技术等。
抗原-抗体反应的特点：P226
抗原-抗体的特异性结合。 抗原抗体分子表面的非共价键结合。 反应的两个阶段：
• 常用于血清蛋白种类分 析。
勇于开始，才能找到成 功的路
火箭电泳 （Rocket Electrophoresis)
也称免疫扩散，是把单向免疫扩散同电 泳结合在一起的方法。抗原在含有定量抗体 的琼脂中泳动，两者比例适宜时，在较短时 间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围内 ，沉淀峰的高度与抗原含量成正比。
• 沉淀反应可在液体中进行，如絮状沉淀 。
• 大多数沉淀反应是用半固体琼脂凝胶为 介质，进行琼脂扩散故也称免疫扩散。
单向免疫扩散 (Single Immunodiffusion)
• 将一定量已知抗体混于琼 含抗体的凝胶 脂凝胶中制琼脂板；打孔 ，将抗原加入孔中扩散。
沉淀环
• 抗原与抗体相遇，形成沉 淀环，环的直径与抗原含 量成正比。
免疫荧光显微技术
流式细胞术
（Flow Cytometry, FCM)
FCM是将免疫荧光技术应用于流式细胞 仪，对单个细胞的表面标志（抗原或受体） 进行快速、精确的分析和自动检测，并将不 同类型的细胞分选收集。
FCM还可对同一细胞的多种参数（如 DNA、RNA、蛋白质和细胞体积等）进行多 信息分析。
淋巴细胞转化试验（形态学示意图）
原理： T细胞表面有PHA或ConA受体，T细胞在体外
受PHA或ConA的刺激后能转化为体积较大、代 谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定T细 胞的功能。
PHA刺激
48~72小时
淋巴细胞增殖—3H-TdR掺入法
原理： 将单个核细胞中加入PHA共同培养，在
终止培养前8-15小时加入氚标记的胸腺嘧 啶核苷（3H-TdR), 经β-液体闪烁仪检测淋 巴细胞DNA的3H-TdR掺入量，推测淋巴 细胞增殖的程度。