多聚赖氨酸的配置

多聚赖氨酸的配置、保存、使用

一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。

二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap

三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ml，过滤后使用。工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。

多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。

四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用 PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。

答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟

五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？

答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。

另外，有本书上是这么写的，供参考：

Poly-lysine-coated tissue culture surfaces

To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml wat er (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific pr otocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then i ncubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry.

To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 m g poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working so lution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuu m aspiration and allow surface to dry.

Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unuse d diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.

你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。玻片也是事先泡洗洁精，泡酸，双蒸水洗，烘干后高压灭菌，待用。培养的前一天包被培养板时先把玻片放入培养孔然后把PLL加到玻片上，静置15分钟，洗出多余的PLL，然后用高压过的双蒸水洗板，培养板放入37度烘箱里过夜就可以用了。

六、多聚赖氨酸消毒该怎么办？？

答：紫外照射消毒我没试过，但用0.22um的滤器消毒是没问题的（小的一次性滤器可以过滤200ml)。在液体消毒时，如果所含成份经过高温，钴60照射发生变性者，建议用滤器（0.22），多聚赖氨酸为氨基酸类，建议用滤器，如果要求程度高，可以两个滤器过滤两次。

七、资料：多聚赖氨酸溶液（Poly-L-Lysine Solution）Conc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26℃Thimerosal, 0.01%, added as preservative 多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。

适用组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等使用的玻片的防脱片处

理，以防实验操作过程中组织掉片。也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。

八、使用说明

操作步骤（可直接在玻片上涂布）

1.灭菌的ddH2O 1:10稀释该多聚赖氨酸溶液。

2.用之前将稀释的多聚赖氨酸溶液放在室内，使其温度到室温18-26℃

3.将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液5分钟。注意增加时间不会提高包被效果。

4.在60℃烘箱1小时干燥，或室温18-26℃过夜干燥待用。

九、注意事项

1.每100mL已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片40-90张，超过90张片子将影响其黏合力。

2.用之前的玻片必须保持清洁。必要时用含1% HCl的70%乙醇溶液来清洗。

3.不要在用过的稀释液中加新的溶液。

4.释过的多聚赖氨酸溶液要放在2-8℃，至少在3个月内是稳定的。

5.用过的稀释液要过滤，若出现浑浊或长菌要丢弃。

十、将0.5%多聚赖氨酸溶液加入细胞培养皿中，浸泡5-10分钟并自然晾干待用即可。

十一、多聚赖氨酸(poly-l-lysine)：常用包被培养皿的基质之一.。

1. 配制硼酸缓冲液（PH8.4）

A液：硼砂溶液－－1.907g溶于100ml三蒸水（0.05M）

B液：硼酸溶液－－1.237g溶于100ml三蒸水（0.2M）

4.5mlA液＋

5.5mlB液＝硼酸缓冲液（PH8.4）

2. 多聚赖氨酸5mg溶于50ml硼酸缓冲液中，配成100μg/ml的多聚赖氨酸溶液。过滤除菌，－20度保存。

3. 使用时4倍稀释，可以重复使用3次！

十二、听说一般买来的多聚赖氨酸都是用了做免疫组化时用的，一般都加了防腐剂，不利于细胞培养。所以我以前都是自制鼠尾胶原。请教midas主任，不知道这种说法是否正确？

答:我不知道别的地方PLL的来源，不过我们这里是sigma的粉剂，而且注明是for cell culture。

如果多聚赖氨酸中有防腐剂那么肯定不适合细胞培养！

十三、一些参考书上有的用三蒸水，有的用PBS配置，这与你说的很有出入，是不是三种配法都可以？不知道那一种更合理些？

答：其实都可以，不过这是推荐的方法！（用硼酸缓冲液）

十四、主任，按照您的配方，多聚赖氨酸的使用浓度应该是0.025mg/ml，目前我们实验室的使用浓度是0.1mg/ml，这个浓度来源于上海脑所．我想请问一下，我们用的浓度是否偏高，我培养的是大鼠星形胶质细胞，如果用您推荐的浓度，细胞是否容易贴壁．谢谢！

答：有些文献上也是用的0.1mg/ml，但是我们在实际工作中用0.025mg/ml是完全可以的。方法是至少包被4h以上，过夜也可以（可重复用3次）！之后无菌水清洗，晾干后即可使用。

用于配养细胞的多聚赖氨酸分子量要求>70,000，一般常见的分子量有70,000～150,000，150,000～300,000和>300,000，分子量越大，黏附力越强，但相对完全溶解较困难，所以我推荐使用150,000～300,000比较好。

多聚赖氨酸的工作浓度各家文献报道相差很大，从0.25 mg/ml到0.01mg/ml都有，因为多聚赖氨酸对细胞有毒性，所以在保证贴附的前提下，浓度越低越好，还省钱。我现在用的是0.01mg/ml。

多聚赖氨酸的配制浓度在各个书上不一，我也在做原位杂交，浓度是0.01mg/ml比较好吧

十五、请问多聚赖氨酸（150000——300000）如何配置？保存？工作浓度？