实验基础知识基本技能培训课件

1) 温度控制系统
• 冰箱/柜的使用：
门（随手关，关严） 电源（防止不小心关闭）
• 微波炉：
要用微波炉专用容器（不能加热金属、密封物）； 不要让微波炉空转； 微波炉工作时❖不要将眼睛紧靠微波炉5厘米之内去观看微 波炉工作-眼睛对微波最敏感，以免受到不必要的伤害； 防灼伤！不要徒手拿容器、不要把容器口冲着人！
计量系统
•⑶液体体积度量仪器：常用的有各种量筒、移液 管、容量瓶、移液器。
计量系统
• ⑷ 液体溶质定量仪器：主要有紫外分光光度 计和可见分光光度计等。
离心设备
•实验用离心机分为制备性离心机和分析性离心机。 •制备性离心机主要用于分离各种生物材料。 •离心方法是分离和制备生物大分子最常用的手段。 •制备性离心机可分为三类:低速、高速（冷冻）、 超速离心机。
低温操作可以用制冰机制冰块降温；
对于需在较高温度下进行的操作，则可
使用烘箱、微波炉、恒温水浴锅、恒温 空气摇床等。
实验用水处理系统
实验用水 • 一次蒸馏水：水经过一次蒸馏，不挥发的组分残 留在容器中被除去，挥发的组分（氨、二氧化碳、有 机物）进入蒸馏水的初始馏分中，通常只收集馏分的 中间部分，约占60％。 • 多次蒸馏水：在一次蒸馏水中加入碱性高锰酸钾 溶液，除去有机物和二氧化碳；加入非挥发性的酸 （硫酸或磷酸），使氨成为不挥发的铵盐。 • 无（去）离子水：指除去了呈离子形式杂质后的 纯水。主要指采用离子交换树脂处理方法，应用离子 交换树脂去除水中的阴离子和阳离子，但水中仍然存 在可溶性的有机物。
实验用水处理系统
实验用水 • 超纯水：既将水中的导电介质几乎完全去除，又将 水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程 度的水。
超纯水中除了水分子(H20)外，几乎没有什么杂质。 ❖ 各种用水，在贮存中都会被污染：
塑料容器会产生有紫外吸收的有机物； 玻璃和金属容器会产生金属离子的污染； 长时间放置更会使水长菌，空气中CO2会溶入水中。 所以贮存一定要隔绝空气，密封盖严，必要时贮存 在冰箱的冷藏室中；最好使用“新鲜的水”。
• 注意：1、液氮罐只用于盛装液氮，不允许盛装其他液体；
•
2、严防冲击和碰撞；
•
3、操作及取放冷冻物品时，请注意要轻拿轻放；
•
4、长期贮存时，需要定期补充液氮。
1) 温度控制系统
• 烘箱的使用：
不允许整夜使用！
• 是利用电热丝隔层加热使物体干燥的设备。
• 适用于比室温度高5~300℃（有的高200℃）范围的烘培、 干燥、热处理等，灵敏度通常为±1℃。
其它设备
•H.基因导入仪：用于向受体生物细胞中导入基 因。常用的导入仪有：电导入仪、基因枪、激 光和超声导入仪、原生质体融合仪等。 •I.高效液相色谱仪和毛细管电泳仪：用于各种 生物大分子的分析与鉴定。
第二节 分子生物学基本技术
分子生物学基本技术
---使用方法及注意事项
• 1) 温度控制系统 • 2) 实验用水处理系统 • 3) 消毒系统 • 4) 计量系统 • 5) 离心设备 • 6) 电泳装置 • 7) 凝胶成像系统
1) 温度控制系统
• 恒温水浴锅、恒温空气摇床：
根据需要设置温度； 恒温水浴锅中要保持足够的水量。
分子生物学基本技术
防污染
• 1) 温度控制系统 • 2) 实验用水处理系统 • 3) 消毒系统 • 4) 计量系统 • 5) 离心设备 • 6) 电泳装置 • 7) 凝胶成像系统
3) 消毒系统
高压灭菌锅
法擦拭冲洗干净。 • 严格区分开污染区和洁净区。
污染区：戴手套操作。 洁净区：徒手操作。
实验要求
• 1) 详细记录和分析实验结果，并按时提交 实验报告；
• 2) 实验中一定要处处用心、勤动手，多问 为什么；
• 3) 仔细操作和观察； • 4) 保留好每一步的实验样品，在确准的情
况下才能当废液扔掉。
实验规程
2) 饮食规定 • 禁止在实验室吃喝食物且使用化学药品后
需先洗净双手方能进食。 • 严禁在实验室内吃口香糖。 • 禁止使用实验室仪器冷藏/加热食物。
实验规程
3) 药品操作相关规定： • 操作危险性药品请务必遵守操作守则或遵
照老师操作流程进行实验，勿自行更换实 验流程。 • 识记清楚药品危害性，避免危害发生。
持到规定时间（根据物品性质以及有关情况确定,一般20 min～30 min）; • 5] 灭菌结束后,要待压力恢复到零位后开盖取物。 • ❖对液体进行灭菌，容器不能密封、体积不能超过容积的2/3； 灭菌结束后不能打开排气阀（尤其是上排气阀）。
分子生物学基本技术
• 1) 温度控制系统 • 2) 实验用水处理系统 • 3) 消毒系统 • 4) 计量系统 • 5) 离心设备 • 6) 电泳装置 • 7) 凝胶成像系统
1) 温度控制系统
• 液氮罐（液氮生物容器 ）保的持使容器用夹：层真空的关键部件，
• 液氮是一种超低温液体(-196用℃户)，不如得溅擅到自皮打肤开上容会器引真起空类封 似烧伤一样的冻伤，在灌充和取出液氮时口应接特头别注意。
• 液氮罐主要结构：内胆、真空夹层（容器真空封口接头）、 外壳、颈管、专用罐盖。
• 基本结构一般由箱体、电热系统和自动控温系统三部分组成。
• 注意：1、每次使用前要根据烘干物品要求确定合适的温度；
•
2、物品不能排列太密，以免影响热气流动、散热；
•
3、保证鼓风机正常运转；
•
4、需要观察工作室内样品情况时，可透过玻璃门观察。
但箱门以少开为好，以免影响恒温。特别是200℃以上时，开
箱门可能使玻璃门骤冷而破裂。
生物培养设施
•
超净工作台
•
恒温培养箱
蛋白质检测设备
• 蛋白电泳槽和转印槽-用于western-blotting实验
Hale Waihona Puke Baidu
蛋白质检测设备
• 酶标仪-用于ELISA （酶联免疫吸附实验）实验。
其它设备
• 实验室除以上常规设备和设施外，还必须装 备下列一些常用设备： •A.通风柜：用于有害和有毒气体的操作。 •B.组织打碎机和匀浆器：用于各种生物材料、动 植物组织和细胞的破碎。（研钵） •C. 超声清洗机：用于各种器皿、移液管和自动取 液器吸头的清洗和高效液相色谱仪所用流动相的脱 气等。
ul，100-1000 ul，500-5000 ul。 单道可调移液器、多道可调移液器、
电子调节/显示移液器。 Tip头/吸头/枪头：10 ul（白），200 ul（黄），
实验一 实验基础知识/基本技能培训
实验基础知识/基本技能培训
实验目的
• 谨记实验室规程 • 认识分子生物学实验的主要仪器设备 • 掌握分子生物学实验仪器设备基本技能
目录
前言：分子生物学实验规程 第一节：分子生物学实验设备 第二节：分子生物学基本技术 第三节：实验安排
前言
分子生物学实验规程
实验规程
品放于称盘中心，需轻拿轻放，不要冲击称盘。
• 5] 严禁有腐蚀性的称物直接接触称盘与天平面板。 • 6] 使用完毕后，要清理称盘、面板，保持仪器清洁。
4) 计量系统-体积
• 依称量需要选择合适的器皿-各种量筒、移液管、容量瓶。 • 移液器： 量程包括：0.1-2.5 ul，0.5-10 ul，10-100 ul，20-200
紫外分析仪
• 用于检测许多主要生物大分子物质如蛋 白质、核苷酸等。
PCR仪
• PCR(Polymerase Chain Reaction)是指聚合 酶链式反应。其反应是用DNA聚合酶在体外大量扩 增DNA片段的一种方法。 • PCR仪就是将此方法实现了自动化操作的一 种仪器，是分子生物学实验常用和必备的设备。 • PCR仪包括普通PCR仪、梯度PCR仪、荧光定 量PCR仪。
电泳装置
• 电泳是生化实验中最常用最重要的实验技术 之一，主要用于分析、鉴定，也可用于制备。 • 电泳装置由电泳仪和电泳槽两部分组成。 • 电泳仪：电泳时提供一定的电压和电流 • 电泳槽：凝胶电泳系统的核心部分，根据电 泳的原理，凝胶都是放在两个缓冲腔之间，电场 通过凝胶连接两个缓冲腔。
电泳装置
• 1] 在主体腔内加入适量的清水，将灭菌物品放入灭菌器内； • 2] 盖好（注意密封胶圈）顶盖后必须拧紧顶盖； • 3] 打开灭菌器的热源，开启排气阀排完空气后（约在水沸腾
后10 min～15 min ）关闭排气阀； • 4] 将压力升至102.9 kPa(1.05 kg/㎡),温度要求达121℃,维
实验规程
4) 用电安全相关规定：
• 按照规定（电压、功率）合理用电。
• 手上有水或潮湿请勿接触电器用品或电器设备。
• 掌握主要仪器、设备的性能和操作方法，严格按
操作规程操作。
•
如：擦拭、维修过程中要关闭电源
• 最后离开实验室务必随手将不用的水、电等开关 关闭。
实验规程
5) 环境卫生相关规定： • 注重环境卫生，并须保持整洁。 • 化学物溢满地面或工作台时应立即选用合适的方
• 电泳槽：核酸或蛋白质的电泳定性/定量分析 时的凝胶支架。 • 电泳槽又分为水平电泳槽和垂直电泳槽。
凝胶成像系统
• 是分子生物学实验中的重要观测仪器，几乎全 部的实验结果都需要经由凝胶成像系统来观察。 • 可用于观察分析各种透明或不透明的电泳图像， 包括琼脂糖凝胶电泳检测DNA结果的观察、PCR产物 的检测观察，垂直板凝胶电泳检测基因多态性的银 染胶、蛋白胶、斑点印迹（RNA/蛋白质检测）结果 的观察等。
其它设备
•D.冰冻干燥机：用于生物大分子水溶液的冰冻干燥， 可由其水溶液直接制得固体干粉。 •E.机械和水环式真空泵：用于旋转蒸发器和各种真 空抽气操作。 •F.冷室: 4℃-10℃的冷室，工作人员可以在其中进 行各种柱层析、各种电泳、生物大分子的提取和分离、 透析等操作，并可以贮存各种生物制品和生化试剂。 •G.暗室:主要用于一些避光的实验，如显影。
实验用水处理系统
分子生物学实验用水 普通蒸馏水、二次蒸馏水、无/去离子水、超纯水。
消毒系统
• 常用的灭菌方法：高温、高压灭菌、紫外线 照射、火焰焚烧、过滤除菌、酒精等试剂浸泡消 毒等，因此实验室必须配备各种无菌处理设备。 • 常用的灭菌仪器设备：高压灭菌锅、紫外灯、 酒精灯、滤膜等。
计量系统
• 常用的定量系统有：称量系统、液体体积度 量系统、pH测定系统、液体溶质定量系统等。 • ⑴ 称量仪器：最常用的是电子天平。 • ⑵ 酸碱度pH测量仪器：最常用的是pH试纸和 pH计。
• 严格遵守生命科学中心制定的安全规则。 • 发现实验室/楼内任何地方有危害安全之人、事、
物等，必须立即向有关人员反映并作紧急处理。
1) 穿着规定 • 必须按规定穿戴工作服。 • 进行危害物质、挥发性有机溶机、特定化学物质
等化学药品操作实验，必须要穿戴防护具（防护 口罩、防护手套、防护眼镜）。
• 长发及松散衣服妥善固定。
4) 计量系统-质量
电子天平
• 对环境高度敏感的精密电子测量仪器, 使用时应小心操作, 台 面应无明显振动, 不要放在空调口。
注意：1] 调整底角螺丝使水平指示器的气泡居中。 2] 使用精密电子天平前最好热机15~20分钟，以确保正
确读取电子天平的数值。
• 3] 称量物品前先按（归零）键；称样时关上天平小门。 • 4] 称物品时，勿超过精密电子天平的最大称量，且需将物
第一节 分子生物学实验设备
分子生物学实验设备
• 1) 温度控制系统 • 2) 实验用水处理系统 • 3) 消毒系统 • 4) 计量系统 • 5) 离心设备 • 6) 电泳装置 • 7) 凝胶成像系统 • 8) PCR仪 • 9) 生物培养设施 • 10) 蛋白质检测设备 • 11) 其他设备
温度控制系统
环境温控：大部分的分子生物学实验都要求在
一定的温度下进行操作，为了保持这些条件药，品实、验试剂、
室应装备空调等。
样品等的取放
药品、试剂、样品等的保存：不同药品、试剂、
样品要求在不同的温度下保存，实验室必须备有4℃、
－20℃、－80℃的冰柜/箱，需要在更低温度下保存
的样品，则须使用液氮罐。
温度控制系统
1) 温度控制系统
• 制冰机的使用：（水-进水、排水；电）
• 1．不论何种原因停机时，不得连续启动，要每隔5分钟 再启动，以免损坏压缩机！
• 2．定时检查进、出水管接头，以便处理可能泄露的少量 余水！
• 3．不用时，应排掉内胆内余水，用干净的布擦干储冰箱 内胆！
• 5．在对制冰机进行清洁、检查及一周以上不用时，请拔 掉电源插头。