植物组织GUS染色方法
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GUS染色
试剂配制
1. 50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）：
A液：称取NaH2PO4●2H2O 3.12g溶于无菌蒸馏水，定容100ml；
B液：称取Na2HPO4●12H2O 7.17g溶于无菌蒸馏水，定容100ml；
取39ml A液与61ml B液混合。
2．染色液：50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）中含有：0.1 mol/L K3[Fe(CN)6]，0.1 mol/L K4[Fe(CN)6]，10mmol/L Na2EDTA，0.001%（v/v）Triton-X100，20%甲醇，0.5mg/ml X-Gluc。
3．一般固定液：1%甲醛，50mmol/L磷酸钠缓冲液，0.05% Triton X-100（或Tween-20）。
4．FAA固定脱色液：5%甲醛，5%乙酸，5%乙醇。
染色
直接染色法
1．将准备好的试材浸泡在染液中，于25~37℃保温1h至过夜。
2．叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2~3次，至阴性对照材料呈白色。
3．肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。
固定染色法
1．将材料浸入固定液，必要时刻抽真空1min，室温下轻摇30~60min。
2．取出材料，用磷酸钠缓冲液漂洗3~4次。
3．将材料放入无菌离心管中，加入染色液，浸没材料，盖上盖子，于37℃水浴中保温几分钟至过夜。
4．取出材料，用75%的乙醇漂洗，或放入FAA固定液中20min。
5．先后用20%乙醇，50%乙醇个浸泡20min以上。
6．显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。
7．染色后的材料可浸入含80%乙醇的FAA固定液中保存。