植物组织切片染色步骤(修改)
组织切片技术铁苏木精染色
组织切片技术铁苏木精染色Weigert铁苏木精染色法试剂：Weigert铁苏木精染液A液：1%苏木精（95%酒精）溶液：苏木精1克，95%酒精100毫升B液：29%三氯化铁水溶液4毫升，盐酸（25%）1毫升，蒸馏水95毫升（氯化铁1.16克溶于蒸馏水98毫升，加盐酸1毫升）用时将两液混合。
只能用几天。
方法：⑴切片脱蜡，经各级酒精至水。
⑵Weigert铁苏木精液染色数分钟。
⑶流水洗，染色适当则不分化；过染，用0.1%盐酸70%酒精溶液分色，流水充分洗涤。
结果：细胞核蓝色。
Heidenhain铁苏木精染色法⑴石蜡切片（3~6微米）脱蜡至水。
⑵入2.5%铁明矾水溶液媒染2~12小时，蒸馏水洗。
⑶Heidenhain苏木精染色4~36小时，蒸馏水洗，Heidenhain苏木精染液：苏木精0.5克溶于无水酒精10毫升，加蒸馏水90毫升，静置4~6周成熟。
用时加一倍蒸馏水稀释。
新配苏木精加碘酸钠0.1克氧化成熟。
⑷2.5%铁明矾水溶液分色。
⑸自来水洗15~60分钟，蒸馏水洗数次。
⑹各级酒精上行脱水，二甲苯透明，树胶封固。
结果：线粒体、中心体、染色体呈深蓝色至蓝黑色。
Heidenhain铁苏木精染色简化法（Sher ，1969)方法：⑴切片脱蜡至水。
⑵入0.2%铁明矾水溶液1小时。
⑶流水洗10~20分钟。
⑷入0.2%自然成熟的苏木精染色1小时。
⑸流水洗3~5分钟。
⑹入0.1N盐酸水溶液分化至细胞核清晰。
⑺流水充分洗涤或用Tris 缓冲液（pH9)洗3~5分钟。
⑻也可用1%光绿或伊红复染。
⑼酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。
结果：细胞核蓝黑色，细胞质绿色或粉红色。
Heidenhain铁明矾苏木精染色法（骨骼肌横纹）试剂：①苏木精染液：苏木精0.5克完全溶于无水酒精10毫升，再加蒸馏水90毫升，一个月后使用②媒染液：5％铁明矾水溶液③分化液：5%铁明矾水溶液铁明矾（透明、淡紫色结晶）5克，蒸馏水100毫升方法：⑴组织固定于Zenker、Helly、甲醛升汞液、10%甲醛液、Bouin 液等，石蜡包埋，切片厚度不超过6微米。
植物细胞学分析之组织切片技术
植物细胞学分析之组织切片技术一、试剂（1）卡诺氏固定液：无水乙醇与冰醋酸按体积比为3:1混合配制。
（2）1mol／L盐酸溶液：取浓盐酸（比重1.19）82.5ml，加入蒸馏水917.5ml。
（3）醋酸洋红染液：4-5g洋红，冰醋酸45ml，蒸馏水55ml，先将冰醋酸加入蒸馏水中煮沸，然后将火移去，立刻加入洋红，用玻璃棒搅匀溶化，冷却后过滤即成。
（4）70%酒精；95%酒精。
二、细胞分析方法1．有丝分裂全过程的染色体制片方法步骤：取材-预处理-固定-根尖解离1mol/L HCL-醋酸洋红染色-压片（1）发根挑选每份黑麦种子材料25粒，经流水冲洗，放于培养皿内温水浸泡24h。
置于25℃恒温箱中发根。
待根长到1～2cm时，于适宜时间用蒸馏水洗净，将水吸干，剪取根尖0.5～1cm进行预处理。
为获得尽可能多的分裂相，根尖以上午9～10时剪取为宜。
（2）预处理为了有利于有丝分裂中，染色体的观察和计数，通常要对材料进行不同的预处理。
预处理主要通过抑制和破坏纺锤丝的形成，来获得更多的中期分裂相，同时还可以改变细胞质的粘度，促使染色体缩短和分散，便于压片和观察。
将根尖浸于蒸馏水内，1-4℃低温处理24h。
（3）固定材料经预处理后，用流水冲洗2次，然后投入卡诺液（3份甲醇∶1份冰乙酸）中固定26h，用95％的乙醇洗两次，转入70％乙醇中保存备用（4℃）。
固定的目的是：①迅速防止细胞死亡后的变化，如自溶、腐败等，尽量保持生长状态结构。
②使细胞中的蛋白质、脂肪等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。
③使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定。
④使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色。
⑤防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
（4）解离常用酸解法：从70％乙醇中取出固定好的根尖，用蒸馏水冲洗后，吸水纸吸干，放入盛有1 mol/L的HCl的1.5ml离心管中，60℃水浴，恒温条件下解离10min。
植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，这一操作称为解离。
植物组织石蜡切片制作
植物组织石蜡切片的制作一、实验目的1．熟练掌握石蜡切片的方法。
2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。
3．学会植物内部结构的比较研究方法。
二、实验器具与试剂1．器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
2．试剂10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
三、实验材料幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。
四、实验内容与方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。
它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出很薄的切片。
凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。
全都过程如下：1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒精 2．封埋 6．切片7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封（一）固定1．固定的意义：固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能保持原来的结构以供我们观察。
良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。
2．固定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为：(1) 简单固定液：以一种化学药品配制的固定液。
常用的简单固定液有：A．酒精即乙醇，用作固定液，常用纯酒精或95％酒精。
酒精穿透力强，固定时间常在1小时以内。
高浓度酒精有使材料收缩的作用。
70％的酒精可作保存液。
配制低度酒精必需要用普通酒精即95％的酒精，绝不可用纯酒精。
酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。
酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解脂肪及拟脂。
B．福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色透明液体。
固定用的浓度为4-10％甲醛也是强还原剂。
不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。
经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩，但随后经过他种药剂处理时，就每每出现皱缩。
切片染色实验步骤
1.1 石蜡组织切片
1) 室温下用二甲苯浸泡石蜡组织切片2次，每次5 min，以彻底脱掉石蜡。
注：二甲苯有毒，易挥发，请在通风橱中进行此操作。
2) 室温下用梯度乙醇(100%、90%、80%、70%)各浸泡润洗1次，每次3 min。
3) PBS 浸润清洗切片两次，每次5min。
4) 按1:100的比例，将2 mg/ml的Proteinase K溶液用1 ×PBS稀释，使其终浓度为20 µg/ml。
每个样本上滴加100 µl稀释好的Proteinase K溶液，使溶液覆盖全部样本区域，室温孵育20 min。
（Proteinase K 的孵育时间、温度需根据不同类型组织样本进行优化）。
5) PBS 浸润清洗切片两次，每次5 min，用滤纸吸去多余的液体。
1.2 冰冻组织切片
1) 将冰冻切片放置于室温的片架上，室温20 min，晾干。
2) 将载玻片浸没在4%多聚甲醛溶液（in PBS）中，室温固定30 min。
3) PBS 浸润清洗切片两次，每次5min。
4) 用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。
5) 按1:100的比例，将2 mg/ml的Proteinase K溶液用1 ×PBS稀释，使其终浓度为20 µg/ml。
每个样本上滴加100 µl稀释好的Proteinase K溶液，使溶液覆盖全部样本区域，室温孵育10 min。
6) PBS 浸润清洗切片两次，每次5 min，用滤纸吸去多余的液体。
植物实验中的部分染色法
活动五：练习掌握植物实验中的部分染色法
2010年11月22日高晓梅【实验目的】
学习植物制片的一般染色方法
【实验原理】
硫酸可将纤维素水解成胶态水解纤维素，遇碘后呈现蓝色反应；
苏丹Ⅲ染液可将脂肪染成橘黄色。
【实验器材】
芹菜叶柄、花生种子、徒手切片器、双面刀片、毛刷、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸、1%碘液、66.5%硫酸、体积分数为50%的酒精、蒸馏水、苏丹Ⅲ染液、显微镜
【实验步骤】
1、用徒手切片法切得植物组织薄片。
2、纤维素的染色：将1%碘液滴在芹菜茎切片上，然后再加一滴66.5%硫酸。
稍后，制成临时装片镜检。
3、脂肪的染色：在花生子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ染液，染色3分钟；用吸水纸吸去染液，再滴加1~2滴体积分数为50%的酒精溶液，洗去浮色；用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精，滴一滴蒸馏水，制成临时装片镜检。
作业：
填写实验报告册。
植物组织切片制作以及注意事项
植物组织石蜡切片的制作以及注意事项1 植物组织石蜡切片的制作方法⑴固定：用50%或70% FAA固定液（50%或70%酒精：甲醛：冰乙酸=16:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA；老的材料用70%的FAA），置于4℃固定24 h。
⑵脱水：将固定液倒去，加入50%乙醇，室温静置30 min；重复一次，室温静置20 min。
换成1%番红O溶液(用70%酒精配制)，室温脱水染色过夜。
次日继续脱水，酒精浓度梯度和时间依次为：80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min（2次）。
⑶透明：1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h，纯二甲苯1h、40 min（2次）。
最后加入少量二甲苯（浸没材料即可）和碎蜡，放入38℃温箱中过夜。
⑷浸蜡：将温箱温度调至56℃，计时1h；换成二级蜡1h；三级蜡（3次）各1h、1h、40min（从温度上升到56℃开始计时）。
⑸包埋：将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中，迅速放入冰水中使蜡凝固，防止气泡产生，以及凝蜡不匀。
⑹切片：修整蜡块，用Lica RM2126切片机切片，厚度5-10 μm。
⑺贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂，将切好的蜡带放入温水中，捞至载玻片上，最后置于37℃恒温箱过夜烤片。
⑻脱蜡及染色：①番红-固绿对染ⅰ脱蜡：二甲苯60min，二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。
ⅱ染色：80%乙醇5 min，1%固绿（用95%酒精配制）迅速蘸一下，大约10s，直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min（2次）。
②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡：二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。
一款制作植物组织永久切片的简单工序
一款制作植物组织永久切片的简单工序
植物组织永久切片，是一种实验室常用的技术，它能够精确地显示出细胞结构和组织关系，为进一步的生物学研究提供重要的实物参考。
本文将介绍一种简易的制作植物组织永久切片的工序。
1. 收集静态干燥的植物组织样品，若有生长的植物组织，可使用锋利的剪刀将其剪成稍细的片段，然后将其放入焦磷酸盐纸中，处理到它们在纸中能够保持它们的原形；
2. 将其从焦磷酸盐纸中取出，放入70%甲醇中浸泡5分钟，然后将甲醇沥干；
3. 将该块片段放入离心瓶中，倒入脱水甲醇，再加入2-3滴甲醇衍生物，然后像正常甲醇操作一样在37℃处理一小时；
4. 将片段放入脱模剂中浸泡5分钟，然后抽出片段，放入彻底的脱水甲醇中，处理2-3分钟；
5. 用混合85%醇，5％玻璃胶和10％蓝指甲油的溶液将片段放入，加热至60-65℃，处理五分钟；
6. 将处理过的植物片段放入原位置，放入含石蜡的贴片切片机中，切片，厚度约为4-5微米；
7. 将切好的片段放入石蜡胶片中，再放入至少5％氢氧化钾溶液中浸泡；
8. 胶片冷却到室温后，用正常的洗涤法洗涤，再用100％乙醇洗涤；
9. 用染料渗透染色，准备放大装配的抛光膜，细腻制作，就可以得到完美的植物组织永久切片了。
本方法均为视个体样品的不同而定，步骤或配方可调整。
作出完美切片不仅需要操作工具与药剂的加减，还需要有足够的经验和技能，只有经过细致的操作，才能将植物组织永久切片做得完美。
植物制片的染色及显微化学鉴定方法
植物制片的染色及显微化学鉴定方法Revised as of 23 November 2020植物制片的染色及显微化学鉴定方法一、目的与要求1、学习植物制片的一般染色方法。
2、学会并掌握常用显微化学鉴定法，即细胞壁化学组成及细胞内主要后含物性质的鉴定方法。
二、材料和用品1、自备材料：植物叶片、芹菜叶柄、土豆块茎、花生种子等等，解剖器、剃刀或双面刀片。
2、其它材料和用品：显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、吸水纸、蒸馏水、染色缸；%番红、% 固绿或1%苯胺蓝等染液、中性树胶、二甲苯、酒精、碘—氯化锌、盐酸—间苯三酚、苏丹Ⅲ、碘—碘化钾、10%氯化铁、盐酸等。
三、实验内容1、植物制片的染色方法2、常用显微化学鉴定法四、实验方法1、植物制片的染色方法用徒手切片法切得的薄片，如果仅仅是为了临时观察，制成临时装片即可，这种临时制片不能长久保存，只能作临时观察之用，又由于没经过染色，结构显示的也不够清晰。
为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分，并能够较长时间的保存，可以进一步染色及其它处理以至封片，从而可制成半永久或永久制片。
常用的染色方法是番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法，具体操作方法有二：方法一：（1）将植物切片材料放入30%酒精中，5分钟后移入水中。
（2）用%番红水溶液染色12—24小时。
（3）倒去番红液，用清水冲洗数次后，再放回50%酒精中浸泡5分钟。
（4）将材料从50%酒精中转入70%酒精中脱色，直至硬木质化的细胞壁呈现红色，其它部分呈粉红色或近于无色时为止。
（5） 1%苯胺蓝（用70%酒精配制）对染2—5分钟。
若用%固绿对染，则仅需半分钟左右即可。
注意：此步染色，要不时地在显微镜下检视，切忌染色过深，当木质化细胞壁呈红色，其它部分为淡蓝或淡绿色时，即可停止。
（6）用95%酒精冲去多余染液，再经无水酒精脱水5分钟。
（7）放入等量无水酒精与二甲苯溶液中及纯二甲苯中透明各3分钟。
（8）将切片材料移入载玻片上，在二甲苯未干时立即加一滴中性树胶封片，尔后将玻片平放，自然凉干或置于摄氏35度温箱中烘干。
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常规H.E染色
1）浸入二甲苯中脱蜡两次，每次处理10-15分钟。
2）用100%乙醇处理两次，95%乙醇，70%乙醇，50%乙醇依次各一次，每次处理5分钟。
3）加入蒸馏水中处理5分钟，用蒸馏水润洗1次。
4）将玻片放入苏木精中染细胞核8-10分钟
5）自来水稍冲洗，浸入1%盐酸中处理5-10秒。
镜检观察分化适宜时最佳。
6）将玻片用流水冲洗30-60秒至玻片返蓝。
7）将玻片放入伊红中染细胞质5分钟。
8）将玻片用自来水稍冲洗一下，乙醇快速梯度脱水，50%乙醇，70%乙醇，95%乙醇，100%乙醇，100%乙醇，每次处理时间10秒。
9）将玻片在二甲苯中透明处理两次，每次5分钟。
10）滴加中性树脂封片，干燥，照相。
分化液配置：浓盐酸0.5 - 1ml
75%酒精99ml
此液用一段时间后需要延长或更换液体，新液分化时间要短。
机器最好用0.5%，手工用1%。