TRAP-银染法端粒酶活性检测试剂盒
医用端粒酶检测试剂盒
医用端粒酶检测试剂盒医用端粒酶检测试剂盒是一种用于检测人体端粒酶活性的重要医疗设备。
本文将从以下几个方面进行介绍：端粒酶的作用与重要性、医用端粒酶检测试剂盒的原理与优势、其在临床医学中的应用、未来的发展前景等。
一、端粒酶的作用与重要性端粒酶是一种酶类物质，其主要作用是维持及修复细胞的端粒。
端粒是染色体末端的DNA序列，它在细胞分裂过程中会逐渐缩短，当端粒长度缩短到一定程度时，细胞将无法正常分裂和更新，导致细胞功能衰退和衰老。
端粒酶的活性则决定了端粒的长度和相应细胞功能的正常发挥。
医用端粒酶检测试剂盒的原理与优势医用端粒酶检测试剂盒通过一系列的化学、免疫学和分子生物学技术，可以精确测定组织、细胞或体液中的端粒酶活性水平。
其原理主要包括基于酶促化学反应或荧光标记分子的检测方法。
与传统方法相比，医用端粒酶检测试剂盒具有以下优势：1. 高灵敏度：医用端粒酶检测试剂盒能够检测到非常低浓度的端粒酶活性，可以提高疾病的早期诊断率。
2. 高准确性：医用端粒酶检测试剂盒的结果准确可靠，可以在短时间内得到精确的酶活性水平。
3. 高通量性：医用端粒酶检测试剂盒可以批量化进行样本检测，具有高效高通量的特点，提高了检测效率。
其在临床医学中的应用医用端粒酶检测试剂盒在临床医学中有着广泛的应用，主要表现在以下几个方面：1. 癌症诊断与预后判定：端粒酶活性与癌细胞增殖的相关性很高，通过医用端粒酶检测试剂盒可以帮助医生早期发现并确定癌症，同时可以预测癌症患者的预后阶段。
2. 心血管疾病评估：医用端粒酶检测试剂盒可以评估心血管疾病患者的细胞老化程度，并提供有关心血管疾病的风险评估。
3. 神经退行性疾病研究：医用端粒酶检测试剂盒可以用于神经退行性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病等的研究，探索端粒酶活性与这些疾病的关系。
未来的发展前景医用端粒酶检测试剂盒在医学领域的应用前景广阔。
随着对端粒酶活性的深入了解，医用端粒酶检测试剂盒将在临床诊断中起到越来越重要的作用。
TRAP-ELISA法检测妇科恶性肿瘤组织中端粒酶活性
TRAP-ELISA法检测妇科恶性肿瘤组织中端粒酶活性张梦真;乔玉环;史惠蓉;苑中甫;吴丹【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2001(036)002【摘要】目的：探讨应用端粒重复序列扩增(TRAP)-酶联免疫吸附测定法（ELISA）定量检测妇科恶性肿瘤组织中的端粒酶活性的应用价值。
方法：采用TRAP- ELISA法，对36例宫颈癌、16例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、25例非癌宫颈组织、25例卵巢上皮性肿瘤和6例正常卵巢的新鲜组织及41例宫颈脱落细胞进行端粒酶活性定量检测。
结果：宫颈组织端粒酶活性总阳性率，CIN 56.25%（9/16），宫颈癌91.67%（33/36），非癌宫颈组织4%（1/25）；宫颈脱落细胞，CIN 61.54%（8/13），宫颈癌82.35%（14/17），正常0%（0/11）；卵巢组织端粒酶活性阳性率，良性卵巢上皮性肿瘤25%（2/8），交界性66.67%（2/3），恶性85.7%(12/14），正常卵巢16.67%（1/6）。
恶性肿瘤与正常或良性病变中端粒酶活性的差异有显著性。
结论：妇科恶性肿瘤组织中端粒酶活性明显高于良性病变和正常组织。
TRAP-ELISA法较传统的TRAP法更为简便快速，有材料多样，可定量，特异性强、敏感性高，无同位素污染等优点。
%Aim：To investigate detective methodology of telomerase activity and its clinical application. Methods： The telomerase activity was measured by telomere repeat amplification protocol (TRAP) and Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA), which amplicons containing biotiny TS primer were combined with microtiter plate coated streptavidin, then hybridized with DIG-labeled detection probe complementary to telomeric repeat sequences and finallycombined with anti-digoxigenin-peroxidase antibody. Results：Telomerase activity in tissues was detected in 9/16（56.25%）CIN, 33/36 （91.67%）invasive cervical cancer and 1/4 （25%）controls， in scrapings from8/13(61.54%) CIN, 14/17(82.35%) invasive cervical cancer and 0/11（0%）normal controls， in 2 /8 benign（25%）, 2 /3 borderline-malignant （66.7%）, 12/ 14 malignant ovarian tumors（85.7%）, and 1/6 cortex of normal ovaries（16.67%）. There was statistically significant difference between malignant tumor and benignIn or normal tissues. Conclusion: The assay has no isotope contamination. It provides a way to perform a higher sentive, simpler, more rapid and photometric enzyme immunoassay for the quantitative detection of telomerase activity than conventional protocol.【总页数】3页(P129-131)【作者】张梦真;乔玉环;史惠蓉;苑中甫;吴丹【作者单位】河南医科大学第一附属医院妇产科;河南医科大学第一附属医院妇产科;河南医科大学第一附属医院妇产科;河南医科大学第一附属医院妇产科;河南医科大学第一附属医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.33【相关文献】1.PCR银染法检测胃黏膜活检组织端粒酶活性 [J], 史恩祥;沈喜;智强;吕玉洁;王丙信2.以改良TRAP法检测人膀胱肿瘤组织中端粒酶活性表达的临床意义 [J], 钟惟德;曾广翘;戴奇山;蔡岳斌;王良圣;魏鸿蔼;高劲松;刘建康3.端粒重复序列扩增法检测胃癌组织中端粒酶活性研究 [J], 唐伟东;方庆安;张冬雷;施健4.TRAP—ELISA法检测肿瘤组织中端粒酶活性的初步报告 [J], 唐伟东;王惠民5.TRAP-ELISA检测消化道肿瘤细胞株端粒酶活性 [J], 蔡洪培;邓志华;张兴荣;高勇;沈建伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
端粒酶活性TRAP实时定量检测试剂盒产品说明书
二、 定量检测
1． 一次反应总量为 25 微升
2． 移取 xx 微升反应液（Reagent B）到 0.5 毫升 PCR 管
3． 加入 1 微升待测的细胞或组织裂解悬液（总量为 250 纳克总蛋白；注意：严格避免 RNA 酶污染）
4． 加入 xx 微升染色液（Reagent C）
5． 加入 xx 微升补充液（Reagent D）到总量 25 微升
产品内容
裂解液（Rea 补充液（Reagent D） 封隔液（Reagent E） 产品说明书
毫升 微升 微升 毫升 毫升 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融；染色液（Reagent C）避免光照，有效保证 6 月
11．PCR 产物置于－20℃保存备用
注意事项
1. 本产品为 20 次 PCR 反应 2. 操作时，须戴手套 3. 本产品适合各种荧光定量 PCR 仪 4. 建议整个操作在 4℃下进行 5. 必须使用带滤芯的枪头 6. 所有器皿、离心管、液体等无 RNA 酶污染 7. 使用时，避免污染母液 8. 建议使用裂解液或无离子水作为阴性对照 9. 根据用户 PCR 仪的性能，决定是否加入封隔液（Reagent E） 10. 配制完成后，即刻进行扩增反应，以确保反应物的活性 11. 试剂避免反复冻融 12. 通常样品量范围为 1.6 纳克至 1 微克；理想范围为 250 纳克；如果没有反应，可能样品中存在 PCR 抑
用户自备
1.5 毫升离心管：用于样品制备和保存的容器 微型台式离心机：用于样品沉淀收集 PCR 管：用于样品扩增操作的容器 荧光定量 PCR 仪：用于荧光定量 PCR 反应
实验提示
1
一、 样品制备
1）细胞样品制备 1． 准备 1 个细胞培养 6 孔板的单孔细胞，直至生长至 80％铺满率（1 X 105 细胞） 2． 小心抽去细胞培养液 3． 用细胞刮脱棒刮落细胞转移到 1.5 毫升离心管 4． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 3000g（或 6000RPM，例如 eppendorf 5415） 5． 小心抽去上清液 6． 小心加入 xx 微升预冷的裂解液（Reagent A），混匀细胞颗粒群 7． 放进冰槽里孵育 30 分钟 8． （选择步骤）放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415） 9． （选择步骤）小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管 10．移取 5 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1） 11．即刻放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里备用
TRAP-银染色法用于肝癌组织端粒酶活性测定的研究
TRAP-银染色法用于肝癌组织端粒酶活性测定的研究
江涛;樊冰;彭剑雄;常永超
【期刊名称】《河南科技大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2005(023)002
【摘要】目的探讨端粒酶活性检测在肝癌诊断中的意义.方法用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板,在特异的引物作用下进行PCR 扩增,所得产物作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳,经硝酸银染色分析端粒酶活性.结果肝癌组织中的端粒酶阳性率为85.7 %,明显高于慢性肝炎组2.6%、肝硬化组16.7%和对照组4.2%,P<0.01.慢性肝炎组、肝硬化组、对照组之间无显著性差异(P<0.05).结论端粒酶活性检测对临床恶性肝脏肿瘤疾病的诊断具有良好的应用前景.
【总页数】2页(P90-91)
【作者】江涛;樊冰;彭剑雄;常永超
【作者单位】中南大学湘雅医学院,湖南长沙,410000;河南科技大学第一附属医院,河南洛阳,471003;中南大学湘雅医学院,湖南长沙,410000;中南大学湘雅医学院,湖南长沙,410000;河南科技大学第一附属医院,河南洛阳,471003
【正文语种】中文
【中图分类】R730
【相关文献】
1.96孔U型微板比色法用于测定游离血红蛋白含量的研究 [J], 刘向华
2.负吸光度法用于生色法的研究及痕量铁的测定 [J], 黄泽南;江南梅;曹芳娜;龙晓
芳;周琦;邓昌爱
3.端粒重复序列扩增-银染色法用于端粒酶活性测定的研究 [J], 虞伟;谈华;武建国;季洪爱
4.用于浮游纤毛虫定量研究的蛋白银染色法 [J], 徐润林;白庆笙
5.改良四胺银染色法用于卡氏肺孢子虫诊断的研究 [J], 陈锡慰
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端粒酶活性检测
端粒酶活性检测（TRAP EZE Telomerase Detection Kit）实验前准备1.试剂盒中需要分装保存的试剂：50X dNTP 5ul/管，-20℃保存2.Telomerase positive Cells的处理：用200ul CHAPS Lysis Buffer溶解，然后分装至10ul/管，-85℃至-75℃保存；使用时用CHAPS Lysis Buffer按1：20稀释3.自备试剂：RNase inhibitor，Taq Polymerase（native，without BSA；Fermentas），PBS（Mg2+and Ca2+-free）4.设备及耗材：2.5ul，10ul，100ul加样器及对应Tip，200ul EP管，1.5ul EP管（以上耗材均要求RNase-free）冷冻离心机，PCR仪，PAGE电泳系统，凝胶成象系统。
实验步骤1．PBS洗去残余培养基；2．CHAPS Lysis Buffer 中加入RNase inhibitor，终浓度100-200U/ml（0.1-0.2U/ul）；3．将样本加入CHAPS Lysis Buffer中，浓度200ul/105-106cells，用枪混匀；4．冰浴30mins；5．4℃离心12000g，20mins；6．吸取上清，分装至200ul EP中，约10-15ul/管，冷冻保存于-70℃冰箱。
*可取一小管样品测定蛋白浓度，具体方法见《蛋白质浓度测定（BCA TM Protein Assay Kit）》7．配制反应液：（25ul体系）10X TRAP Reaction Buffer 2.5ul50X dNTP Mix 0.5ulTS Primer 0.5ulTRAP Primer Mix 0.5ulTaq Polymerase （5units/ul）0.2ul（1unit）dH2O 19.8ulTemplate 1.0ul每次反应都应包括：①样本（蛋白含量＜1.5ug per assay），②样本热敏对照（85℃，10mins），③阳性对照（可用试剂盒自带的Telomerase positive Cells，也可用其他公认有端粒酶活性的细胞，如Hela细胞），④阳性热敏对照（85℃，10mins），⑤阴性对照，⑥空白对照（CHAPS Lysis Buffer）8．将混合好的反应管置于PCR仪中反应，程序：30℃，30min s→94℃，30s→59℃，30s↖70℃，1mins↙30-33cycles9．12%非变性PAGE电泳，上样4ul每孔，400V，1.5-2h10．银染：①将凝胶小心倒入染色槽中，加入500ml固定液，盖好盖子放在水平摇床上轻摇10-15mins②小心倒掉固定液，用二蒸水洗一遍再加入500ml银染液，盖好盖子放在水平摇床上轻摇10-15mins③小心倒掉银染液，用二蒸水洗一到两遍再加入500ml显色液，放在水平摇床上轻摇至条带显色④小心倒掉显色液，用二蒸水洗一遍，然后用保鲜膜包好凝胶至凝胶成相系统中拍照。
端粒酶活性检测
端粒酶活性检测（TRAP EZE Telomerase Detection Kit）实验前准备1.试剂盒中需要分装保存的试剂：50X dNTP 5ul/管，-20℃保存2.Telomerase positive Cells的处理：用200ul CHAPS Lysis Buffer溶解，然后分装至10ul/管，-85℃至-75℃保存；使用时用CHAPS Lysis Buffer按1：20稀释3.自备试剂：RNase inhibitor，Taq Polymerase（native，without BSA；Fermentas），PBS（Mg2+and Ca2+-free）4.设备及耗材：2.5ul，10ul，100ul加样器及对应Tip，200ul EP管，1.5ul EP管（以上耗材均要求RNase-free）冷冻离心机，PCR仪，PAGE电泳系统，凝胶成象系统。
实验步骤1．PBS洗去残余培养基；2．CHAPS Lysis Buffer 中加入RNase inhibitor，终浓度100-200U/ml（0.1-0.2U/ul）；3．将样本加入CHAPS Lysis Buffer中，浓度200ul/105-106cells，用枪混匀；4．冰浴30mins；5．4℃离心12000g，20mins；6．吸取上清，分装至200ul EP中，约10-15ul/管，冷冻保存于-70℃冰箱。
*可取一小管样品测定蛋白浓度，具体方法见《蛋白质浓度测定（BCA TM Protein Assay Kit）》7．配制反应液：（25ul体系）10X TRAP Reaction Buffer 2.5ul50X dNTP Mix 0.5ulTS Primer 0.5ulTRAP Primer Mix 0.5ulTaq Polymerase （5units/ul）0.2ul（1unit）dH2O 19.8ulTemplate 1.0ul每次反应都应包括：①样本（蛋白含量＜1.5ug per assay），②样本热敏对照（85℃，10mins），③阳性对照（可用试剂盒自带的Telomerase positive Cells，也可用其他公认有端粒酶活性的细胞，如Hela细胞），④阳性热敏对照（85℃，10mins），⑤阴性对照，⑥空白对照（CHAPS Lysis Buffer）8．将混合好的反应管置于PCR仪中反应，程序：30℃，30min s→94℃，30s→59℃，30s↖70℃，1mins↙30-33cycles9．12%非变性PAGE电泳，上样4ul每孔，400V，1.5-2h10．银染：①将凝胶小心倒入染色槽中，加入500ml固定液，盖好盖子放在水平摇床上轻摇10-15mins②小心倒掉固定液，用二蒸水洗一遍再加入500ml银染液，盖好盖子放在水平摇床上轻摇10-15mins③小心倒掉银染液，用二蒸水洗一到两遍再加入500ml显色液，放在水平摇床上轻摇至条带显色④小心倒掉显色液，用二蒸水洗一遍，然后用保鲜膜包好凝胶至凝胶成相系统中拍照。
银屑病患者皮损中端粒酶活性的测定.docx
银屑病患者皮损中端粒酶活性的测定银屑病患者皮损中端粒酶活性的测定中华皮肤科杂志1998年第2期第31卷论著作者：程浩茅晓红张行蔡心涵孙国均郑树单位：310009 杭州，浙江医科大学附属第二医院皮肤科(程浩茅晓红孙国均)；浙江医科大学肿瘤研究所(张行蔡心涵郑树)关键词：银屑病；DNA核苷酸外转移酶【摘要】目的探讨银屑病的端粒酶活性表达情况。
方法采用端粒重复序列扩增文件——酶标法(TRAP-ELISA)测定银屑病皮损中端粒酶活性。
结果银屑病皮损中有一定水平的端粒酶活性，但其水平显著低于肿瘤组织和细胞株。
结论端粒酶不仅可在恶性肿瘤表达，也可在一些非恶性皮肤病组织表达；并且认为银屑病皮损中端粒酶活性的增加可能与银屑病发病机理尤其是表皮细胞的持续过度分化有某种关联。
Detection of Telomerase Activity in the Lesion of PsoriasisCheng Hao, Mao Xiaohong, Zhang Xing, et al. Department of Dermatology, Second Affliated Hospital and Cancer Research Institute, Zhejiang Medical University, Hangzhou 310009【Abstract】Objective To investigate telomerase activity in patients with psoriasis.Methods The telomerase activity in the skin lesions of patients was detected by TRAP (Telomeric repeat amplification protocol)——ELISA which is based upon PCR amplification of the initial telomerase product and detected by ELISA.Results Telomerase activity was detected in the lesions of psoriatic patients, but the level of it was lower in comparison with that in tissues of malignant tumor and K562 cell line.Conclusion These findings support that the increase of telomerase activity may be linked to the pathogenesis of psoriasis and that the telomerase activity can be detected not only in malignant tumors but also in nonmalignant skin diseases.【Key words】PsoriasisDNA nucleotidylexotransferase端粒是真核细胞线状DNA末端的一组6个核苷酸的重复序列5′-TTAGGG-3′，它可能有很多重要功能，如对维持染色体的稳定性、一致性、复制和功能等。
溴化乙啶细胞端粒酶活性TRAP电泳分析试剂盒产品说明书(
溴化乙啶细胞端粒酶活性TRAP电泳分析试剂盒产品说明书（中文版）主要用途溴化乙啶细胞端粒酶活性TRAP电泳分析试剂是一种旨在通过端粒酶体外合成端粒重复序列的引物延展方法，继而进行多聚酶联扩增反应，在非变性聚丙烯酰胺电泳上，通过经典的溴化乙啶染色技术，呈现六碱基相间的阶梯图像，以分析和评价活细胞端粒酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
广泛应用于肿瘤、衰老等研究。
产品即到即用，性能稳定，无核酶污染，操作便捷，敏感高效，染色清晰，重复性好。
技术背景端粒重复序列扩增方法（telomeric repeat amplification protocol；TRAP）是基于多聚酶联扩增的敏感高效的体外端粒酶活性的检测技术。
首先，非端粒单核苷酸引物作为端粒酶的底物而持续延长产生六碱基差异的片段；然后，延长所获得的产物在非端粒单核苷酸引物和逆向引物的参与下进行特异性扩增；内参引物的整合用于定量酶活性。
溴化乙啶染色技术可以检测到10ng的DNA条带。
产品内容清理液（Reagent A）毫升裂解液（Reagent B）毫升反应液（Reagent C）毫升上样液（Reagent D）微升胶底液（Reagent E）毫升凝结液（Reagent F）毫升促进液（Reagent G）微升胶体液（Reagent H）毫升电泳液（Reagent I）毫升染色液（Reagent J）微升产品说明书1份保存方式保存清理液（Reagent A）、裂解液（Reagent B）、反应液（Reagent C）和凝结液（Reagent F）在－20℃冰箱里，上样液（Reagent D）促进液（Reagent G）和染色液（Reagent J）保存在4℃冰箱里；其余的保存在室温下。
上样液（Reagent D）、胶底液（Reagent E）、促进液（Reagent G）、胶体液（Reagent H）和染色液（Reagent J），避免光照，有效保证6月用户自备无离子水：用于稀释电泳液（Reagent I）和染色液（Reagent J）1.5毫升离心管：用于细胞裂解的容器0.5毫升PCR管：用于扩增反应的容器15毫升锥形离心管：用于胶体溶液配制的容器50毫升锥形离心管：用于胶体溶液配制和溶液混匀的容器细胞刮脱棒：用于细胞脱落PCR仪：用于扩增反应物微型台式离心机：用于样品操作电泳仪：用于TRAP分子电泳分离平式摇荡仪：用于染色反应染色塑料盒：用于PAGE凝胶染色的容器UV自动成像仪或PHOSPHORIMAGE：用于电泳染色记录实验步骤一、样品制备1．准备1个细胞培养6孔板的单孔细胞，直至生长至80％铺满率（1 X 105细胞）2．小心抽去细胞培养液3．加入xx毫升清理液（Reagent A）覆盖生长表面4．小心抽去清理液5．用细胞刮脱棒刮落细胞转移到1.5毫升离心管6．放进微型台式离心机离心5分钟，速度为3000g（或6000RPM，例如eppendorf 5415）7．小心抽去上清液8．小心加入xx微升预冷的裂解液（Reagent B），混匀细胞颗粒群9．放进冰槽里孵育30分钟10．即刻放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里备用二、扩增反应1．准备2个0.5毫升PCR管，置于冰槽里2．按照下表依次加入反应物3．混匀4．室温下（30℃）孵育30分钟5．即刻放进PCR仪，按照下表扩增6．分别加入xx微升上样液（Reagent D）7．置入冰槽里等待上样三、垂直电泳分析1．移出xx毫升胶底液（Reagent E）到15毫升锥形离心管里2．加入xx微升凝结液（Reagent F）3．加入xx微升促进液（Reagent G）4．混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气泡5．在室温下孵育45分钟，或直至胶体凝结6．移出xx毫升胶体液（Reagent H）到50毫升锥形离心管里7．加入xx微升凝结液（Reagent F）8．加入xx微升促进液（Reagent G）9．混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气泡10．插入10孔梳11．在室温下孵育45分钟，或直至胶体凝结12．移取xx毫升电泳液（Reagent I）到500毫升容器里，加入450毫升无离子水，混匀后，标记为电泳工作液13．加入适量的电泳工作液到电泳槽里14．在4℃环境下预运行15分钟，电压为150伏15．上样：25微升（注意：使用20碱基的DNA marker）16．继续4℃环境下电泳2小时，电压为150伏，直至溴酚蓝（Bromophenol Blue）染料移动到胶体三分之二处17．拆除电泳装置，取出电泳玻璃板块（注意：胶体脆弱）18．分离玻璃板快，切除胶底19．将胶体放进染色塑料盒里20．加入100毫升无离子水21．加入xx微升染色液（Reagent J）22．置于平式震荡仪上，在室温下孵育30分钟，速度为50RPM，避免光照23．小心取出胶体24．小心使用保鲜塑料薄膜包裹交替25．即刻置于UV自动成像仪或PHOSPHORIMAGE下成像记录，并测算条带荧光强度26．计算端粒酶活性：注意事项1．本产品为10次操作（包括10次裂解、20次反应、2次电泳）2．整个操作过程，须戴手套3．必须使用带滤芯的枪头4．所有器皿、离心管、液体等无RNA酶污染5．建议使用裂解液作为阴性对照6．内参分子大小为36bp7．内参条带信号过弱，表明端粒酶活性过高，建议稀释或减少样品量；建议实验操作增加样品浓度梯度8．电泳前注意清洗样品孔9．电泳操作注意安全10．染色时，避免光照11．染色时间可以根据情况调整（参考图像如下：黑色箭头指示内参条带36碱基；括号区域表明六碱基相间的阳性条带，起始条带为50碱基）12．本公司提供系列TRAP实验技术产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定无核酶污染3．本产品经鉴定显带清晰。
端粒酶活性检测方法
端粒酶活性检测方法1.端粒重复序列延伸法端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。
1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(Telom—eric Repeat Amplification Protoc01．TRAP)。
首先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成AGGGT]rAG，然后每经过一次转位合成一个GGTTAG的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入一个24nt的CX做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。
1994年Kim创建了该方法，它与DNA聚合酶分析方法相似，如；把核酸提取物、代表脊椎动物端粒重复序列的单链DNA前体(T1’AGGG)4和放射标记的磷酸脱氧核糖一起孵育，然后通过放射自显影检测凝胶上新添加的DNA重复序列。
此方法是最早建立的方法，它稳定性好。
其缺点是，需要样本量大，敏感性差，检测时间长，不适合临床标本的大量检测，检测时需同位素量较大。
此法已基本被淘汰2.TRAP法及其改进（关键是我们有没有PCR扩增机、电泳自显影及图像分析）其基本原理是利用CHAPS去污剂提取端粒酶后，将反应体系中下游引物CX(5’-(CCATTA)3CCCTAA-3’]用石蜡层与其他反应隔开，在石蜡层上利用端粒酶的逆转录酶活性在非端粒核酸．TS(5’．AACCGTCGAGCAGTT-3’)引物3’末端合成端粒重复序列，然后将反应产物进行PCR扩增，石蜡层在高温时溶化，CX(引物加入到反应体系中，反应体系中含有(a-32P)dGTP或（a-32P）CTP。
由于端粒酶每合成一个TTAGGG就需要RNA模板重新定位，因此，反应产物在聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示为相隔6bp的梯状条带，TRAP法由于利用PcR技术对端粒酶合成的端粒DNA进行扩增，因此能从104个正常细胞中检出混杂在其中的一个肿瘤细胞，这大大提高了检测的敏感性、速度和效果。
端粒酶活性检测方法的研究进展2008
端粒酶活性检测方法的研究进展2008-10-07 22:00摘要: 近几年研究表明端粒酶与肿瘤的发生发展密切相关，推测可能是一个广泛的肿瘤标志物。
本文就端粒酶活性检测的原理，端粒酶的提取方法，TRAP扩增技术，四种结果分析方法（同位素法、染色法、荧光法和ELISA法）以及如何进行质量控制与半定量测定进行综述。
端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶。
人端粒酶RNA组分（hTR）于1995年被克隆，其中含有端粒重复序列的模板（5′-CUAACCCUAAC-3′）；蛋白质组分具有RNA依赖的DNA多聚酶活性，结构尚不清楚。
端粒酶能以自身RNA的模板区为模板复制合成端粒序列。
在胚性细胞等增殖活跃的细胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟体细胞中端粒酶失活，同时还发现绝大多数肿瘤细胞都呈端粒酶阳性，而在癌旁组织和正常组织阳性率很低，推测端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标志物[1]。
因此近几年端粒酶在各种肿瘤中的研究日益深入，同时促进了检测方法的改进与完善。
本文对其检测方法综述如下。
1 基本原理端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺（PAGE）凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。
1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法（telomeric repeat amplification protocol, TRAP）。
TRAP反应原理见下图。
首先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成agggttag，然后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入一个24nt的CX 做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。
2 基本技术方法2.1 标本来源手术摘除组织，针吸活检组织，胸水，腹水，膀胱或胰管冲洗液，棉拭子所取分泌物和尿液（尚有争议）等。
2.2 端粒酶的提取方法早期采用超声等物理破碎的方法在不同细胞中的提取效率差异较大，此后采用去污剂（如CHAPS）裂解的方法在少量细胞获取了较稳定的端粒酶提取液。
一种快速检测端粒酶活性的试剂盒[实用新型专利]
![一种快速检测端粒酶活性的试剂盒[实用新型专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/8e00ea16f705cc17542709bf.png)
专利名称：一种快速检测端粒酶活性的试剂盒
专利类型：实用新型专利
发明人：叶汝章,张娟,全利,滕凌,叶亚东,朱文华,潘鹂,胡娟,郝小江,朱兆云,路易斯伊格纳罗
申请号：CN201220273298.X
申请日：20120612
公开号：CN202671545U
公开日：
20130116
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本实用新型涉及试剂盒，特别涉及一种实时定量PCR测量样品中染色体端粒平均长度的绝对值的试剂盒。
一种用RT-qPCR法测量端粒平均长度绝对值的试剂盒，其特征在于：包括盒体，衬垫，PCR反应液，Taq
酶，136B4Forward，36B4Reverse，TelomereForward，TelomereReverse，84-
mer，36B4片段，衬垫上设有容器空分别放置PCR反应液，Taq
酶，136B4Forward，36B4Reverse，TelomereForward，TelomereReverse，84-mer。
本实用新型采用试剂盒可以方便，快捷测定端粒的平均长度的绝对值，使用工业生产或检测。
申请人：云南路易斯中药现代化工程技术研究中心
地址：650000 云南省昆明市西昌路中央丽城2期2栋3单元902
国籍：CN
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trap提端粒酶的原理
基本原理利用端粒酶在体外可以以其自身RNA 的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6 个碱基的重复序列的特性，采用PCR 方法扩增此重复序列，并进而用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳显示6 个碱基差异的梯带。
1994 年Kim 建立的TRAP 法，其主要原理如下：首先合成一个18nt 的TS 做上游引物，端粒酶结合TS 末端的GTT 并合成AGGGTTAG，然后每经过一次转位合成一个ggttag 的6 碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入CX 做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。
我公司提供的PCR端粒酶活性检测试剂盒基于同样的的原理，利用银染技术检测端粒酶的活性。
阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6bp 的梯状条带，条带的多、寡、深或浅表示端粒酶活性的大小。
TRAP-银染法保留了传统TRAP 法灵敏度高、特异性强等优点，避免了同位素的放射污染。
同时，还增设了内标准物，提供阳性对照品，优化了引物设计，使PCR 效果进一步提高，使之能够高灵敏的检测到细胞和组织提取物中端粒酶的活性。
基本原理利用端粒酶在体外可以以其自身RNA 的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6 个碱基的重复序列的特性，采用PCR 方法扩增此重复序列，并进而用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳显示6 个碱基差异的梯带。
1994 年Kim 建立的TRAP 法，其主要原理如下：首先合成一个18nt 的TS 做上游引物，端粒酶结合TS 末端的GTT 并合成AGGGTTAG，然后每经过一次转位合成一个ggttag 的6 碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入CX 做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。
我公司提供的PCR端粒酶活性检测试剂盒基于同样的的原理，利用银染技术检测端粒酶的活性。
阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6bp 的梯状条带，条带的多、寡、深或浅表示端粒酶活性的大小。
TRAP-银染法保留了传统TRAP 法灵敏度高、特异性强等优点，避免了同位素的放射污染。
端粒重复序列扩增-银染色法用于端粒酶活性测定的研究
端粒重复序列扩增-银染色法用于端粒酶活性测定的研究虞伟;谈华;武建国;季洪爱【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2000(013)002【摘要】目的:建立端粒重复序列扩增(TRAP)- 银染色技术,探讨端粒酶活性检测在肿瘤诊断中的意义.方法:用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板,在特异引物作用下进行PCR 扩增,所得产物用氯仿∶异戊醇(24∶1)处理浓缩,作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳,经硝酸银染色分析端粒酶活性.结果:TRAP-银染色法能准确特异地检测小鼠骨髓瘤细胞(SP 2/0)的端粒酶活性,灵敏度可达1×102个细胞.端粒酶阳性率在23例各种恶性肿瘤组织中为 86.9 % (20/23),而在19例炎性包块与良性增生组织为5.3%(1/19),5例正常组织中未发现有端粒酶活性. 结论:TRAP-银染色法简便快速、具有较好的测定敏感度与重复性,对临床恶性肿瘤疾病的诊断具有良好的应用前景.【总页数】3页(P96-98)【作者】虞伟;谈华;武建国;季洪爱【作者单位】南京军区南京总医院解放军医学检验中心,江苏南京,210002;南京市儿童医院检验科;南京军区南京总医院解放军医学检验中心,江苏南京,210002;南京总医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.银染端粒重复序列扩增法检测肝癌模拟肝穿组织端粒酶活性的研究 [J], 卫立辛;范瑞芳;杨庆;贾凤岐;王维锋;郭亚军;吴孟超2.应用银染端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞系端粒酶活性的研究 [J], 卫立辛;吴孟超3.银染端粒重复序列扩增法定量检测端粒酶活性的研究 [J], 黄燕;何国平;税青林;赵小平4.银染端粒重复序列扩增法检测肺癌端粒酶活性 [J], 古涛;刘永5.银染的端粒重复序列扩增法检测人细胞端粒酶活性的研究 [J], 卫立辛;吴孟超;陈汉;沈锋;施乐华;钱其军;贺平;崔贞福;郭亚军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
银染的端粒重复序列扩增法检测人细胞端粒酶活性的研究
银染的端粒重复序列扩增法检测人细胞端粒酶活性的研究卫立辛;吴孟超;陈汉;沈锋;施乐华;钱其军;贺平;崔贞福;郭亚军【期刊名称】《第二军医大学学报》【年(卷),期】1998(19)1【摘要】目的：探讨应用简便、快速及无害化的非核素银染端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）检测人细胞端粒酶活性。
方法：与核素ＴＲＡＰ相比较，采用非核素银染ＴＲＡＰ检测了２９３细胞，并检测了经ＲＮａｓｅ和加热处理的阴性对照标本和ＱＧＹ７７０１、ＳＭＭＣ－７７２１２株人肝癌细胞。
结果：１０个以上的２９３细胞均为阳性，而ＲＮａｓｅ和加热处理的标本均阴性；２株人肝癌细胞均阳性；非核素银染ＴＲＡＰ比核素ＴＲＡＰ快１０ｈ左右。
结论：非核素银染的ＴＲＡＰ是特异、敏感及快速的端粒酶活性检测方法，证实２株人肝癌细胞株均有端粒酶活性表达。
【总页数】3页(P26-28)【关键词】端粒酶;活性;肝肿瘤;端粒TRAP法【作者】卫立辛;吴孟超;陈汉;沈锋;施乐华;钱其军;贺平;崔贞福;郭亚军【作者单位】第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤免疫和基因治疗中心【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.银染端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性及其临床意义 [J], 何晓松;俞军;戴美红2.银染端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性及其临床应用 [J], 何晓松;俞军;戴美红;刘东利;张传兰;高长明3.银染端粒重复序列扩增法检测肝癌模拟肝穿组织端粒酶活性的研究 [J], 卫立辛;范瑞芳;杨庆;贾凤岐;王维锋;郭亚军;吴孟超4.应用银染端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞系端粒酶活性的研究 [J], 卫立辛;吴孟超5.银染端粒重复序列扩增法检测肺癌端粒酶活性 [J], 古涛;刘永因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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规格： 50 assays
TRAP－银染法端粒酶活性检测试剂盒货号：QY-MY798J规格:50 assays类别：免疫原位杂交单位：套上海乔羽生物有限公司专业的提供免疫组织及相关实验试剂，季铵盐阳离子，DNA、RNA纯化系列、人ELISA试剂盒、国产Elisa试剂盒 、上海国产elisa试剂盒 、国产elisa试剂盒厂家，标记抗体 、抗体研发生产、抗体实验室、生化试剂品牌、生化试剂品牌价格、生化试剂供应商、品质保证，技术严格，无效果退款退货，欢迎来电咨询及订购。TRAP－银染法端粒酶活性检测试剂盒主要用于科研方面，不用于临床诊断。TRAP－银染法端粒酶活性检测试剂盒更多信息，来电咨询！
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