微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程

微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程

1、目的

为规范输血科交叉配血试验的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。

2、适用范围

本文件适用于本院输血科进行交叉配血的操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理

4.1试验方法：凝胶测试法

4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

5、样本采集和处理

受血者血样为EDTA-K2抗凝血。抽取受血者静脉血3~4ml于专用管（紫色头管）内，分离出血浆。红细胞配成0.8%的悬液，供血者血样以同样方法分离血浆，并配制0.8%红细胞悬液。配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。

6、试剂：

6.1 0.9%的生理盐水；

6.2戴安娜合血卡；

7、仪器：

7.1XTL-4.7细胞洗涤离心机；

7.2DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器；

7.3DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ

8、操作程序：

8.1工作准备：

8.1.1生理盐水室温平衡。准备样本。标记合血卡。

8.1.2 0.8%-1%样本红细胞制备：加25μl样本压积红细胞

悬浮液于2ml戴安娜2号稀释液中。

8.1.3于1号管中（主侧）加入50μl献血者红细胞（0.8%）。25μl受血者血浆或血清。

8.1.4 2号管中（次侧）加入50μl受血者红细胞（0.8%）。25μl献血者血浆或血清。

8.1.5 37℃孵育15分钟。

8.1.6 离心10分钟。判断结果，并作好记录。

9、结果判断：1+至4+为抗人球配血不相容；—（0）为配

血相容，可以输注。

10、医学解释：

ABO交叉配血试验是检查供、受血者血液中是否含有不相合

的抗原和抗体成分的试验。其目的是发现ABO血型的不规则抗体；发现ABO血型以外的配血不和合，防止因错误定型所致的输血事故。是安全输血的根本保证。

11、质量控制：每天常规实验前先做室内质控（具体执行《输

血科室内质量控制的标准操作规程》），结果在控后方可将常规

检查的报告发出。

12、注意事项：

12.1含抗体的新鲜血清，如补体尚有活性，遇相应红细胞抗原，可发生溶血现象，其意义与凝集相同。

12.2可以用含EDTA的血浆代替血清使用。

12.3每日实验前，先取出2号稀释液及标准细胞，放置一段时间到室温，以防冷凝集。

12.4实验前将卡离心3-4分钟。必须标记合血卡。

12.5合血卡封口已损坏时，管中干涸，或有气泡时，卡不可使用。

12.6必须用2号稀释液保证反应结果可靠，细胞浓度要在0.8%左右，不可太浓或太稀。

12.7纤维蛋白可吸附部分红细胞，应将血样离心。

12.8液体应加在反应卡反应室中。

12.9严格按标准程序操作可检出弱抗原抗体反应，弱凝集。12.10某些药物、疾病可导致血液不配合。

12.11细菌及异常血清蛋白可影响结果。

13、最常见的误差来源：

13.1自制分型血清抗体效价太低、亲和力不强，造成定型不准。

13.2患者纤维蛋白原升高或异常蛋白质血症（如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症），可产生缗钱状假凝集。新生儿脐带血中含有华顿胶（Wharton jally）或操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。

13.3病人输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物，可引起红细胞聚集，易误认为凝集。

13.4血清中存在不规则抗体，如A2和A2B型患者血清内有A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有I抗体等。有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物质可中和抗体血清的抗体，从而抑制反应，造成假的不凝集。

13.5婴儿尚未产生自己的抗体（出生3~6个月后方逐渐产生），或有从母亲获得的血型抗体，故新生儿不宜用血清作反向定型。

13.6老年人血型抗体水平回下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病、遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定性错误。

13.7用近期内输过血的患者血液做对照红细胞，其红细胞是多种红细胞的混合物。

13.8病人红细胞已经被大量抗体包被（如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞），或红细胞悬浮于含高浓度蛋白的介质中，红细胞都回自发地发生凝集。

13.9有些人红细胞膜有遗传或获得性异常，易发生多凝集（较

罕见）。]

13.10A或B的弱抗原易判断为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。

13.11由于患白血病或某些恶性肿瘤（如Hodgkin病）使A或B 抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原较青壮年弱，在实验室内保存过久的红细胞及部分衰老的红细胞抗原性也会减弱。

13.12当用血清配制红细胞悬液时，若血清中有高浓度血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。13.13红细胞被细菌污染。

13.14嵌合体（chimera）现象，此处指混和细胞群，见于异卵双生子。如有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。

13.15用了不洁的玻璃器皿或使用了严重污染的血清、红细胞可出现假阳性。试管沾染了洗涤剂会造成假阴性。

13.16红细胞与血清的比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。

13.17将出现的溶血现象（阳性）误认为阴性结果。

13.18温度过高会造成假阴性。因为ABO血型系统的IgM抗体最适温度为4~22℃，如达37℃凝集力即下降。

13.19弄错标本、试剂、标签，或出现记录错误。

14、相关文件