第十章吸光光度法

第十章吸光光度法课后习题及答案

第十章吸光光度法9.1 0.088 mg Fe3+．用硫氰酸盐显色后，在容量瓶中用水稀释到50 mL，用1 cm 比色皿，在波长480 nm处测得A＝0.740。

求吸收系数α及κ。

9.2 用双硫腙光度法测定Pb2+，Pb2+的浓度为0.08mg/50mL，用2cm比色皿在520nm下测得T＝53%，求κ。

9.3 用磺基水杨酸法测定微量铁。

标准溶液是由0.2160gNH4Fe(SO4)2·12H2O溶于水中稀释至500mL配制成的。

根据下列数据，绘制标准曲线。

标准铁溶液的体积V /mL 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0吸光度0.0 0.165 0.320 0.480 0.630 0.790某试液5.00 mL，稀释至250 mL。

取此稀释液2.00 mL，与绘制标准曲线相同条件下显色和测定吸光度。

测得A＝0.500。

求试液铁含量(单位：mg/mL)。

铁铵矾的相对分子质量为482.178。

9.4 取钢试样1.0 g，溶解于酸中，将其中锰氧化成高锰酸盐，准确配制成250mL，测得其吸光度为1.00×10–3 mol·L－1 KMnO4溶液的吸光度的1.5倍。

计算钢中锰的百分含量。

9.5 用普通光度法测定铜。

在相同条件下测得1.00×10-2 mol·L-1标准铜溶液和含铜试液的吸光度分别为0.699和1.00。

如光度计透光度读数的相对误差为0.5％，测试液浓度测定的相对误差为多少？如采用示差法测定，用铜标准液为参比，测试液的吸光度为多少？浓度测定的相对误差为多少？两种测定方法中标准溶液与试液的透光度各差多少？示差法使读书标尺放大了多少倍？9.6 某含铁约0.2％的试样，用邻二氮杂菲亚铁光度法)κ=1.1×104)测定。

试样溶解后稀释至100mL，用1.00cm比色皿，在508nm波长下测定吸光度。

(1)为使吸光度测量引起的浓度相对误差最小，应当称取试样多少克？(2)如果说使用的光度计透光度最适宜读数范围为0.200至0.650，测定溶液应控制的含铁的浓度范围为多少？9.7 某溶液中有三种物质，他们在特定波长处的吸收系数a(L·g-1·cm-1)如下表所示。

吸光光度法

光电管光电倍增管光二极管阵列
光电管分为红敏和紫敏，阴极表面涂银和氧化铯为红敏，适用625－1000nm波长；阴极表面涂锑和铯为紫敏，适用200－625nm波长
目视比色法—比色管
光电比色法—光电比色计
光源、滤光片、比色池、硒光电池、检流计
分光光度法与分光光度计
722型分光光度计光学系统图
1.光源；2.滤光片；3,8聚光镜 4,7.狭缝；5.准直镜；6.光栅 9.比色池；10.光电管
e 表示物质的浓度为1mol/L,液层厚度为1cm时溶液
的吸光度。单位： (L•mol-1 •cm-1)
桑德尔(Sandell)灵敏度： S 当仪器检测吸光度为0.001时，单位截面积光
程内所能检测到的吸光物质的最低含量。单位：mg/cm2
S=M/e
氯磺酚S测定钢中的铌 50ml容量瓶中有Nb30μg，用2cm比色池，在650nm
AHB和AB-分别为有机弱酸HB在强酸和强碱性时的吸光度，它们此时分别全部以[HB]或[B-]形式存在。
pKa=pH+ lg
AB- - A A- AHB
lg AB- - A A- AHB
对pH作图即可求得pKa
2 络合物组成确定饱和法（摩尔比法）制备一系列含钌3.0×10-5 mol/L (固定不变)和不同浓度（小于12.0×10-5 mol/L）的PDT溶液，按实验条件，485nm测定吸光度,作图。
c 显色反应时间针对不同显色反应确定显示时间显色反应快且稳定；显色反应快但不稳定；显色反应慢，稳定需时间；显色反应慢但不稳定
d 显色反应温度加热可加快反应速度，导致显色剂或产物分解
e 溶剂
有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率

第10章吸光光度分析

无机及分析化学
34
3、吸光度范围
被测溶液的吸光度值在0.2～0.8范围内，使测定
结果有较高的准确度，过大或过小应予以调节。而当A= 0.434或T% = 36.8时，测定的误差最小。为此可从以下三方面加以控制：一是改变试样的称样量，或采用稀释、浓缩、富
无机及分析化学
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质量吸光系数，摩尔吸光系数
• 质量吸光系数 a: 当一定波长的单色光，通过浓度为 1g/L，吸收池的液层厚度为 1cm的溶液时，测得的吸光度。单位为L.g-1.cm-1
• 摩尔吸光系数ε • 物理意义：当一定波长的单色光，通过浓度为 1mol/L，吸收池的液层厚度为1cm的溶液时，测得的吸光度。单位为L.mol-1.cm-1
比耳定律假设了吸收粒子之间是无相互作用的，因此仅在稀溶液（c < 10-2 mol/L )的情况下才适用。
(2)非单色光引起的偏离
朗伯一比尔定律只对一定波长的单色光才能成立，但在实际工作中，入射光是具有一定波长范围的。
无机及分析化学
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化学因素
溶质的离解、缔合、互变异构及化学变化也会引起偏离。
不同的显色反应的适宜 pH 是通过实验确定的。无机及分析化学
24
3 、显色温度：要求标准溶液和被测溶液在测定过程中温度一致。
4 、显色时间：通过实验确定合适的显色时间，并在一定的时间范围内进行比色测定。
5、溶剂：有机溶剂降低有色化合物的解离度，提高显色反应的灵敏度。 6、共存离子的影响
无机及分析化学
偏离朗伯—比尔定律。
无机及分析化学
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§10－2 显色反应及其影响因素
一、显色反应与显色剂
显色剂
显色反应：加入某种试剂使被测组分变成有色化合物的反应在光度分析中生成有色物质的反应主要有配位反应、氧化还原反应等，其中以配位反应应用最广。

第10章吸光光度法

价电子
分子振动分子转动
钨灯
碳化硅热棒电磁波发生器
比色及可见光度法
红外光度法微波光谱法核磁共振光谱法
2. 分子吸收光谱产生原理
吸收光谱是由物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。由物质的价电子能级跃迁（能量差在1~20eV）而产生的吸收光谱，是紫外及可见分光光度法——本章研究内容。由物质的分子振动能级（能量差约0.05~l eV）和转动能级（能量差小于0.05 eV）的跃迁而产生的吸收光谱，为红外吸收光谱法——用于分子结构的研究。说明：物质只有对特定波长(能量)的光才能有吸收。
△T为透光率读数的绝对误差，一般为± 0.01。
Er-T 关系图： Er ≤±4%时:
T: 15%~65 %
A: 0.2~0.8
T = 36.8 %，A = 0.434 时误差最小。
10.5 示差吸光光度法
1. 示差吸光光度法的原理 (高浓度) 常规法: 以试剂空白为参比
A bCx
示差法: 以浓度为 Cs 的标准溶液为参比 (Cs＜Cx)
3. 有色溶液对光的选择性吸收
① 单色光、复合光、互补光单色光:具有同一波长的光
复合光:包含不同波长的光互补光: 若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，这两种单色光为互补光。绿
蓝绿
黄
绿蓝
橙
蓝紫
红
② 有色溶液对光的吸收
吸收黄色光
复合光
完全透过
溶液的颜色与其吸收掉光的颜色为互补色。有色溶液呈现不同颜色的原因: 物质的电子结构不同，价电子跃迁所需能量不同，所吸收光的波长不同，因此溶液对光的选择性吸收，使其呈现不同颜色。
a. 选择性好

吸光光度法习题

第十章吸光光度法一、单项选择题(共25题）10.1。

1 在光度分析中，以1cm的比色皿测量透光率为T，若比色皿的厚度增加一倍，透过率为（）A、T/2B、T2C、2T D10.1.2 相同质量Fe3+和Cd2+（Mr（Fe）=55。

85，Mr（Cd)=112.4）,各用一种显色剂在同样体积溶液中显色,用分光光度法测定，前者用2cm比色皿，后者用1cm比色皿，测得吸光度相同，则两种有色络合物的摩尔吸光系数ε为（）A、基本相同B、Fe3+为Cd2+两倍C、Cd2+为Fe3+两倍D、Cd2+为Fe3+四倍10。

1.3 以下说法错误的是（)A、摩尔吸光系数ε随浓度增大而增大B、吸光度A随浓度增大而增大C、透过率T随浓度增大而增大D、透过率T随比色皿加厚而减小10。

1。

4 Ni（NH3）42+络离子为绿色溶液,其吸收最大的光的颜色为( ）A、绿色B、红色C、紫色D、黄色10。

1。

5 以下说法错误的是（)A、吸光度A与浓度C成直线关系B、透光率随浓度的增加而减少C、当透过率为“0”时吸光度为∞D、选用透过率与浓度做工作曲线准确度高10。

1。

6 分光光度计检测器直接测定是( ）A、入射光的强度B、吸收光的强度C、透过光的强度D、散射光的强度10。

1.7 某金属离子M与试剂R形成一有色络合物MR，若溶液中M的浓度为1。

0⨯10-4mol/L,用1cm比色皿于波长525nm处测得吸光度A为0。

400，此络合物在525nm处的摩尔吸光系数ε为（）A、4。

0⨯10—3 L*mol—1*cm—1B、4.0⨯103 L＊mol—1＊cm-1C、4.0⨯10-4 L*mol—1*cm—1D、4.0⨯105 L*mol—1＊cm—110.1.8 测定纯金属钴中锰时，在酸性溶液中以KIO4氧化Mn2+成MnO4-光度测定，测定试样中锰时,其参比溶液为（)A、蒸馏水B、含KIO4的试样溶液C、KIO4溶液D、不含KIO4的试样溶液10。

第10章吸光光度法

当：c的单位用mol·L-1表示时，用ε表示. ε－摩尔吸光系数 (Molar Absorptivity)
A＝εbc ＝的单位: ε的单位 L·mol-1·cm-1
吸光度与光程的关系 A = εbc
吸光度
光源
0.00
检测器
吸光度
光源
0.22
b 样品 b 样品 b 样品光源
检测器
吸光度
0.44
检测器
（一）光学因素（二）化学因素
（一）光学因素
1．非单色光的影响：非单色光的影响： Beer定律应用的重要前提 Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光定律应用的重要前提——入射光为单色光照射物质的光经单色器分光后并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度和棱镜或光栅的分辨率决定为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度这就使分离出来的光具一定的谱带宽度
k1 = k2 ⇒ A = k1c ⋅ b 成性系线关 k1 ≠ k2 ⇒ A与不线关，离 eer定 c 成性系偏 B 律（ 2 − k1） A与偏线关越重 k ↑⇒ c 离性系严
结论：结论： • 选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑）选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑ • 选λmax作为测定波长
长
波谱区
微波无线电波
来自分子转动能级及电子自旋能级跃迁来自原子核自旋能级的跃迁
二、光学分析法及其分类
（一）光学分析法依据物质发射的电磁辐射或物质与电磁辐射相互作用而建立起来的各种分析法的统称~ 互作用而建立起来的各种分析法的统称~。（二）分类：分类： 1．光谱法：利用物质与电磁辐射作用时，物质内部光谱法：利用物质与电磁辐射作用时，发生量子化能级跃迁而产生的吸收、发生量子化能级跃迁而产生的吸收、发射或散射辐射等电磁辐射的强度随波长变化的定性、辐射等电磁辐射的强度随波长变化的定性、定量分析方法按能量交换方向分吸收光谱法发射光谱法按作用结果不同分原子光谱→线状光谱原子光谱→ 分子光谱→ 分子光谱→带状光谱

吸光光度法 PPT

为透射比或透光度,用T表示溶液的透射比愈大,表示它对光的吸收愈小;相反,透射比愈小,表示它对光的吸收愈大。
T It I0
朗伯(Lambert J H)与比尔(Beer A)分别于 1760与1852年研究了光的吸收与溶液层的厚度及溶液浓度的定量关系,二者结合称为朗伯比尔定律,也称为光的吸收定律。
光栅(grating)是依照光的衍射与干涉原理将复合光色散为不同波长的单色光,然后再让所需波长的光通过狭缝照射到吸收池上。它的分辨率比棱镜大,可用的波长范围也较宽。
3、吸收系统——比色皿或吸收池
用于盛放试液的容器。它是由无色透明、耐腐蚀、化学性质相同、厚度相等的玻璃制成的,按其厚度分为0、5cm,lcm,2cm,3cm与5cm。
• 偏离朗伯－比尔定律的原
因主要是仪器或溶液的实际
条件与朗伯—比尔定律所要
求的理想条件不一致。
1、物理因素
(1)非单色光引起的偏离
* 朗伯-比尔定律只适用于单色光,但由于单色器
色散能力的限制与出口狭缝需要保持一定的宽度, 因此目前各种分光光度计得到的入射光实际上都是具有某一波段的复合光。由于物质对不同波长光的吸收程度的不同,因而导致对朗伯－比尔定ຫໍສະໝຸດ * 分子吸收光谱 -带状光谱
molecular absorption spectrum →由电子能级跃迁而产生吸收光谱[能量差
在1~20(eV)],为紫外及可见分光光度法。
UV/Vis Spectrophotometry →由分子振动能级(能量差约0、05~l eV)与
转动能级(能量差小于0、05 eV)的跃迁而产生的吸收光谱,为红外吸收光谱。用于分子结构的研究。
B 络合:显色剂与金属离子生成的是多级络合物,且各级络合物对光的吸收性质不同,例如在Fe(Ⅲ) 与 SCN-的络合物中,Fe(SCN)3颜色最深,Fe(SCN)2+颜色最浅,故SCN-浓度越大,溶液颜色越深,即吸光度越大。

吸光光度法讲解

吸光光度法讲解吸光光度法是一种广泛应用于化学分析和生物科学研究中的定量分析方法。

它通过测量样品溶液对特定波长的光的吸收程度来定量分析物质的浓度。

吸光光度法基于光的著名的“比尔-朗伯定律”，该定律描述了物质溶液对光的吸收与其浓度之间的关系。

通过测量光的吸收度，我们可以推算出浓度。

吸光光度法的基本原理是根据物质溶液对特定波长的光的吸收程度与溶液中物质的浓度之间的线性关系。

具体来说，当光通过物质溶液时，物质分子或离子会吸收光的能量，使光强度降低。

根据比尔-朗伯定律，光的吸光度（A）与物质的浓度（c）之间存在如下关系：A=εlc，其中ε是吸光度的摩尔吸光系数，l是光程长。

通过测量光的吸光度和已知的吸光度摩尔吸光系数，我们可以计算出溶液中物质的浓度。

在实践中，吸光光度法通常使用分光光度计来进行测量。

分光光度计可以发射一束特定波长的光，并测量光通过样品溶液前后的光强度差异。

这种差异可以转化为吸光度，并用于计算物质的浓度。

吸光光度法有许多应用领域。

在化学分析中，吸光光度法可以用于分析金属离子、化学物质的浓度、酸碱度等。

它可以通过配备合适的试剂和仪器来满足不同的分析需求。

在生物科学研究中，吸光光度法被广泛应用于测量DNA、蛋白质和酶的浓度。

通过测量DNA和蛋白质在特定波长下的吸光度，可以确定它们的浓度，进而研究其相互作用、结构和功能。

吸光光度法还可以用于测量酶的活性，通过测量酶和底物之间的反应，可以确定酶的催化能力。

吸光光度法有许多优点。

首先，它是一种快速、简单和经济的分析方法。

与其他方法相比，吸光光度法仪器简单、成本低，且操作方便。

其次，吸光光度法具有较高的选择性和灵敏度。

通过选择合适的波长和试剂，可以实现对特定物质的高度选择性测量。

此外，吸光光度法对微量物质的测量也非常敏感，可以达到微克或纳克级别的浓度测量。

然而，吸光光度法也存在一些限制。

首先，该方法对于有色的物质比较适用。

对于无色物质，需要经历一系列的试剂反应使其形成有色产物，才能进行吸光度测量。

分析化学十课后习题答案

第十章吸光光度法1.与化学分析法相比，吸光光度法的主要特点是什么？答：①灵敏度高 ②仪器设备简单，操作简便，快速 ③ 准确度较高 ④ 应用广泛 2.何谓复合光、单色光、可见光和互补色光？白光与复合光有何区别？答：⑴复合光指由不同单色光组成的光；单色光指其处于某一波长的光；可见光指人的眼睛所能感觉到的波长范围为400-750 nm 的电磁波；将两种适当颜色的光按照一定的强度比例混合若可形成白光，它们称为互补色光； ⑵ 白光是是一种特殊的复合光，它是将各种不同颜色的光按一定的强度比例混合而成有复合光。

3.简述朗伯-比尔定律成立的前提条件及物理意义，写出其数学表达式。

答：确定前提为：①入射光为平行单色光且垂直照射；② 吸光物质为均匀非散射体系；③吸光质点之间无相互作用；④辐射与物质之间的作用仅限于光吸收过程，无荧光和光化学现象发生。

其物理意义如下：当一束单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，其吸光度A 与吸光物质的浓度c 及吸收层厚度 b 成正比。

其数学表达式为： Kbc TI I A t===1lglg0 4.摩尔吸收系数κ在光度分析中有什么意义？如何求出κ值？κ值受什么因素的影响？答：⑴摩尔吸光系数κ在光度分析中的意义：当吸光物质的浓度为1mol/L 和吸收层厚度为 1cm 时，吸光物质对某波长光的吸光度。

(2)在吸光物质的浓度适宜低时，测其吸光度A ，然后根据bcA=κ计算而求得。

(3) κ值受入射光的波长，吸光物质的性质、溶剂、温度、溶液的组成、仪器灵敏度等因素的影响。

5.何谓吸光度和透射比，两者的关系如何？答：吸光度A 是指入射光强度I 0与透射光强度I t 的比值的对数值。

透射比T 是指透射光强度I t 与入射光强度I 0的比值。

两者的关系如下：TI I A t 1lg lg0== 6.在光度法测定中引起偏离朗伯-比尔定律的主要因素有那些？如何消除这些因素的影响？答：⑴物理因素：①非单色光引起的偏离 ②非平行入射光引起的偏离 ③ 介质不均匀引起的偏离。

第10章吸光光度法

第10章吸光光度法
• • • • • • • • • • 本章主要内容：第一节概述一、吸光光度法的特点二、光吸收的基本定律三、比色法和吸光光度法及其仪器第二节光度分析法的设计一、显色反应二、显色条件的选择三、测量波长和吸光度范围的选择四、参比溶液的选择
续前
• 第三节光度分析法的误差
350 Cr2O72-
525 545 MnO4-
0.4
0.2 300 350 400 500 600 700
/nm
苯 (254nm) A
甲苯 (262nm)
230
250
270

苯和甲苯在环己烷中的吸收光谱
10.2 光吸收基本定律
1. 光吸收定律－朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律吸光光度法的理论依据，研究光吸收的最基本定律
800
λ1
白光
600
500
λ2
入射狭缝准直透镜棱镜聚焦透镜出射狭缝
400
光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度
等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。原理：利用光通过光栅时
平面透射光栅透镜
光屏
M1
发生衍射和干涉现象而分光.
M2
光栅衍射示意图
出射狭缝
检测器
-kbc -A T = 10 = 10
吸光度A、透射比T与浓度c的关系
A
T = 10
-kbc
T
A=kbc
c
K 吸光系数 Absorptivity
当c的单位用g· L-1表示时，用a表示，
A＝abc
a的单位: L· g-1· cm-1
当c的单位用mol· L-1表示时，用表示.

分析化学第五版题库试题选编(第十章吸光光度法)

2 分(1102)透射比与吸光度的关系是-----------------------------------------------------------------------( )(A) 1TA=(B)lg1TA=(C) lg T = A(D)TA=lg12 分(1102)(B)2分(1103)1103一有色溶液对某波长光的吸收遵守比尔定律。

当选用2.0cm的比色皿时,测得透射比为T,若改用1.0cm的吸收池,则透射比应为----------------------------------------------------------( )(A) 2T(B) T/2(C) T2(D) T1/213. 2分(1103)1103(D)2分(1104)1104符合比尔定律的有色溶液,浓度为c时,透射比为T0,浓度增大一倍时,透射比的对数为-------------------------------------------------------------------------------------------------------------( )(A) T0/ 2 (B) 2T0(C) (lg T0)/2 (D) 2lg T02分(1104)1104(D)2 分(1105)有色络合物的摩尔吸光系数(ε)与下述各因素有关的是-----------------------------------( )(A) 比色皿厚度(B) 有色络合物的浓度(C) 入射光的波长(D) 络合物的稳定性2 分(1105)(C)2 分(1106)摩尔吸光系数(ε)的单位为-----------------------------------------------------------------------( )(A) mol/(L·cm) (B) L/(mol·cm)(C) mol/(g·cm) (D) g/(mol·cm)2 分(1106)(B)2分(1107)1107以下说法错误的是--------------------------------------------------------------------------------( )(A)摩尔吸光系数ε随浓度增大而增大(B)吸光度A随浓度增大而增大(C)透射比T随浓度增大而减小(D)透射比T随比色皿加厚而减小2分(1107)1107(A)2分(1108)1108以下说法正确的是--------------------------------------------------------------------------------( )(A)透射比T与浓度呈直线关系(B)摩尔吸光系数随波长而变(C)比色法测定MnO4-选红色滤光片,是因为MnO4-呈红色(D)玻璃棱镜适于紫外区使用2分(1108)1108(B)2分(1110)1110某金属离子M与试剂R形成一有色络合物MR,若溶液中M的浓度为1.0×10-4mol/L,用1cm比色皿于波长525nm处测得吸光度A为0.400,此络合物在525nm处的摩尔吸光系数为-------------------------------------------------------------------------------------------------------( )(A) 4.0×10-3(B) 4.0×103(C) 4.0×10-4(D) 4.0×1052分(1110)1110(B)1分(1112)1112有色溶液的光吸收曲线(吸收光谱曲线)是以______________________为横坐标,以___________________为纵坐标绘制的。

吸光光度法

第十章吸光光度法一、物质对光的选择性吸收1、物质对光的选择性吸收2、朗伯-比尔定律适用于任何均匀、非散射的固液气体，作为检测手段时在适用于低浓度的溶液。

bc Kbc T I I A t ε====1lg lg 0A ：吸光度，T ：透射比，K ：吸收系数，b ：溶液厚度，c ：浓度，ε：摩尔吸收系数（单位是11--∙∙cm mol L ）二、分光光度计及吸收光谱1、分光光度计1光源：通常用钨丝灯，连续光谱在360~880nm 2单色器：A 、棱镜（用于可见光范围）B 、光栅（适用波长范围宽，色散不改变波长，具有良好的分辨率）3吸收池：可见光用玻璃吸收池，紫外区用石英吸收池4检测器（光电转换器）：A 、光电管（红敏光电管适用625~1000nm ，紫敏光电管适用200~625nm ）B 、光电倍增管（由光电管改进而来，灵敏度是光电管的200多倍，适用167~700nm ）2、吸收光谱（参比溶液的选择）1显色剂与试液都无色，用蒸馏水作参比2显色剂无色，试液有色（存在其他有色离子），用试液作参比3显色剂有色，4显色剂试液均有色，先掩蔽被测离子（时被测离子不与显色剂反应），再加入显色剂，一起作为参比5改变试剂加入顺序，使被测组分与显色剂反应，并以此作为参比三、显色反应及其影响因素1、显色反应的选择1干扰少（或干扰易排除），灵敏度高（410>ε）2有色化合物组成恒定，有一定的化学式3化学性质稳定4有色化合物与显色剂颜色差别要大（nm 60>∆λ）2、显色剂（有机）1磺基水杨酸：主要用于测定+3Fe ，与+3Fe 反应在pH=1.8~2.5呈红色，pH=4~8呈褐色，pH=8~11.5呈黄色2丁二酮肟：用于测定+2Ni ，在氢氧化钠中，有氧化剂（如过硫酸铵）存在时与+2Ni 反应呈红色。

31，10-邻二氮菲测量+2Fe 较好的试剂，pH=5~6下反应呈橘红色（加入还原防止被氧化，如盐酸羟胺）4二苯硫腙：测定+++++22222,,,,Hg Cd Zn Pb Cu 等重金属离子，可加入掩蔽剂消除重金属离子间的干扰5偶氮胂Ⅲ（铀试剂Ⅲ）：在强酸中与+++444,,U Zr Th生成有色物质。

第10章吸光光度法

普朗克方程将电磁辐射的波动性和微粒性联系在一起。
E h c h
h －普朗克(Planck)常数 6.63×10-34J·s
c －真空中光速 2.99792458×108m/s~3.0 ×108m/s
－波长，单位：m,cm,mm, m,nm,Å
1 m=10-6m, 1nm=10-9m, 1Å=10-10m
用不同波长的单色光照射溶液，测其吸光度，以A对λ作
图，得吸收曲线，即吸收光谱。
10
第
不同物质吸收曲线的形状，λmax位置不同。
章
——定性分析
吸光
最大吸收波长（λmax）—吸光度A最大处对应的波长。
光
度
法
第
10
章
同一物质在同一波长下吸光度A随着浓度的增
吸
大而增大。
光
光
——定量分析
度
法
❖ 物质的分子结构与吸收光谱的关系
E

E2

E1

h

hc

不同物质分子因结
构不同而能级不同，故
各能级间的能级差也不
相同，因而选择吸收的
性质反映了分子内部结
第
构的差异。
章吸光光度法
10
10.1.3 光吸收的基本定律—朗伯-比尔定律
入射光
I0
It
透射光
b
透射比（透光度） T It I0
第
吸光度
A lg I0 lg 1 lg T
章
② 吸光物质为均匀非散射体系；
吸光
③ 吸光质点之间无相互作用（稀溶液）；
光度
④ 辐射与物质之间的作用仅限于光吸收过程。

吸光光度法

第四节、第四节、吸光光度法的仪器部件一、目视比色法
用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法. 定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法. 最常用的目视比色法是标准系列法. 最常用的目视比色法是标准系列法.
C1
C2
分子振动
红外光谱法
第一节、吸光光度法概述第一节、
吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，起来的分析方法，包括：包括：
比色分析法，比色分析法，可见光度法，可见光度法，紫外分光光度法，紫外分光光度法，红外分光光度法。红外分光光度法。
比色分析法和分光光度法特点: 比色分析法和分光光度法特点:
二、仪器测量误差
当A=0.434时，测量值 A=0.434时相对误差最小. 相对误差最小.
三.测量条件的选择
1、入射光波长的选择
2、吸光度读数范围的选择
T最小=0.368, A=-logT=0.434， A=-logT=0.434，
3、参比溶液的选择
(1)、当试液， (1)、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收时，可用纯溶剂(或蒸馏水)作参比; 吸收时，可用纯溶剂(或蒸馏水)作参比; (2)、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收， (2)、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液. 那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液. (3)、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液， (3)、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，加入适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按操作步骤加入显色剂及其它试剂，剂反应，然后按操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液. 参比溶液.

第十章紫外-可见吸光光度法习题及答案

1第十章紫外-可见吸光光度法习题1.是非判断题1-1物质的颜色是由于选择性地吸收了白光中的某些波长所致，VitB 12溶液呈现红色是由于它吸收了白光中是红色光波。

了白光中是红色光波。

1-2因为透射光和吸收光按一定比例混合而成白光，故称这两种光为互补色光。

因为透射光和吸收光按一定比例混合而成白光，故称这两种光为互补色光。

1-3有色物质溶液只能对可见光范围内的某段波长的光有吸收。

有色物质溶液只能对可见光范围内的某段波长的光有吸收。

1-4符合朗伯符合朗伯--比耳定律的某有色溶液的浓度越低，其透光率越小。

比耳定律的某有色溶液的浓度越低，其透光率越小。

1-5符合比耳定律的有色溶液稀释时，其最大吸收峰的波长位置不移动，但吸收峰降低。

1-6朗伯朗伯--比耳定律的物理意义是：比耳定律的物理意义是：当一束平行单色光通过均匀的有色溶液时，当一束平行单色光通过均匀的有色溶液时，当一束平行单色光通过均匀的有色溶液时，溶液是吸光度与吸溶液是吸光度与吸光物质是浓度和液层厚度的乘积成正比。

光物质是浓度和液层厚度的乘积成正比。

1-7在吸光光度法中，摩尔吸光系数的值随入射光的波长增加而减小。

在吸光光度法中，摩尔吸光系数的值随入射光的波长增加而减小。

1-8吸光系数与入射光波长及溶液浓度有关。

吸光系数与入射光波长及溶液浓度有关。

1-9有色溶液的透光度随着溶液浓度的增大而减小有色溶液的透光度随着溶液浓度的增大而减小,,所以透光度与溶液的浓度成反比关系。

所以透光度与溶液的浓度成反比关系。

1-10在吸光光度测定时，在吸光光度测定时，根据在测定条件下吸光度与浓度成正比的比耳定律的结论，根据在测定条件下吸光度与浓度成正比的比耳定律的结论，根据在测定条件下吸光度与浓度成正比的比耳定律的结论，被测溶液浓被测溶液浓度越大，吸光度也越大，测定结果也就越准确。

度越大，吸光度也越大，测定结果也就越准确。

1-11进行吸光光度法测定时，必须选择最大吸收波长的光作入射光。

解：依题意可知
Cd2+ :的浓度为：
A=-lgT=-Lg0.445=0.35
κ=-1·cm-1
=1.4×10-3 μg·cm-2
16.钴和镍与某显色剂的络合物有如下数据：
λ/nm 510 656 KCo/L×mol-1×cm-1 3.64×104 1.24×103 KNi/L×mol-1×cm-1 5.52×103 1.75×104 将0.376g土壤试样溶解后配成50.00ml溶液，取25.00ml溶液进行处理，以除去干扰物质，然后加入先色剂，将体积调至50.00ml.此溶液在510nm处吸光度为0.467，在656nm处吸光度为0.374，吸收池厚度为1cm。计算钴镍在土壤中的含量（以μg·g-1表示）。
解：根据题意得
由图得k=4.200
硅的质量百分数
≈1.24%
答：试样中硅的质量百分数为1.24%。
19．钢样0.500g溶解后在容量瓶中配成100ml溶液。分取20.00ml该溶液于50ml容量瓶中，其中的Mn2+氧化成MnO4-后，稀释定容。然后在λ=525nm处，用b=2cm的比色皿测得A=0.60。已知k525=2.3×103L·mol-1·cm-1,计算钢样中Mn的质量分数(﹪)。
4.摩尔吸收系数κ在光度分析中有什么意义？如何求出κ值？κ值受什么因素的影响？
答：⑴摩尔吸光系数κ在光度分析中的意义：当吸光物质的浓度为1mol/L和吸收层厚度为
1cm时，吸光物质对某波长光的吸光度。
(2)在适宜的低浓度时，测其吸光度A，然后根据计算而求得。
(3) κ值受入射光的波长，吸光物质的性质、溶剂、温度、溶液的组成、仪器灵敏度等因素的影响。
答：确定前提为：①入射光为平行单色光且垂直照射;② 吸光物质为均匀非散射体系;③吸光质点之间无相互作用;④辐射与物质之间的作用仅限于光吸收过程,无荧光和化学现象发生。

吸光光度法

第30讲 30讲
第十章吸光光度法
第1讲
第十章吸光光度法
吸光光度法（吸光光度法（ Absorption Photometry）是一）种基于物质对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法。包括可见吸光光度法、紫外-可见吸光分析方法。包括可见吸光光度法、紫外可见吸光光度法和红外光谱法等。光度法和红外光谱法等。吸光光度法同滴定分析重量分析法相比，有以下一些特点：法、重量分析法相比，有以下一些特点： (一)灵敏度高吸光光度法测定物质的浓度下一灵敏度高最低浓度)一般可达的微量组分。限 (最低浓度一般可达最低浓度一般可达1-10-3%的微量组分。对固的微量组分体试样一般可测到10 体试样一般可测到 -4%。如果对被测组分事先加。以富集，灵敏度还可以提高1-2个数量级个数量级。以富集，灵敏度还可以提高个数量级。
第30讲 30讲第十章吸光度法第1讲在分光光度测定中，在分光光度测定中，盛溶液的比色皿都是采用相同质且的光学玻璃制成的，同质且的光学玻璃制成的，反射光的强度基本上是不变的(一般约为入射光强度的一般约为入射光强度的4％其影响可以互相抵消其影响可以互相抵消，变的一般约为入射光强度的％)其影响可以互相抵消，于是可以简化为 I0＝It+Ia 纯水对于可见光的吸收极微，纯水对于可见光的吸收极微，故有色液对光的吸收完全是由溶液中的有色质点造成的。收完全是由溶液中的有色质点造成的。当入射光的强度I 一定时，如果I 越大，就越小，当入射光的强度 0一定时，如果 a越大， It就越小，即透过光的强度越小，即透过光的强度越小，表明有色溶液对光的吸收程度就越大。就越大。实践证明，有色溶液对光的吸收程度，实践证明，有色溶液对光的吸收程度，与该溶液的浓度、液层的厚度以及入射光的强度等因素有关。的浓度、液层的厚度以及入射光的强度等因素有关。如果保持入射光的强度不变，如果保持入射光的强度不变，则光吸收程度与溶液的浓度和液层的厚度有关。浓度和液层的厚度有关。

《吸光光度法教案》课件

《吸光光度法教案》PPT课件第一章：引言1.1 吸光光度法的定义1.2 吸光光度法在分析化学中的应用1.3 吸光光度法的原理1.4 吸光光度法的仪器与操作步骤第二章：吸光光度法的原理2.1 光的吸收与发射2.2 朗伯-比尔定律2.3 摩尔吸光系数2.4 吸光度的计算与单位第三章：分光光度计的结构与操作3.1 分光光度计的组成部分3.2 分光光度计的操作步骤3.3 光谱仪的使用与维护3.4 波长的选择与调整第四章：标准曲线的制备与分析4.1 标准曲线的制备方法4.2 标准曲线的绘制与分析4.3 样品浓度的计算与误差分析4.4 实际案例分析：药物含量测定第五章：吸光光度法的应用5.1 环境监测中的应用5.2 生物化学中的应用5.3 食品分析中的应用5.4 临床诊断中的应用第六章：吸光光度法的准确度与精确度6.1 准确度的评估6.2 精确度的评估6.3 干扰因素及其影响6.4 提高吸光光度法准确度的方法第七章：溶液的制备与处理7.1 溶液的配制方法7.2 溶液的浓度与体积的计算7.3 样品的前处理与分离7.4 样品分析中的常见问题与解决方法第八章：光散射与吸光光度法8.1 光散射现象的介绍8.2 光散射对吸光光度法的影响8.3 光散射的测定与分析8.4 光散射在吸光光度法中的应用案例第九章：吸光光度法在药物分析中的应用9.1 药物分析中的重要性9.2 药物的紫外吸收特性9.3 药物含量测定的方法与步骤9.4 实际案例分析：药物制剂中主成分的测定第十章：现代吸光光度法技术进展10.1 光纤吸光光度法10.2 微透析吸光光度法10.3 激光吸光光度法10.4 在线监测与自动化分析技术第十一章：吸光光度法在有机合成中的应用11.1 有机化合物的紫外吸收特性11.2 有机合成中光催化反应的监控11.3 有机物含量的测定与分析11.4 实际案例分析：有机合成产物的纯度测定第十二章：吸光光度法在材料科学中的应用12.1 材料科学中的光吸收现象12.2 吸光光度法在材料合成与表征中的应用12.3 材料性能与吸光性质的关系研究12.4 实际案例分析：纳米材料粒径的测定第十三章：吸光光度法在生命科学中的应用13.1 生物大分子的紫外吸收特性13.2 蛋白质浓度与纯度的测定13.3 核酸的定量分析与监测13.4 实际案例分析：细胞培养中的营养物质监测第十四章：吸光光度法在环境监测中的应用14.1 环境污染物的紫外吸收特性14.2 水质分析与监测14.3 大气污染物分析与监测14.4 实际案例分析：水体中有机物的总量测定第十五章：实验与练习15.1 吸光光度法的基本实验操作15.2 标准曲线与样品分析的实验操作15.3 常见干扰因素的实验探究15.4 综合实验练习：饮料中维生素C含量的测定重点和难点解析重点：1. 吸光光度法的定义、原理及其在分析化学中的应用。

第十章吸光光度法