第三章植物脱毒技术课件
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（2）培养条件：在茎尖培养中，光下培养的效果通常 比暗培养效果好。
（3）外植体的生理状态：茎尖最好从活跃生长的芽上 切取，一般地培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。
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二、热处理脱毒
1. 原理 利用病毒耐热性差的特点，将植物组织置 于高于正常温度的环境中，组织内部的病毒受热 以后部分或全部钝化，但寄主植物的组织很少或 不会受到伤害。
通过植物组织培养方法生产无病毒种苗可以同时除去真菌、 细菌和线虫的寄生，因此产量大幅度增加，最高可增产300％， 平均增产也在30％以上。
枣疯病
辣PP椒T学习病交流毒病
番茄病毒病
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第二节植物脱毒方法
一、茎尖分生组织培养脱毒 二、热处理脱毒 三、热处理结合茎尖脱毒 四、其它脱毒方法
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一、茎尖分生组织脱毒
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茎尖剥离（2）
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（三）影响茎尖脱毒培养的因素
（1）茎尖大小：茎尖大小与脱除病毒的效果成反相关， 即剥取茎尖越小，脱毒效果越好。但茎尖大小与茎尖 的成活率成正相关，即茎尖越小培养难度越大，成活 率越低。考虑到脱毒效果及提高成活率，一般切取 0.2～0.5 mm带1～2个叶原基的茎尖为培养材料。
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（二）茎尖脱毒的方法
1、取样与消毒 取病害相对较轻的植株，可以从选定的植株上取顶芽梢 段进行消毒接种。也可从室内培养1－2个月并进行热处 理的盆栽扦插苗上，采顶芽与侧芽消毒接种，消毒方法： 取顶芽梢段3－5cm，剥去大叶片，自来水冲洗，75％酒 精浸泡30秒左右，用0.1％升汞消毒10分钟，最后用无菌 水冲洗4－5次。
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2.热处理的方法
• (1)温汤浸渍处理 适用于休眠器官、剪下的接穗或种植材 料的脱毒处理。方法是将材料放在50～55℃的温水中浸渍 数分钟至数小时。此方法简便易行，但易造成材料受伤。
• (2)热空气处理 适用于生长期植物材料的脱毒处理。设备 可采用有照明、通风、调温、给水动能的培养箱。方法是 将待处理植株先进行盆栽，成活后移入35～40℃的培养箱 中处理几十分钟至几个月。
毒再生植株。
2、茎尖大小与脱毒效果
用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最大直径
0.1mm，也可以是带1－3个叶原基的茎尖。茎尖外植体的大小与
脱毒效果成反比。外植体过小，存活困难，生长缓慢，操作难度
大。但茎尖外植体过大，脱毒效果差。通常以带1－3个幼叶原基
的茎尖作外植体较合适。
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3.热处理脱毒的优点与局限性
(1)优点：对设备要求不高，技术简单，短时间可除去病毒。
(2)局限性：
●热处理不能脱除所有病毒，此法只对那些球形病毒和线形 病毒有效。而对杆状病毒不起作用。
●同时同样的处理效果也不一样（具有不确定性）。
●对植株有伤害，只有部分植株成活。
●对寄主植物进行较长时间的高温处理有可能钝化植物组织
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四、其它组织培养脱毒方法
（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱 导愈伤组织分化成苗，从而获得无病毒植株的方 法 （二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子多为多胚种子，除具有合子胚外，还 有多个珠心胚。珠心胚由珠心组织细胞即体细胞 分化形成，具有和母体相同的遗传特性。病毒一 般不通过种子传播，因而通过珠心胚培养获得的 再生植株是无毒的，同时保存了母株的遗传特性。
中的阻抗因子，使寄主植物中抗病毒因子难于活化，从而增
加无效植株的发生率。
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三、热处理结合茎尖脱毒
1 把切取的草莓芽洗净后 2 先经过高温短时间热处理，杀死部分病毒； 3 然后在无菌条件下对经过处理的材料，在解剖镜下解剖， 4 切取分生组织尖端0.2-0.3mm生长点， 5 迅速接种到最佳启动培养基上，在25℃下暗培养。 6 待长出愈伤组织后转入光培养， 7 接种到另一种丛芽培养基上，即产生丛生芽及绿苗。 8 将绿苗接种在生根培养基上， 9 20天后待根长2-5cm时即可炼苗移栽，成活率达到95% 以上。
第3章 植物脱毒技术
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第一节 植物脱毒的意义
一、病毒病危害
第一种类型为曾经或正在大面积或高比率发生，并造成
严重为害的植原体病害，主要包括枣疯病和泡桐丛枝病。
第二类型为局部或零星发生病害类型，
山楂丛枝病严重地区约占20%左右。 桃树黄化病和红叶病的发生面积较大，
第三种类型为国内外引种或国内苗木调运而传入病害类 型，比较典型的为从以色列引进的樱桃扁枝病和黄化病。1995年
• 4、生根诱导
• 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不 定根，而另一些植物不产生不定根，必须将无根 绿苗再诱导，才能生根成为完整植株。方法：将 2－3cm高的无根苗转入生根培养基，继续培养1 －2个月即可形成根。
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茎尖培养脱毒过程图
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茎尖剥离（1）
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(一）通过茎尖培养脱毒的原理
1、病毒在植物体内的分布
茎尖和根尖分生组织不含病毒粒子或病毒浓度很低，是因为病毒
在寄主植物体内随着维管系统转移，在根尖与茎尖分生组织中没
有维管束系统，病毒运动很困难。病毒在寄主茎尖分生组织中的
转移速度落后于茎尖的生长速度，导致顶端分生组织附近病毒浓
度低，甚至不带病毒，通过茎尖（根尖）离体培养便可获得无病
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2、拨取茎尖与接种
• 在超净工作台上，用解剖刀将仔细剥离幼叶，至 出现裸露的生长点，用刀尖切下带1－2个叶原基 的生长点，将切下的茎尖转移至培养基上，每管 接1－2个茎尖。
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• 3、培养
• 接种后的材料在25±2℃，每天光照10－16h条 件下培养。培养2个月左右，在茎尖再生出小绿 芽，小的茎尖则需3个月以上，有的甚至更长时 间才发生绿芽。其间应更换新鲜培养基。
北京中以示范农场从以色列引进一年生的经嫁接的6个欧洲樱桃品 系的苗木3500株，栽植当年即发现患带化病苗木，1995～1996年度 的发病率为3%。在从国内其它地区引入的樱桃、枣树、泡桐等新 品种苗木上也都发现带病苗木。
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二、植物脱毒的意义
“脱毒苗”或“无病毒苗”，是指不含有该种植物的主要危害 病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的 苗木。
（3）外植体的生理状态：茎尖最好从活跃生长的芽上 切取，一般地培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。
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二、热处理脱毒
1. 原理 利用病毒耐热性差的特点，将植物组织置 于高于正常温度的环境中，组织内部的病毒受热 以后部分或全部钝化，但寄主植物的组织很少或 不会受到伤害。
通过植物组织培养方法生产无病毒种苗可以同时除去真菌、 细菌和线虫的寄生，因此产量大幅度增加，最高可增产300％， 平均增产也在30％以上。
枣疯病
辣PP椒T学习病交流毒病
番茄病毒病
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第二节植物脱毒方法
一、茎尖分生组织培养脱毒 二、热处理脱毒 三、热处理结合茎尖脱毒 四、其它脱毒方法
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一、茎尖分生组织脱毒
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茎尖剥离（2）
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（三）影响茎尖脱毒培养的因素
（1）茎尖大小：茎尖大小与脱除病毒的效果成反相关， 即剥取茎尖越小，脱毒效果越好。但茎尖大小与茎尖 的成活率成正相关，即茎尖越小培养难度越大，成活 率越低。考虑到脱毒效果及提高成活率，一般切取 0.2～0.5 mm带1～2个叶原基的茎尖为培养材料。
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（二）茎尖脱毒的方法
1、取样与消毒 取病害相对较轻的植株，可以从选定的植株上取顶芽梢 段进行消毒接种。也可从室内培养1－2个月并进行热处 理的盆栽扦插苗上，采顶芽与侧芽消毒接种，消毒方法： 取顶芽梢段3－5cm，剥去大叶片，自来水冲洗，75％酒 精浸泡30秒左右，用0.1％升汞消毒10分钟，最后用无菌 水冲洗4－5次。
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2.热处理的方法
• (1)温汤浸渍处理 适用于休眠器官、剪下的接穗或种植材 料的脱毒处理。方法是将材料放在50～55℃的温水中浸渍 数分钟至数小时。此方法简便易行，但易造成材料受伤。
• (2)热空气处理 适用于生长期植物材料的脱毒处理。设备 可采用有照明、通风、调温、给水动能的培养箱。方法是 将待处理植株先进行盆栽，成活后移入35～40℃的培养箱 中处理几十分钟至几个月。
毒再生植株。
2、茎尖大小与脱毒效果
用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最大直径
0.1mm，也可以是带1－3个叶原基的茎尖。茎尖外植体的大小与
脱毒效果成反比。外植体过小，存活困难，生长缓慢，操作难度
大。但茎尖外植体过大，脱毒效果差。通常以带1－3个幼叶原基
的茎尖作外植体较合适。
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3.热处理脱毒的优点与局限性
(1)优点：对设备要求不高，技术简单，短时间可除去病毒。
(2)局限性：
●热处理不能脱除所有病毒，此法只对那些球形病毒和线形 病毒有效。而对杆状病毒不起作用。
●同时同样的处理效果也不一样（具有不确定性）。
●对植株有伤害，只有部分植株成活。
●对寄主植物进行较长时间的高温处理有可能钝化植物组织
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四、其它组织培养脱毒方法
（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱 导愈伤组织分化成苗，从而获得无病毒植株的方 法 （二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子多为多胚种子，除具有合子胚外，还 有多个珠心胚。珠心胚由珠心组织细胞即体细胞 分化形成，具有和母体相同的遗传特性。病毒一 般不通过种子传播，因而通过珠心胚培养获得的 再生植株是无毒的，同时保存了母株的遗传特性。
中的阻抗因子，使寄主植物中抗病毒因子难于活化，从而增
加无效植株的发生率。
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三、热处理结合茎尖脱毒
1 把切取的草莓芽洗净后 2 先经过高温短时间热处理，杀死部分病毒； 3 然后在无菌条件下对经过处理的材料，在解剖镜下解剖， 4 切取分生组织尖端0.2-0.3mm生长点， 5 迅速接种到最佳启动培养基上，在25℃下暗培养。 6 待长出愈伤组织后转入光培养， 7 接种到另一种丛芽培养基上，即产生丛生芽及绿苗。 8 将绿苗接种在生根培养基上， 9 20天后待根长2-5cm时即可炼苗移栽，成活率达到95% 以上。
第3章 植物脱毒技术
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第一节 植物脱毒的意义
一、病毒病危害
第一种类型为曾经或正在大面积或高比率发生，并造成
严重为害的植原体病害，主要包括枣疯病和泡桐丛枝病。
第二类型为局部或零星发生病害类型，
山楂丛枝病严重地区约占20%左右。 桃树黄化病和红叶病的发生面积较大，
第三种类型为国内外引种或国内苗木调运而传入病害类 型，比较典型的为从以色列引进的樱桃扁枝病和黄化病。1995年
• 4、生根诱导
• 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不 定根，而另一些植物不产生不定根，必须将无根 绿苗再诱导，才能生根成为完整植株。方法：将 2－3cm高的无根苗转入生根培养基，继续培养1 －2个月即可形成根。
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茎尖培养脱毒过程图
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茎尖剥离（1）
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(一）通过茎尖培养脱毒的原理
1、病毒在植物体内的分布
茎尖和根尖分生组织不含病毒粒子或病毒浓度很低，是因为病毒
在寄主植物体内随着维管系统转移，在根尖与茎尖分生组织中没
有维管束系统，病毒运动很困难。病毒在寄主茎尖分生组织中的
转移速度落后于茎尖的生长速度，导致顶端分生组织附近病毒浓
度低，甚至不带病毒，通过茎尖（根尖）离体培养便可获得无病
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2、拨取茎尖与接种
• 在超净工作台上，用解剖刀将仔细剥离幼叶，至 出现裸露的生长点，用刀尖切下带1－2个叶原基 的生长点，将切下的茎尖转移至培养基上，每管 接1－2个茎尖。
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• 3、培养
• 接种后的材料在25±2℃，每天光照10－16h条 件下培养。培养2个月左右，在茎尖再生出小绿 芽，小的茎尖则需3个月以上，有的甚至更长时 间才发生绿芽。其间应更换新鲜培养基。
北京中以示范农场从以色列引进一年生的经嫁接的6个欧洲樱桃品 系的苗木3500株，栽植当年即发现患带化病苗木，1995～1996年度 的发病率为3%。在从国内其它地区引入的樱桃、枣树、泡桐等新 品种苗木上也都发现带病苗木。
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二、植物脱毒的意义
“脱毒苗”或“无病毒苗”，是指不含有该种植物的主要危害 病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的 苗木。