脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响
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脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响
发表时间：2014-03-18T10:02:47.687Z 来源：《河南中医》2013年4月第1期供稿 作者： 高占民1李凤玉2万立2曹藏柱2魏淑霞2纪少军2曹 怀宇2
[导读] 烧伤创面修复过程较复杂，从最初的炎症反应，到后期的细胞增殖、创面收缩和胶原代谢等构成创面修复的整个环节。
高占民1李凤玉2万立2曹藏柱2魏淑霞2纪少军2曹怀宇2 尚培中2张河2王耀志3马继红4石冬2秦玉泉2 (1赤城县妇幼保健院河北张家口075000； 2解放军第二五一医院河北张家口075000； 3张家口市口腔医院河北张家口075000； 4张家口市下花园煤矿医院河北张家口075000) 基金项目：国家自然科学基金资助项目（30371467） 作者简Leabharlann Baidu：高占民（1970-），男，河北张家口人，医学学士，主要从事感染与创面修复。【摘要】目的:研究脂多糖
（lipopolysaccharide,LPS）对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响，以阐明LPS在皮肤创伤愈合中的可能作用。方法:体外培养正常人皮 肤成纤维细胞，通过3H-脯氨酸掺入法观察不同浓度的LPS 0、0 005、0 01、0 05、0 1、0 5和1 0μg/ml对成纤维细胞胶原合成的影 响。结果:LPS刺激浓度在0 005μg/ml时，成纤维细胞胶原蛋白合成能力增加，且与剂量浓度呈正相关；当LPS浓度为0 5μg/ml时，对成 纤维细胞胶原合成促进作用开始减弱；当浓度达到1 0μg/ml时则呈现抑制效应。结论:在一定浓度范围内LPS促进成纤维细胞胶原合成，这 些结果表明LPS在皮肤创伤愈合可能具有重要作用。
【关键词】脂多糖;胶原;成纤维细胞;创面愈合 【中图分类号】Q516； R335【文献标识码】A【文章编号】1003-5028(2013)05-0052-02 烧伤创面修复过程较复杂，从最初的炎症反应，到后期的细胞增殖、创面收缩和胶原代谢等构成创面修复的整个环节。作为创面修复 的主要细胞，成纤维细胞在创面修复过程中起着至关重要的作用［1］，其生物学行为的变化参与创面修复的整个过程。研究证实，细菌内 毒素（lipopolysaccharide,LPS）可以刺激人皮肤成纤维细胞增殖［2］。本实验研究LPS对人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响。 1材料与方法 1 1标本来源:取20例整形患者的皮肤做标本，男11例，女9例；年龄2～56岁，平均（20±15）岁。 1 2主要试剂及仪器:Dulbecco改良的培养基；LPS E.coli055:B5；小牛血清；3H-脯氨酸；酶联免疫标记仪。 1 3成纤维细胞培养:采用组织块法进行原代培养［3］。 1 4LPS作用浓度:用4%基础培养基稀释LPS，依次稀释至0、0 005、0 01、0 05、0 1、0 5和1 0μg/ml ［2］。 1 5成纤维细胞胶原合成的检测:以含10%FCS的DMEM培养基将处于对数生长期的成纤维细胞的制成1×104/ml的悬液，接种于96孔平 底培养板中，每孔200μl，细胞贴壁后，更换预先配置的LPS工作液。第2天将3H-脯氨酸掺入（掺入量0 5μCi/孔）稳态、融合的单层培养 成纤维细胞中［4］，第3天采用胃蛋白酶消化法检测培养液中胶原量。 1 6统计学处理:采用SPSS 13 0统计程序包进行单因素方差分析。P＜0 05表示差异具有显著性意义。 2结果 LPS浓度在0 005μg/ml至0 1μg/ml时，随着LPS刺激浓度的增高，成纤维细胞胶原合成量也逐渐增加；当LPS浓度为0 5μg/ml时， 成纤维细胞胶原合成能力降低，当LPS浓度达到1μg/ml时，成纤维细胞胶原合成明显受抑制，并明显低于正常皮肤成纤维细胞胶原合成。 3讨论 成纤维细胞做为创面修复的主要细胞，其增殖能力和胶原蛋白合成状况决定着创面修复的结局。成纤维细胞通过分泌胶原蛋白等细胞 外基质和增殖而影响创面修复进程。临床工作中发现，烧伤创面感染愈重创面修复愈慢，既往研究证实，细菌LPS影响正常人皮肤成纤维 细胞的增殖［2］。且创面修复的进程与成纤维细胞增殖和胶原合成密切相关，这是整个创面修复界专家一致认同的观点。但临床上尚未就 创面修复的影响因素做出定论。因此，研究LPS对成纤维细胞胶原合成的影响，对阐明LPS对创伤愈合的影响具有重要意义，进而对影响 创面愈合的因素也做一阐述。 本实验研究显示，在一定浓度范围内LPS对成纤维细胞胶原合成呈刺激作用，而超过一定浓度则呈现抑制作用。LPS作用后成纤维细 胞的生物学行为发生改变，进而影响胶原蛋白合成和分解代谢，从而影响创面修复的进程和结局，这一点也与临床创面处理过程中的表现 相一致，但具体机制尚不清楚，尚需进行深入研究。 参考文献 ［1］Kohyama T,Liu X,Wen FQ,et al.Cytokines modulate cilomilast response in lung fibroblasts［J］.Clin Immunol,2004,111:297302 ［2］杨红明,付小兵,柴家科,等.脂多糖对皮肤纤维母细胞和表皮细胞的影响［J］.解放军医学杂志,2000,25:428-429 ［3］Babu M,Diegelmann R,Oliver N.Fibronectin is overproduced by keloid fibroblasts during abnormal wound healing ［J］.Mol Cell Biol,1989,9:1642-1650 ［4］董波,陈肖华,张浩,等.一种改进的用于测定细胞周期的细胞制备方法［J］.军事医学科学院院刊,2002,26:124-129 ［5］李从青,姚洁,刘长明,等.内毒素对妊娠期糖尿病患者外周血单核细胞TLR-4 mRNA及NFκ-B mRNA表达的影响［J］.安徽医科大学 学报,2011,11:50-53 ［6］徐荔,何小鹃,柴旺,等.黄芪多糖对内毒素诱导巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β及NO的影响［J］.中国中医基础医学杂志,2011,17:6263
发表时间：2014-03-18T10:02:47.687Z 来源：《河南中医》2013年4月第1期供稿 作者： 高占民1李凤玉2万立2曹藏柱2魏淑霞2纪少军2曹 怀宇2
[导读] 烧伤创面修复过程较复杂，从最初的炎症反应，到后期的细胞增殖、创面收缩和胶原代谢等构成创面修复的整个环节。
高占民1李凤玉2万立2曹藏柱2魏淑霞2纪少军2曹怀宇2 尚培中2张河2王耀志3马继红4石冬2秦玉泉2 (1赤城县妇幼保健院河北张家口075000； 2解放军第二五一医院河北张家口075000； 3张家口市口腔医院河北张家口075000； 4张家口市下花园煤矿医院河北张家口075000) 基金项目：国家自然科学基金资助项目（30371467） 作者简Leabharlann Baidu：高占民（1970-），男，河北张家口人，医学学士，主要从事感染与创面修复。【摘要】目的:研究脂多糖
（lipopolysaccharide,LPS）对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响，以阐明LPS在皮肤创伤愈合中的可能作用。方法:体外培养正常人皮 肤成纤维细胞，通过3H-脯氨酸掺入法观察不同浓度的LPS 0、0 005、0 01、0 05、0 1、0 5和1 0μg/ml对成纤维细胞胶原合成的影 响。结果:LPS刺激浓度在0 005μg/ml时，成纤维细胞胶原蛋白合成能力增加，且与剂量浓度呈正相关；当LPS浓度为0 5μg/ml时，对成 纤维细胞胶原合成促进作用开始减弱；当浓度达到1 0μg/ml时则呈现抑制效应。结论:在一定浓度范围内LPS促进成纤维细胞胶原合成，这 些结果表明LPS在皮肤创伤愈合可能具有重要作用。
【关键词】脂多糖;胶原;成纤维细胞;创面愈合 【中图分类号】Q516； R335【文献标识码】A【文章编号】1003-5028(2013)05-0052-02 烧伤创面修复过程较复杂，从最初的炎症反应，到后期的细胞增殖、创面收缩和胶原代谢等构成创面修复的整个环节。作为创面修复 的主要细胞，成纤维细胞在创面修复过程中起着至关重要的作用［1］，其生物学行为的变化参与创面修复的整个过程。研究证实，细菌内 毒素（lipopolysaccharide,LPS）可以刺激人皮肤成纤维细胞增殖［2］。本实验研究LPS对人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响。 1材料与方法 1 1标本来源:取20例整形患者的皮肤做标本，男11例，女9例；年龄2～56岁，平均（20±15）岁。 1 2主要试剂及仪器:Dulbecco改良的培养基；LPS E.coli055:B5；小牛血清；3H-脯氨酸；酶联免疫标记仪。 1 3成纤维细胞培养:采用组织块法进行原代培养［3］。 1 4LPS作用浓度:用4%基础培养基稀释LPS，依次稀释至0、0 005、0 01、0 05、0 1、0 5和1 0μg/ml ［2］。 1 5成纤维细胞胶原合成的检测:以含10%FCS的DMEM培养基将处于对数生长期的成纤维细胞的制成1×104/ml的悬液，接种于96孔平 底培养板中，每孔200μl，细胞贴壁后，更换预先配置的LPS工作液。第2天将3H-脯氨酸掺入（掺入量0 5μCi/孔）稳态、融合的单层培养 成纤维细胞中［4］，第3天采用胃蛋白酶消化法检测培养液中胶原量。 1 6统计学处理:采用SPSS 13 0统计程序包进行单因素方差分析。P＜0 05表示差异具有显著性意义。 2结果 LPS浓度在0 005μg/ml至0 1μg/ml时，随着LPS刺激浓度的增高，成纤维细胞胶原合成量也逐渐增加；当LPS浓度为0 5μg/ml时， 成纤维细胞胶原合成能力降低，当LPS浓度达到1μg/ml时，成纤维细胞胶原合成明显受抑制，并明显低于正常皮肤成纤维细胞胶原合成。 3讨论 成纤维细胞做为创面修复的主要细胞，其增殖能力和胶原蛋白合成状况决定着创面修复的结局。成纤维细胞通过分泌胶原蛋白等细胞 外基质和增殖而影响创面修复进程。临床工作中发现，烧伤创面感染愈重创面修复愈慢，既往研究证实，细菌LPS影响正常人皮肤成纤维 细胞的增殖［2］。且创面修复的进程与成纤维细胞增殖和胶原合成密切相关，这是整个创面修复界专家一致认同的观点。但临床上尚未就 创面修复的影响因素做出定论。因此，研究LPS对成纤维细胞胶原合成的影响，对阐明LPS对创伤愈合的影响具有重要意义，进而对影响 创面愈合的因素也做一阐述。 本实验研究显示，在一定浓度范围内LPS对成纤维细胞胶原合成呈刺激作用，而超过一定浓度则呈现抑制作用。LPS作用后成纤维细 胞的生物学行为发生改变，进而影响胶原蛋白合成和分解代谢，从而影响创面修复的进程和结局，这一点也与临床创面处理过程中的表现 相一致，但具体机制尚不清楚，尚需进行深入研究。 参考文献 ［1］Kohyama T,Liu X,Wen FQ,et al.Cytokines modulate cilomilast response in lung fibroblasts［J］.Clin Immunol,2004,111:297302 ［2］杨红明,付小兵,柴家科,等.脂多糖对皮肤纤维母细胞和表皮细胞的影响［J］.解放军医学杂志,2000,25:428-429 ［3］Babu M,Diegelmann R,Oliver N.Fibronectin is overproduced by keloid fibroblasts during abnormal wound healing ［J］.Mol Cell Biol,1989,9:1642-1650 ［4］董波,陈肖华,张浩,等.一种改进的用于测定细胞周期的细胞制备方法［J］.军事医学科学院院刊,2002,26:124-129 ［5］李从青,姚洁,刘长明,等.内毒素对妊娠期糖尿病患者外周血单核细胞TLR-4 mRNA及NFκ-B mRNA表达的影响［J］.安徽医科大学 学报,2011,11:50-53 ［6］徐荔,何小鹃,柴旺,等.黄芪多糖对内毒素诱导巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β及NO的影响［J］.中国中医基础医学杂志,2011,17:6263