生化实验考试题2
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生化二理论部分
填空
1 RNA的提取方法(①苯酚法)(②去污剂法)(③盐酸胍法)
2 二苯胺法测定DNA含量样品中含有少量RNA并不影响测定,但因(蛋白质)(多种糖类及其衍生物)(芳香醛)羟基醛等能与二苯胺反应形成有色化合物,故能干扰DNA定理。
简答
1.提取DNA/RNA去除杂蛋白的方法有几种原理是什么?
答1变性剂法:用SDS等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA;
2苯酚法:用含水的酚溶液沉淀蛋白质和DNA,分层、离心。因蛋白变性,抑制了核酸酶活性,并且操作过程比较缓和,可以得到较好的DNA制品;
3氯仿法:用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白,使乳化,离心除蛋白,DNA在上层水相,用乙醇沉淀上层,可将DNA沉淀出来。
2.二苯胺法测DNA含量的原理以及乙醛的作用。
答DNA分子中的2-脱氧核糖在酸性环境中变成ω-羟基-γ-酮基戊醛,与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物(λmax=595nm)。DNA在40 ~ 400微克范围内,光吸收值与DNA的浓度成正比。
乙醛可增加二苯胺法测定DNA的发色量,又可减少脱氧木糖和阿拉伯糖的干扰,能显著提高测定的灵敏度。
3 0.14mol/lNaCl分离DNA和RNA的原理。
答物和植物组织的脱氧核糖核蛋白(DNP)可溶于水或浓盐溶液(如1mol/L氯化钠),但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低,而核酸核蛋白(RNP)则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大,利用这一性质可将其分开。
生化二操作部分
紫外—可见分光光度发影响因素(不知道)
提取动物DNA的流程(自己看吧)
DNA/RNA提取及测定时的注意事项
提取:①在低温下进行操作;
②减少物理因素对核酸的机械剪切力;
③防止过酸、过碱引起核酸降解,控制pH值范围(pH值5-9),并要保持一定离子强度;
④防止核酸的生物降解;
生化一理论及操作
填空
Folin-酚法测定蛋白含量时folin甲试剂是(碱性)反应试剂,()能还原乙试剂中的(磷钼酸)(磷钨酸)还原成
()和蛋白质中的()()和folin乙中的()()
2凝胶层析利用被分离物质的(分子大小)(形状不同)进行分离。
2名词解释
1.米氏常数:Km值是酶的特征常数之一,只跟酶的性质有关,而与酶的浓度无关。
2.正交表符号L9(34)每个代表的意义
L: 正交表的代号
9:正交表横行数
3:字码数(因素的水平数)
4:正交表纵列数(最多允许安排因素的个数)
3蔗糖酶活力测定原理(ppt79页)
蔗糖蔗糖酶的作用→D-果糖+ D-葡萄糖
DNS试剂+ D-葡萄糖强酸,沸水浴→氨基化合物
4.有机分级沉淀
向水溶液中加入一定量亲水性的有机溶剂,降低溶质的溶解度,使其沉淀析出的分离纯化方法。
3简答
1细胞破裂的方法
(1)机械(匀浆)法
(2)超声波处理法
(3)反复冻融法:
(4)化学处理法:
(5)溶胞作用(酶溶解法):
(6)自溶法:
2. SDS凝胶电泳中过硫酸铵(AP) TEMED(四甲基乙二胺)CL离子甘氨酸的作用
AP 催化剂引发聚合
TEMED 加速剂促凝作用加速聚丙烯酰胺凝聚
CL 甘氨酸浓缩效应(明天给你看)
3.双倒数法求VM、KM时用的米氏方程是什么?怎样求VM KM ?曲线特点是什么?
1 Km 1 1
((( = (( ( ((( + ((
V Vmax [S] Vmax
斜率是KM Y轴截距倒数是VM
特点自己看吧
4离子交换层析的原理步骤
原理:以离子交换剂为固定相,以特定的离子溶液为流动相,利用离子交换剂对待分离的各种离子结合力的差异,而将混合物中不同离子进行分离的层析技术。
步骤: 平衡-上样-吸附-洗脱-再生(具体的自己看看)