学生：细胞生物学实验

细胞生物学实验

1 考核方式

平时实验记录，实验报告，实验操作，考试笔试

2 考核内容

仪器设备使用；所开设实验：实验原理、步骤作用、试剂作用、结果分析、注意事项、实验异常原因分析；其它：实验安全，试剂使用注意事项，试剂配制，试剂标签包括的内容，等等。

2.1仪器设备使用

本课程重点掌握：普通双目显微镜，离心机，微量取液器，组织匀浆机

一般通用仪器：电子天平，恒温水浴，恒温培养厢，低温冰箱，烧杯，量筒，容量瓶，离心管，血球计数板。

生物技术专业加：系统显微镜及其自动曝光系统

2.2 开设实验

细胞化学：细胞总体蛋白和碱性蛋白的定位

理解运用固绿染色原理（例：pH5.5固绿染色的是哪些蛋白质？）

蛋白质两性电解质性质

固绿染色特点

细胞内蛋白质酸碱性

10%福尔马林作用？

5%三氯乙酸作用？

染色异常的原因分析

实验成功需要注意事项？

细胞化学：孚尔根（Feulgen）DNA染色法

理解运用实验原理。

固定液有什么作用？

热盐酸处理的作用？

Schiff试剂的有效成分是什么？

漂洗液的有效成分是什么，有什么作用？

显示DNA时，根材料的哪部分最好？

显微镜下怎样分辨细胞的间、前、中、后、末五个时期？

一个良好的压片至少具备哪些特征？（列举3个）

实验成功的关键是什么？

细胞生理：细胞膜的通透性

理解运用实验原理。

能够从实验数据推理，得出结论。（例：从下表中数据和描述，你能得出什么结论？）从EXCEL制图。

三线表制作。

图表格式的规范。（例：指出下表格式的欠规范之处）。

细胞分离技术：叶绿体的分离及荧光观察

掌握细胞分离的一般原理。取样原则？保护方法？细胞裂解方法及选择？

差速离心。

叶绿体荧光分析。

台式离心机使用注意事项。（3项）

细胞机械匀浆机使用注意事项。（3项）

微量移液器规范使用。（移液器的选择，握持方法及注意事项，调取样量方法和注意事项，取液注意事项，排液注意事项，放置和保存方法和注意事项。）

实验结果异常分析，叶绿体破裂原因分析。

细胞的形态结构：液泡系和线粒体的活体染色

理解运用詹纳斯线粒体绿体原理？

中性红染液泡原理？

Ringer液的作用?

实验失败原因分析。

染色体技术与核型技术：植物染色体标本的制备

理解运用常规压片法制备染色体标本原理。

获得良好分散的染色体的关键是什么？

细胞培养技术：植物原生质体的分离

酶解法制备原生质体的原理。

酶缓冲液的作用？

甘露醇的作用？

游离出来的原生质体为什么要洗涤?

实验时数：3；开设要求：选做；实验性质：综合性；每组人数：1

实验失败原因分析。

细胞工程技术：鸡血细胞的体外融合

理解细胞融合用途。

细胞融合方法。

理解PEG。

GKN液作用。

Hanks作用。

理解50%PEG（m/v）。

各个步骤作用。

实验失败原因分析。

实验时数：3；开设要求：选做；实验性质：验证性；每组人数：1

综合性实验：秋水仙素对洋葱细胞多倍体的诱导作用

秋水仙素诱导植物多倍体原理。

剪根时辰。

如何从2、4、8体细胞混杂的植物组织获得纯四倍体植株？（设计方案和技术路线）。（如：秋水仙素诱导后获得的是不同倍性细胞的混合体。如果希望得到纯的多倍体植株，还需要后继哪些工作？

光学显微技术：显微摄影

显微摄影对胶片、光强和曝光时间的总的要求。

感光胶片的种类和性能。

显微摄影时，为什么要校正视差?怎样校正视差？

摄影目镜的作用。

滤色镜的选用原则。

显微摄影的基本操作步骤。

理解运用影响曝光时间的因素。

以下附录仅供参考

附录Ⅰ：DNA Feulgen（孚尔根）染色法实验考试评分标准

一理论部分（随机抽取以下一个问题，口头回答。分值10％）二．操作部分

1 压片

压片前对根尖部分的取舍（5％）

盖玻片的规范放置、压片时的用力方向（5％）

2 压片结果：

细胞单层（10％）

无气泡（5％）

无因盖玻片的滑动二出现细胞核变形（长形）（5％）

3 显微观察

（对显微镜的）握镜方法（5％）

显微镜放置位置（5％）

光源使用（灯，光圈，聚光镜）合适（10％）

装片、调焦、变倍程序正确（5％）

用眼方法正确（5％）

附录Ⅱ：细胞生物学实验考核

一、内容

1 基础理论：细胞周期各时相典型特征

2 显微镜使用

3 制片技术

二、记分

1 制片技术（35）

a 洋葱根尖处理：去伸长区，保留分生区适当长度（5）

b 压片前根尖放置、滴加染液（或水）、盖玻片放置及其方法（5）

c 压片过程：加吸水纸、握片、击压方法（10）

d 压片结果：片面洁净（5），单细胞层（5），细胞（核）无因盖玻片的滑动、压片过渡造成的变形（5）

2 显微镜使用（30）

a 取镜、放镜动作姿势（5）

b 显微镜摆放位置（偏左，距台边距离）（5）

c 操作：聚光（5），调焦（5），物镜转换（5），观察姿势（用眼姿势）（5）

3 基础理论：细胞周期各时相典型特征（25）

a 文字说明间期、前期、中期、后期、末期细胞的典型特征（10）

b 绘图：正确判断并绘出5个时期（10），素描真实性、美观性（5）

4 其它操作：规范（10）

三、准备

1 经Feulgen染色的洋葱根尖（每人2根）

2显微镜（每人1台）

3 镊子、剪刀、解剖针、解剖刀（各一件），载玻片、盖玻片（各2片），吸水纸若干。

四、学生提交

1 制片

2 绘图：间期、前期、中期、后期、末期细胞DNA存在状态图

3文字说明间期、前期、中期、后期、末期细胞的典型特征（每期特征说明文字不多于20个）

附录Ⅲ叶绿体分离及荧光观察实验考试评分标准

一理论部分（随机抽取以下一个问题，口头回答。分值10％）

1 实验依据的原理是什么？

2 0.35 mol•L－1 NaCl溶液有什么作用？

3 第一次离心（1000 rpm，2 min）的作用是什么？

4 第一次离心（3000 rpm，

5 min）的作用是什么？

5 使用离心机时要注意哪些事项？

二．操作部分

1 材料准备（菠菜叶）

洗涤、去水、剪叶（10％）