云芝产漆酶发酵条件的正交试验筛选

摘要 ： 利用 正交 试验设计对影响 云芝 （ ｒｍ ｔ ｅ ｉ ｌｒ 菌株 Ｈ ０ Ｔａ ｅ ｓ ｒｃ ｏ） ｅｖ ｓｏ Ｓ一 ３产漆酶 的 ７种单 因素发 酵条件进 行系统 优 化 。结果表 明 ， 培养基 中碳 源和氮源用量 、 培养基初始 ｐ Ｈ值 、 养基 体积等因子对 该云芝 漆酶产量 均有 明显 的影响 ， 培 云芝 Ｈ ０ Ｓ一 ３摇瓶产漆 酶的最佳发酵条件为 ： 葡萄糖 ７ ５ｇ Ｌ 酵母 浸出液 ６ｇ Ｌ 培养基初始 ｐ ． ／ ， ／ ， Ｈ值 ４ ５ 培养基 初始体 ．， 积７ （ ５ ０ｍＬ ２０ｍＬ三角瓶 ） 。同时培养基 中含有 ２ｍＬ ＬＴ ｅｎ一８ 、 Ｉ ／ ｗ ｅ ０ ２ｍ ／Ｌ愈创木 酚、 终浓度为 ０ ５ｍ ｏ Ｌ的 ｃ “。 ． ｍ ｌ ｆ ｕ 关键词 ：云芝 ； 漆酶 ； 发酵条件 ；筛选 ；正交 试验
１１１ 菌株 ．． 定后保藏。
云 芝 （ ｒｍ ｔ ｅ ｉ ｌ ） 株 Ｈ ０ ， 河 南 Ｔａ ｅ ｓ ｒｃ ｏ 菌 ｅ ｖ ｓｏ ｒ Ｓ一 ３ 系
水处理 、 造纸 、 芳香化合 物转 化 、 环境监测 、 生物传感 器构建等 方面的巨大研 究价值 和应用 潜力 。 ， 漆酶一直是生 物学 、 化
收稿 日期 ：０ ９—０ ２ ２０ ９— ３
５ ２ ０ １ｇＬ 、 １ Ｓ ４ ２・１ Ｈ Ｏ（ ０ ｍ ／ ） Ｈ Ｂ ３ Ｈ Ｏ（ ． ／ ） Ａ Ｋ（ Ｏ ） ２ ２ １ ｇ Ｌ 、 ３ Ｏ Ｌ） Ｎｔｌ ｒ ｓｔ ｅ 、 ｉｉ ｔａｅ ｔ ｒｏ ｉ ａ
（ ０ ｍ ／ 、 ａＭｏ ４ ・２ ２ （ ．１ １ ｇ Ｌ） Ｎ ２ Ｏ Ｈ０ ０
江苏农业 科学
２１ ０ ０年第 ３期
－ ４ － － — —３ ５－ — —
姚朝阳， 牛敬媛 ， 郭伟云， 等．云芝产漆酶发 酵条件 的正交试验 筛选 ［ ］ Ｊ ．江苏农业科学 ，０ ０ ３ ：４ ２ １ （ ）３ ５—３ ７ ４
云芝 产 漆 酶 发 酵 条 件 的正交 试 验 筛 选
姚朝 阳 ，牛敬媛 ，郭伟 云 ，牛玉璐 。 ，邵 强 周 亚 莉 ， ，李 宗义
Fra Baidu bibliotek
（Ｔ Ｎ Ａ） １ ５ ／ 。 摇 瓶 种 子 培 养 基 ： 萄 糖 ２ Ｌ ． ｇ Ｌ 葡 ０ 、
（ Ｈ ） Ｓ ４ ． ／ 、Ｋ ２ Ｏ ２ ０ ｇ Ｌ ｇ Ｏ ・７ ２ Ｎ ２ Ｏ ５ ０ ｇ Ｌ Ｈ Ｐ ４ ． ／ 、Ｍ Ｓ ４ ＨＯ
基金项 目： 乡医学院高学历 人才资助项 目。 新 作者简介 ： 姚朝 阳（ ９ ９ ） 男 ， １７ 一 ， 河南长垣人 ， 硕士 ， 讲师 ， 研究方 向为
中 图 分 类 号 ：Ｑ ３ ９ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：０ ２—１０ （０ ０ ０ ０４ ０ １０ ３２ ２ １ ）３— ３ ５— ３
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
漆 酶 （ａｃｓ， Ｃ １ １． ． ） 一 种 含 铜 的 多 酚 氧 化 酶 ， １ ａｅ Ｅ ．０ ３ ２ 是 ｃ １８ ８ ３年 日本 学 者 吉 田 （ ｏｈｄ ） 次 从 漆 树 漆 液 中 发 现 ， Ｙ ｓｉａ 首 随 后 人 们 发 现 漆 酶 广 泛 存 在 于 白腐 真 菌 中 ， 少 数 低 等 真 菌 、 在 细 菌 和植 物 中 也 存 在 。 多 年 来 ， 于 在 纸 浆 生 物 漂 白 、 由 废
学 和 环 境 科 学 等 领 域 十 分 活跃 的研 究 热 点 。 本 研 究 通 过 Ｌ （ × 正 交 试 验 设 计 对 云 芝 （ ｒｍ ｔ ，４ ２） Ｔａ ｅ ｓ ｅ
ｖｓｏ ｒＨ ０ ｅ ｉ ｌ ） Ｓ一 ３产 漆 酶 发 酵 工 艺 的 ７个 影 响 因素 进 行 优 化 ｒｃ ｏ
（ ． 乡 医 学 院 基 础 医 学 院 ， 南 新 乡 ４ ３ ０ ； ． 乡 医 学 院 生命 科 学 技 术 系 ， 南 新 乡 ４ ３０ １新 河 ５０３ ２新 河 ５０ ３
３ 衡水学院生物系 ， ． 河北衡水 ０ ３ ０ ； ． ５ ０ ０ ４ 河南师范大学生命科学学院 ， 河南新乡 ４ ３ ０ ５ ０７）
（ ． ／ ） Ｃ Ｃ ０ １ Ｌ 、ｎ Ｏ ・ Ｈ Ｏ（ ． ／ ） Ｃ Ｓ ０ １ｇ Ｌ 、 ｏ １（ ． ）Ｚ Ｓ ４ ７ ０ １ｇＬ 、 ｕＯ
・
筛 选 ， 大 减 少 了 试 验 次 数 ， 高 了 试 验 效 率 和 试 验 的 科 学 大 提 性 ， 为 研 究 漆 酶 合 成 的 营 养 条 件 提 供 了理 论 依 据 ， 产 漆 酶 也 对 生 物 资 源 的 进 一 步 开 发 和利 用具 有 重 要 实 践 意 义 。
微 生 物 生 物 化学 。 Ｅ—ｍａｌｙｏｙ０ ８ １３ ｃｍ。 ｉ ａｚ２ ０ ＠ ６ ．ｏ ：
５ ０ｇＬ Ｃ Ｃ － Ｈ Ｏ １０ｇ Ｌ 另加微量元素溶 液 ７ Ｉ Ｌ ． ／ 、 ａ １ ２ ． ／ ， ０ｍ／ ，
初始 ｐ 值 ４ ５ 。 共 同 溶 液 ： Ｈ Ｐ ２ ０ ｇ Ｌ ＭｇＯ Ｈ ． Ｋ ２Ｏ ． ／ 、 Ｓ ４・ ７ ． ／ 、 ａ １ ・ Ｈ Ｏ １ ０ ｇＬ， 加 微 量 元 素 溶 液 Ｈ Ｏ５ ０ｇ Ｌ Ｃ Ｃ ２ ． ／ 另
师 范 大 学 环境 微 生 物 实 验 室 从 收 集 的诸 多 菌 株 中 筛 选 ， 鉴 经
１ １２ 培养 基 ．．
斜面 培养基 ： 马铃薯 葡 萄糖 培养 基 （ ｏ ｔ ｐｔ ｏ ａ
ｄｘ ｏｅａａ ，Ｄ 。 微 量 元 素 溶 液 ： Ｓ ４・ Ｈ Ｏ（ ． ｅｔ ｓ ｇｒＰ Ａ） ｒ ＭｇＯ ７ ２ ３ ０ Ｌ 、 Ｓ ４・ ２ ０ ５ｇＬ 、 ａ １ １０ｇ Ｌ 、 ｅＯ ７ ２ ） Ｍｎ Ｏ Ｈ Ｏ（ ． ／ ） Ｎ Ｃ （ ． ／ ） Ｆ Ｓ ４‘ Ｈ Ｏ