特殊毒性实验

哺乳动物 长期致癌试验
长期致癌试验常规选用大鼠和 小鼠，刚离乳的实验动物。设 三个试验组。以最大耐受剂量 （MTD）为高剂量。原则上试验 期限要求长期或终生，一般小 鼠 1.5 年，大鼠 2 年。观察有无 肿瘤出现、肿瘤出现时间及死 亡时间。
(三) 特殊毒性试验
第二节：致癌试验
动物 选择 剂量 分组 途径 期限 结果 分析
大鼠全 胚培养
器官 培养
胚胎细胞 微团培养
水螅 培养
(三) 特殊毒性试验
三段生殖毒性试验
Ⅰ段 Ⅱ段 Ⅲ段
一般生殖毒性试验
致畸试验
围生期毒性试验
（出生后发育）
（生育力和早期胚胎发育） （胚体-胎体）
参考资源
(三) 特殊毒性试验
小鼠骨髓细胞微核试验
Break or loss
(三) 特殊毒性试验
小鼠骨髓细胞微核试验
(三) 特殊毒性试验
单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）
(三) 特殊毒性试验
单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）
(三) 特殊毒性试验
第二节：致癌试验
哺乳动物细胞 体外恶性转化试验
体外细胞转化试验是检测受试 物对体外培养的哺乳动物细胞 转化的遗传毒理试验。是将动 物细胞在体外培养的环境下， 将细胞暴露于致癌物，高度模 拟致癌物在体内致癌的作用进 行致癌物检测的一种技术，可 以有效的体外筛查致癌物质的 致癌活性。
传统实验 体外筛选试验 三段生殖毒性试验
(三) 特殊毒性试验
传统实验
动物 选择 剂量 分组 动物 交配 胎仔 检查
结果 评定
大 鼠 家 兔
3剂量组 每组受孕 雌性动物 15-20只
1:1或1:2 大鼠第6天 给受试物 持续到第 15天
外观 内脏 软组织 骨骼
畸胎 出现率
(三) 特殊毒性试验
体外筛选试验
(三) 特殊毒性试验
1
着床前期 器官形成期
2
3
4
5
胎儿期 围产期 新ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ儿发育
(三) 特殊毒性试验
反应停的敏感期：末次月经后第34到50天
第35-37天：耳朵畸形和听 力缺失
第39-41天：胎儿上肢缺失 第43-44天：双手成海豹样3 指畸形 第46-48天：胎儿拇指畸形
(三) 特殊毒性试验
第三节：发育毒性和致畸作用试验
哺乳动物细胞基因 突变试验
2
5
致突变 试验
4 3
小鼠骨髓细胞微核试验
染色体畸形分析
(三) 特殊毒性试验
鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变实验（Ames试验）原理
某化学物
诱导作用
回复突变
组氨酸缺陷型菌(his-)
正向突变
野生型菌株(his+)
(三) 特殊毒性试验
鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变实验（Ames试验）原理
(三) 特殊毒性试验 反应停（Thalidomide ）
(三) 特殊毒性试验
第三节：发育毒性和致畸作用试验
(三) 特殊毒性试验
致畸作用
发育生物体死亡
着床前死亡，早期死亡晚 期死亡
生长改变
即生长迟缓 生长发育指标 比正常对照低
结构异常
指胎儿形态结构异常 即畸形
功能缺陷
包括器官系统、生化 免疫等功能的变化
(三) 特殊毒性试验
Ames试验结果评定
阳性：

诱发回变菌落数/自发回变菌落数≥2 有剂量-反应关系或至少某一测试点有重复并有统计学意义

结果应是至少两次独立试验的重复结果
只要在一种试验菌株得到阳性结果，即认为受试物是致突变物；
仅当四种试验菌株均得到阴性结果，才认为受试物是非致突变物
(三) 特殊毒性试验
小鼠骨髓细胞微核试验
微核：染色体无着丝点断片或因纺锤体受损伤而丢失的整个染 色体在细胞分裂的后期仍留在子细胞的胞质内，成为一个或几 个规则的次核

常用啮齿类动物骨髓多染红细胞 (PCE)微核试验。PCE是红细胞 成熟的一个阶段，此时有的红细胞的主核已排出，微核容易辩 认 观察的遗传学终点：染色体完整性改变和染色体分离改变
1
(三) 特殊毒性试验
1
致突变试验 致癌试验 发育毒性和致畸作用试验
2
3
(三) 特殊毒性试验
第一节：致突变试验
致癌
畸胎
体细胞
亲代
衰老 动脉硬化 未知疾病 致畸 致死 存活负荷
化学 毒物
致突变作用后果
生殖细胞 子代
(三) 特殊毒性试验
第一节：致突变试验
鼠伤寒沙门菌营养缺陷型回复突变实验
1
单细胞凝胶电泳技术
大鼠 小鼠 （刚离乳）
3个组 每组雌雄 各50只
小鼠1.5年 大鼠2年
肿瘤出现时间 动物死亡时间 病理学特征 肿瘤发生率
(三) 特殊毒性试验
第三节：发育毒性和致畸作用试验
沙利度胺（反应停）事件
(三) 特殊毒性试验


1957年10月Thalidomide正式投放欧洲市场，不久进入市场，在此后 的不到一年内，反应停风靡欧洲、非洲、澳大利亚和拉丁美洲，作 为一种“没有任何副作用的抗妊娠反应药物”，成为“孕妇的理想 选择”。 反应停事件是药物史上的悲剧，因服用反应停而导致的畸形婴儿据 保守估计大约有 8000 人，还导致大约 5000 到7000 个婴儿在出生前就 已经因畸形死亡。