基因治疗的原理与方法介绍

基因治疗的原理与方法介绍

基因治疗是将正常的基因导人体内某种细胞中，日达仙并使其表达所需的蛋白质，从而治疗遗传性或获得性疾病。

基因治疗是把目的基因分离出来，转染到体内的某种细胞，连接到有关的载体，使之稳定表达的过程。目的基因的转移分体外和体内两条途径，体外途径是将体内的某种体细胞(如白细胞)分离出来.在体外培养条件下将目的基因转导进去，然后再将这种带有外源性基因的细胞回输到体内，达到基因治疗的目的。体内途径是将目的基因与载体结合，然后输人体内，通过载体的作用，将目的基因导入靶细胞内，达到基因治疗的目的。体外途径的优点是目的基因往往可以整合到靶细胞的染色体上，能长期稳定表达，并随细胞分裂而传递给子代细胞。体内途径转导的目的基因可高效表达，但表达时间较短。

将目的基因导人细胞的方法有多种，具体有下列方法:

1.直接注射法

将目的基因直接注射到体内的某些部位(如肌肉)，邻近细胞摄人DNA并表达。这种方法非常简单，但效率低。

2.磷酸钙沉淀法

将氯化钙、DNA和磷酸盐缓冲液混合，即有磷酸钙微沉淀形成，体外培养的细胞可将沉淀吞入细胞内，从而将目的基因导入细胞内。这种方法优点在于简单和通用性，但转化效率通常很低。

3.显微注射法

在显微镜下，直接将DNA由细胞玻璃针注人细胞核内，可避免

DNA的降解，但要求有熟练的操作技巧。

4.脂质体介导法

将目的基因包裹到脂质体内，通过静脉注人体内，脂质体与细胞膜融合而使目的基因进人细胞内。脂质体介导的基因转移能在活体内应用，较为简单，转移效率较低，转移的目的基因不与染色体整合，只能短时间表达。

5.受体介导的基因转移

将含有目的基因的重组质粒DNA共价连接到能与某种细胞受体结合的配体上，再将这种复合物注人体内，配体与细胞受体特异性结合，发生正常的人胞作用，目的基因从而进人细胞内。这种方式转人的目的基因也不与染色体整合，只能短时间表达。

6.逆转录病毒载体介导的基因转移

带有外源性基因的重组病毒在感染细胞时.可将外源性基因序列导人细胞内。目前主要使用的病毒载体有逆转录病毒和腺病毒。逆转录病毒可将遗传物质整合到宿主细胞基因组内，因而很合适作基因治疗载体。将野生的逆转录病毒进行重组，除去编码病毒自身蛋白的序列，插人目的基因。（了解更多，请登录）