玫瑰精油的化学成分及其抗菌活性(1)

玫瑰精油的化学成分及其抗菌活性

摘要通过水蒸汽同步蒸馏法提取玫瑰精油,采用GC-MS方法分析了玫瑰精油的化学组成,共鉴定出其中14个化学成分并测定其相对含量,占总含量的95.25%。香茅醇为玫瑰精油的主要成分,相对含量为90.37%。体外抑菌实验表明,玫瑰精油除对黑曲霉没有抗菌活性外,对其它7种供试菌均具有不同程度的抑制作用,其中对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）为0.063% （v/v），对枯草芽孢杆菌、变形杆菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度（MIC）为0.125% （v/v），而对绿脓杆菌（Pseudomonasaeruginosa）的抗菌活性相对较弱, M I C 为0.5%（v/v）。抑菌直径结果也表明了玫瑰精油除对黑曲霉、绿脓杆菌的抗菌活性较弱外,对其它6种菌株的抑菌直径都大于8.5mm。考察了玫瑰精油对3种敏感菌株包括金黄色葡萄球菌（革兰氏阳性菌）、大肠杆菌（革兰氏阴性菌）和白色念珠菌（真菌）的杀菌动态过程,为玫瑰精油的应用提供了理论依据。

关键词玫瑰精油;成分;抗菌活性

1玫瑰精油的化学组成

天然玫瑰的精油组成十分复杂,主要成分是单萜类化合物,如香叶醇、香茅醇、芳樟醇等,玫瑰醚、倍半萜烯、倍半萜含氧化合物也占相当比例,其它的化合物有庚醛、乙醇、烷烃系列( C 1 7 ~ C 2 7 ) (玫瑰油石蜡烃的主要成分)等[ 1 ]。而这些化学成分含量的多少及化学成分上的差异,造成这些玫瑰油香气的微妙差异[ 2 ]。总的说来,香茅醇、香叶醇、B- 2苯乙醇和橙花醇与它们的酯类是构成玫瑰花香的基本成分,是玫瑰的主体香气成分。

2玫瑰精油的提取和分离

玫瑰油的生产工艺主要有水蒸气蒸馏法,有机溶剂浸提法、超临界二氧化碳萃取

法和分子蒸馏法等玫瑰油称为/液体黄金0,是玫瑰花的提取物。玫瑰精油在食品、化妆品、医药、保健品等领域具有重大的应用价值和经济价值,因此其提取被广泛地研究。

1玫瑰精油的化学组成

天然玫瑰的精油组成十分复杂,主要成分是单萜类化合物,如香叶醇、香茅醇、芳樟醇等,玫瑰醚、倍半萜烯、倍半萜含氧化合物也占相当比例,其它的化合物有庚醛、乙醇、烷烃系列( C 1 7 ~ C 2 7 ) (玫瑰油石蜡烃的主要成分)等[ 1 ]。而这些化学成分含量的多少及化学成分上的差异,造成这些玫瑰油香气的微妙差异[ 2 ]。总的说来,香茅醇、香叶醇、B- 2苯乙醇和橙花醇与它们的酯类是构成玫瑰花香的基本成分,是玫瑰的主体香气成分[ 1 ]。但玫瑰精油抗菌活性目前国内未见文献报道,本研究通过玫瑰精油对8种菌株的抑菌直径、M I C、M B C的测定以及杀菌动态研究,揭示了玫瑰精油具有很好的抗菌活性,为玫瑰精油作为细菌感染性疾病的选择性用药,同时也为玫瑰精油的综合开发利用提供了科学依据。

1仪器和材料

1.1 主要仪器

DL2CJ22N超净工作台,LDZX240BN立式自动电热压力蒸汽灭菌器, DPX-9082B-Z恒温培养箱,英国VG platform II,气质联用仪。

1.2 实验材料与试剂

牛肉膏、蛋白胨、琼脂等皆为生化试剂。其它试剂均为分析纯试剂。

1.3 玫瑰的来源

玫瑰购自三圣乡花卉市场。

1.4 菌种及培养条件

表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis，缩写为S.e以下同)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.a)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtiliis,B.s),大肠杆菌(Escherichiacoli,E.c)绿脓杆菌(Pseeudomonaseruginosa,P.a)、变形杆菌(Proteusvulgaris,P.v)、白色念珠菌(Candidaalbicans,C.a)和黑曲霉(Aspergillusnigar,A.n)均接种于中科研微生物研究所。前3种为革兰氏阳性菌,大肠杆菌、绿脓杆菌和变形杆菌为革兰氏阴性菌,后2种为真菌。除黑曲霉需用察氏培养基于28℃培养5d外,其余菌种均于营养琼脂培养基在37℃培养24h。

2 试验方法

2.1 菌悬液的制备

将上述供试菌种用适宜的培养基斜面活化后,用液体培养基制成含菌量约为105cfu.mL -1菌悬液。

2.2 精油提取与含量测定

采用水蒸气同步蒸馏法提取精油。玫瑰花碾碎后加水沸蒸回流3h。所得精油用无水硫酸钠脱水,过滤后量取体积。取适量精油用正己烷溶解稀释为体积分数0.1%用于气质联用分析。样品测定前置于-25℃下密封贮存。

2.3 GC-MS分析方法

气相色谱条件:色谱柱DB-5（30m×0.25mm×0.25μm）,进样口温度260℃,柱温60℃~220℃。升温程序:起始温度60℃,以15℃/min升温至160℃，再以5℃/min升温至250℃，维持2min。汽化室温度250℃,气质接口温度280℃。进样量1μm ,分流比30：1 ;载气为氦气,纯度99.99% ,流速1.2mL/min。

质谱条件:离子源为EI源,电子能量70eV ,离子源温度230℃,四极杆150℃,扫描范围30~500 amu。

经谱库检索并与保留时间相结合鉴定精油各组分峰,并对色谱峰用面积归一化法进行定量,计算各组分的相对含量。

2.4 抗菌活性实验

2.4.1 琼脂扩散法

抑菌直径的测定采用琼脂扩散法。用无菌棉签蘸取108cfu/mL的试验菌悬液,在营养琼脂平板表面均匀涂抹3次,然后绕平板边缘涂抹一周,盖好表面皿, 4e 冰箱保存5min,滤纸片(用打孔器将滤纸制成直径为6.0mm的小圆纸片)160℃干热灭菌2 h ,平放于无菌平皿内,每片滴加5μm的玫瑰精油,室温自然晾干,用无菌镊子取样片轻轻贴放于平板表面,每个平板贴2片试验样片,1片无菌生理盐水对照片。放于培养箱内培养,黑曲霉在28℃温度下培养5d ,其它菌株均在37℃培养24h。测量抑菌圈直径大小,实验重复3次。

2.4.2 微量肉汤稀释法

MIC及MBC的测定采用微量肉汤稀释法。MIC（Minimal Inhibitory Concentration）为最小抑菌浓度,即药物与一定浓度的菌液作用后,能够抑制可见菌生长的最低浓度, MBC（Minimal Bactericidal Concentration）为最小杀菌浓度，