狂犬病病毒中和抗体检测试剂盒的效果评价
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国际检验 医学杂志 ２ ０ １ ６ 年 １ ２ 月第３ ７ 卷第２ ３ 期
Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ ， Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ ． ２ ０ １ ６ ， Ｖｏ １ ． ３ ７ ， Ｎｏ ． ２ ３
・
３ ３３ ｌ ・
・
临床研 究 ・
狂犬 病 病 毒 中和 抗体 检 测 试剂 盒 的效 果 评 价
标 准 品效 价 为 ３ ０ Ｉ Ｕ／ ｍＬ ， 购 自英 国 国 立 生 物 制 品 和 控 制 标 准 品研 究 所 。 狂 犬 病 病 毒 中 和抗 体 检 测 试 剂 盒 由北 京 博 雅 晟 康 医学 科 技 有 限 公 司 提 供 。 １ ． ３ 方 法 Ｒ Ｆ Ｆ Ｉ Ｔ方 法操作程 序 ： 将 待测 血清 于 ５ ６℃ 灭 活
研 制 的 狂 犬 病 病 毒 中 和抗 体 检 测 试 剂 盒 以 Ｒ Ｆ Ｆ Ｉ Ｔ为基 础 ， 以 自主 制 备 的 Ｆ Ｉ ＴＣ标 记 的 抗 狂 犬 病 病 毒 核 蛋 白荧 光 抗 体 为 亮
点， 可应用于人和动物血 清狂犬病 病毒 中和抗体 效价 的检测 。 商 品化 试 剂 盒 可解 决 Ｒ Ｆ Ｆ Ｉ Ｔ 操 作 中荧 光 抗 体 、 Ｃ ＶＳ毒 株 及 所
种狂犬病疫苗后 ， 需 测定 其 血 清 内 的 抗 狂 犬 病 病 毒 中和 抗 体 效 价， 不低于 ０ ． ５ Ｉ Ｕ／ ｍＬ时 ， 方 可认 为达到 有效保 护 ， 否 则 应 予 加强免疫 ， 直至达到保护水平＿ １ ］ 。快 速 荧 光 灶 抑 制 试 验 （ Ｒ Ｆ — Ｆ Ｉ Ｔ） 是 Ｗ ＨＯ 推 荐 的 检 测 狂 犬 病 病 毒 中 和 抗 体 的 标 准 方 法 ， 也是 ２ ０ １ ５年 版 《 中 华人 民共 和 国 药典 》 第 四部 规 定 的检 测 人 免
中和 抗 体 的 检 测 。
狂 犬 病 病 毒 中和 抗 体 检 测试 剂 盒 可 以 用 于人 和 动 物 血 清狂 犬 病 病 毒
关键词 ： 狂 犬病 病毒 ； 中和 抗 体 ； 快速 荧 光 灶 抑 制 试 验
Ｄ ０Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉБайду номын сангаасｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ ０ １ ６ ． ２ ３ ． ０ ３ ５ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ （ ２ ０ １ ６ ） ２ ３ — ３ ３ ３ １ － ０ ２
２ ９ ９ ） ； 两种 方 法 对 动 物血 清 和人 血 清 的检 测 结 果 之 间 有 较 好 的 直 线 相 关 关 系 ， 相 关 系数 分 别 为 ０ ． ８ ９ ７和 ０ ． ９ ４ １ ； 同 一 份 标 本 的 重 复性检验显示 ， 试 剂 盒检 测 方 法 具 有较 好 的 稳 定 性 。 结 论
于鹏程 ， 闰江 泓 ， 吴 未辰 ， 由淑 贞 ， 陶晓燕 ， 朱 武洋 ， 纪 军 △
（ １ ． 中 国疾病 预 防控 制 中心 病毒 病预 防控 制所 ， 北京 １ ０ ２ ２ ０ ６ ；
２ ． 北京 博雅 晟康 医学科 技 有 限公 司 １ ０ ０ ８ ７ ２ ）
狂 犬 病 是 由 狂犬 病 病 毒 引 起 的 一 种 人 兽 共 患 传 染 病 ， 病 死 率几乎 １ ０ ０ 。 中 国是 狂 犬 病 的高 发 区 ， 目前 每 年 仍 有 近 千 人
死 于狂 犬 病 。疫 苗 免 疫 接 种 是 预 防该 病 发 生 的 唯一 途 径 ， 按 世 界卫生组织 （ Ｗ ＨＯ） 及 国际兽疫 局 （ Ｏ Ｉ Ｅ ） 的要求 ， 人 或 动 物 接
疫球 蛋 白 效 价 的 标 准 方 法 。北 京 博 雅 晟 康 医 学 科 技 有 限 公 司
３ ０ ｍｉ ｎ ， 用含 １ Ｏ 胎牛血清 的 Ｄ ＭＥ Ｍ 培养液于 ９ ６孔 板 做 ３ 倍 系列稀释 ； 标准血清 、 强 阳性 血 清 、 弱 阳性 血 清 和 阴性 血 清 用 同 样方法进 行系列稀 释 ； 病 毒 对 照 孔 做 连 续 的倍 比稀 释 ； 除 病 毒 对照孔外 ， 其 他各 孔均 加入 ５ Ｏ Ｌ最适攻 击量 病毒 ， 于 ３ ７℃ ５ Ｃ Ｏ 孵箱孵育 １ ｈ进 行 中和 后 ， 每￣ Ｌ ／ Ｊ Ｕ 人５ Ｏ Ｌ浓 度 为 １ Ｘ １ ０ 。ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ／ ｍＬ 的 细 胞 悬 液 ； 于 ３ ７℃ ５ Ｖ ｏ Ｃ Ｏ ２孵 箱 孵 育 ２ ４ ｈ 。 将９ ６孔 板 从 孵 箱 内取 出 ， 于Ｐ ２实 验 室 安 全 柜 内 ， 丢 弃 培 养 上
清液 ， 磷 酸 盐 缓 冲液 （ Ｐ Ｂ Ｓ ） 液 洗 １遍 ； 用 ８ Ｏ 冷 丙 酮 ４℃ 固 定 ３ ０ ｍｉ ｎ ； 将丙酮弃去 ， 加入 ５ Ｏ Ｌ抗 狂 犬 病 毒 核 蛋 白荧 光 抗 体 染色液 ， ３ ７℃ 孵 育 ３ ０ ｍｉ ｎ后 用 Ｐ Ｂ Ｓ液 洗 ３遍 ； 加入 ６ Ｏ 甘油 ，
摘 要 ： 目的 应 用 快 速 荧光 灶 抑 制 试 验 （ ＲＦ Ｆ Ｉ Ｔ ） 对 狂 犬 病 病 毒 中和 抗 体 检 测 试 剂 盒 的 检 测 效 果 进 行 评 价 。方 法 用 ＲＦ — Ｆ Ｉ Ｔ 和 狂 犬 病 病 毒 中和 抗 体 检 测 试 剂盒 分 别 对 ｌ ３ ５份 人 血 清和 １ ６ ４份 动 物 血 清 进 行 狂 犬病 病 毒 中和 抗 体 （ ＲＶ ＮＡ） 效价检 测 ， 应 用ｓ Ｐ Ｓ Ｓ ２ ２ ． ０分析 两 种检 测 方 法 所 得 结 果 的 相 关 性 和 一 致 性 。结 果 两 种 方 法 所 得 结 果 的 阳性 检 出符 合 率 为 ９ ９ ． ３ ３ （ ２ ９ ７ ／
Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｌ ａ ｂ Ｍｅ ｄ ， Ｄ ｅ ｃ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ ． ２ ０ １ ６ ， Ｖｏ １ ． ３ ７ ， Ｎｏ ． ２ ３
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３ ３３ ｌ ・
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临床研 究 ・
狂犬 病 病 毒 中和 抗体 检 测 试剂 盒 的效 果 评 价
标 准 品效 价 为 ３ ０ Ｉ Ｕ／ ｍＬ ， 购 自英 国 国 立 生 物 制 品 和 控 制 标 准 品研 究 所 。 狂 犬 病 病 毒 中 和抗 体 检 测 试 剂 盒 由北 京 博 雅 晟 康 医学 科 技 有 限 公 司 提 供 。 １ ． ３ 方 法 Ｒ Ｆ Ｆ Ｉ Ｔ方 法操作程 序 ： 将 待测 血清 于 ５ ６℃ 灭 活
研 制 的 狂 犬 病 病 毒 中 和抗 体 检 测 试 剂 盒 以 Ｒ Ｆ Ｆ Ｉ Ｔ为基 础 ， 以 自主 制 备 的 Ｆ Ｉ ＴＣ标 记 的 抗 狂 犬 病 病 毒 核 蛋 白荧 光 抗 体 为 亮
点， 可应用于人和动物血 清狂犬病 病毒 中和抗体 效价 的检测 。 商 品化 试 剂 盒 可解 决 Ｒ Ｆ Ｆ Ｉ Ｔ 操 作 中荧 光 抗 体 、 Ｃ ＶＳ毒 株 及 所
种狂犬病疫苗后 ， 需 测定 其 血 清 内 的 抗 狂 犬 病 病 毒 中和 抗 体 效 价， 不低于 ０ ． ５ Ｉ Ｕ／ ｍＬ时 ， 方 可认 为达到 有效保 护 ， 否 则 应 予 加强免疫 ， 直至达到保护水平＿ １ ］ 。快 速 荧 光 灶 抑 制 试 验 （ Ｒ Ｆ — Ｆ Ｉ Ｔ） 是 Ｗ ＨＯ 推 荐 的 检 测 狂 犬 病 病 毒 中 和 抗 体 的 标 准 方 法 ， 也是 ２ ０ １ ５年 版 《 中 华人 民共 和 国 药典 》 第 四部 规 定 的检 测 人 免
中和 抗 体 的 检 测 。
狂 犬 病 病 毒 中和 抗 体 检 测试 剂 盒 可 以 用 于人 和 动 物 血 清狂 犬 病 病 毒
关键词 ： 狂 犬病 病毒 ； 中和 抗 体 ； 快速 荧 光 灶 抑 制 试 验
Ｄ ０Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉБайду номын сангаасｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ ０ １ ６ ． ２ ３ ． ０ ３ ５ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ （ ２ ０ １ ６ ） ２ ３ — ３ ３ ３ １ － ０ ２
２ ９ ９ ） ； 两种 方 法 对 动 物血 清 和人 血 清 的检 测 结 果 之 间 有 较 好 的 直 线 相 关 关 系 ， 相 关 系数 分 别 为 ０ ． ８ ９ ７和 ０ ． ９ ４ １ ； 同 一 份 标 本 的 重 复性检验显示 ， 试 剂 盒检 测 方 法 具 有较 好 的 稳 定 性 。 结 论
于鹏程 ， 闰江 泓 ， 吴 未辰 ， 由淑 贞 ， 陶晓燕 ， 朱 武洋 ， 纪 军 △
（ １ ． 中 国疾病 预 防控 制 中心 病毒 病预 防控 制所 ， 北京 １ ０ ２ ２ ０ ６ ；
２ ． 北京 博雅 晟康 医学科 技 有 限公 司 １ ０ ０ ８ ７ ２ ）
狂 犬 病 是 由 狂犬 病 病 毒 引 起 的 一 种 人 兽 共 患 传 染 病 ， 病 死 率几乎 １ ０ ０ 。 中 国是 狂 犬 病 的高 发 区 ， 目前 每 年 仍 有 近 千 人
死 于狂 犬 病 。疫 苗 免 疫 接 种 是 预 防该 病 发 生 的 唯一 途 径 ， 按 世 界卫生组织 （ Ｗ ＨＯ） 及 国际兽疫 局 （ Ｏ Ｉ Ｅ ） 的要求 ， 人 或 动 物 接
疫球 蛋 白 效 价 的 标 准 方 法 。北 京 博 雅 晟 康 医 学 科 技 有 限 公 司
３ ０ ｍｉ ｎ ， 用含 １ Ｏ 胎牛血清 的 Ｄ ＭＥ Ｍ 培养液于 ９ ６孔 板 做 ３ 倍 系列稀释 ； 标准血清 、 强 阳性 血 清 、 弱 阳性 血 清 和 阴性 血 清 用 同 样方法进 行系列稀 释 ； 病 毒 对 照 孔 做 连 续 的倍 比稀 释 ； 除 病 毒 对照孔外 ， 其 他各 孔均 加入 ５ Ｏ Ｌ最适攻 击量 病毒 ， 于 ３ ７℃ ５ Ｃ Ｏ 孵箱孵育 １ ｈ进 行 中和 后 ， 每￣ Ｌ ／ Ｊ Ｕ 人５ Ｏ Ｌ浓 度 为 １ Ｘ １ ０ 。ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ／ ｍＬ 的 细 胞 悬 液 ； 于 ３ ７℃ ５ Ｖ ｏ Ｃ Ｏ ２孵 箱 孵 育 ２ ４ ｈ 。 将９ ６孔 板 从 孵 箱 内取 出 ， 于Ｐ ２实 验 室 安 全 柜 内 ， 丢 弃 培 养 上
清液 ， 磷 酸 盐 缓 冲液 （ Ｐ Ｂ Ｓ ） 液 洗 １遍 ； 用 ８ Ｏ 冷 丙 酮 ４℃ 固 定 ３ ０ ｍｉ ｎ ； 将丙酮弃去 ， 加入 ５ Ｏ Ｌ抗 狂 犬 病 毒 核 蛋 白荧 光 抗 体 染色液 ， ３ ７℃ 孵 育 ３ ０ ｍｉ ｎ后 用 Ｐ Ｂ Ｓ液 洗 ３遍 ； 加入 ６ Ｏ 甘油 ，
摘 要 ： 目的 应 用 快 速 荧光 灶 抑 制 试 验 （ ＲＦ Ｆ Ｉ Ｔ ） 对 狂 犬 病 病 毒 中和 抗 体 检 测 试 剂 盒 的 检 测 效 果 进 行 评 价 。方 法 用 ＲＦ — Ｆ Ｉ Ｔ 和 狂 犬 病 病 毒 中和 抗 体 检 测 试 剂盒 分 别 对 ｌ ３ ５份 人 血 清和 １ ６ ４份 动 物 血 清 进 行 狂 犬病 病 毒 中和 抗 体 （ ＲＶ ＮＡ） 效价检 测 ， 应 用ｓ Ｐ Ｓ Ｓ ２ ２ ． ０分析 两 种检 测 方 法 所 得 结 果 的 相 关 性 和 一 致 性 。结 果 两 种 方 法 所 得 结 果 的 阳性 检 出符 合 率 为 ９ ９ ． ３ ３ （ ２ ９ ７ ／