CD138磁珠分选SOP

骨髓CD138MACS操作步骤

1.抽取2-5mL骨髓，骨髓转移至锥形管（50mL）中，管内含等体积

的细胞培养基（HEPES缓冲液调配）

2.滤膜过滤细胞悬液（孔径大小100μm），去除骨碎片或细胞团块。

滤膜使用前须用分选缓冲液（autoMACS running buffer）打湿。

3.20℃，445g离心10min。

4.弃上清，勿激起细胞沉淀，加入分选缓冲液稀释沉淀至初始体积。

5.进行磁珠标记实验，加磁珠。每1mL抗凝全血或骨髓加50μL 全

血CD138微磁珠。

6.混匀，置于冰箱（2-8 ℃）孵育，15min。

7.洗涤细胞。每1mL抗凝全血或骨髓加入2-5mL分选缓冲液，室温

445g离心10min。

8.弃上清，勿激起细胞沉淀，保留一定的上清，避免细胞丢失。分

选缓冲液稀释悬液至1mL。

9.全血分选柱（Whole Blood Column）预处理：从柱顶端加入3mL

分选缓冲液，使缓冲液完全流过分选住，去除流出物。

10.将细胞悬液转移到预处理后的分选柱上，收集流出的未标记细胞。

11.再用3×3mL分选缓冲液清洗，收集未标记的细胞片段，与上步收

集的流出物混合。

12.卸下全血分选柱，置于收集管上。

13.加入5mL洗脱缓冲液（全血分选柱），向下推挤柱塞，同时收集

洗脱流出物。此流出物即为磁珠标记细胞。

注意：

1.本实验选用直接磁珠标记法，实验操作尽量快速、保证细胞的

低温环境、使用预冷溶液。高温、时间太久导致非特异性细胞被标记，影响实验效果。

2.本实验选用全血分选柱（Whole Blood Column）进行磁珠分选。

3.为了增加磁珠标记成分的纯度，可将洗脱成分通过MS/LS分

选柱，重新富集。