遗传性线粒体疾病的生殖细胞基因治疗方法

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开启偏 振 光激 发 ,利 用 持 卵针 旋 转人 类 卵母 细 胞 ,
精子注射
图2 卵母细胞纺锤体移植后进行
卵胞 浆 内单 精 子注 射 和 胚 胎 培 养
三、治 疗前 景和展 望
可发现 明暗闪烁 的纺锤 体 ,调 整 清 晰度 并 将纺 锤 体
遗 传性线 粒体 疾病 的 生殖 细胞 基 因治疗 的核 心
的形 态和 数量 、碎 片 的多少 对 胚胎 进 行 评分 。胚 胎 限制 了纺锤体转移技术的临床应用 、还需要进一步 转移 以及显微操作的过程均使用 台式加热板及倒 置 的研 究来 解决这 一 问题 ,但 是这 种 方法 为 利 用基 于 显微 镜加 热 台 ,3 7℃ 下进行 。在 取卵后 第 3天 或 第 辅 助生殖 技 术 预 防 m t D N A疾 病 遗 传 的实 施 提 供 了
卵胞 浆 内单 - - - -◆ 原核形成 ——— — ◆ 囊 胚
启动 P o l s c o p e偏振 光显 微 镜 成像 系统 及 倒 置显 微 镜加 热 台 ,对 P o l s c o p e进行 系统 光 路校 正 和 背 景 值 校正 。完成 后 ,将 培 养 皿 置 于 显 微 操 作 系 统 中 ,
3 .卵胞 浆 内单精 子注 射 ( i n t r a c y t o p l a s m i c s p e r m 的基 因组 和受 体 的线粒体 D N A,随后 进行 I C S I ,观
i n j e c t i o n ,I C S I )
I C S I 在 有 加 热 板 的显 微 操 作 仪 下 进 行 。将 实 了这 种 方 法 替 换线 粒 体 D N A 的 有 效性 。该 研 究
精子注入含有第 一极 体 的受核 卵母 细胞 胞浆 内, 表 明这 种核 转移 的方法 没有 对 卵母 细胞 产 生不 利 影 受 精 后 的 卵 子 移 入 含 培 养 液 中 ,3 7 c C、5 %C O
精情况 。 4 .胚胎 培养 和胚胎 移植
响 ,这是 临床转 化 的前 提 条 件 。但 是人 类 卵母 细 胞
上 ,用 注射针 将从 供 核卵 母 细胞 中吸 出 的 MI I 期 核 方法 应 用 于 人 类 卵 母 细 胞 中 也 是 可 行 的。 最 近
( 纺锤体 )经 透 明带 切 口插 入受 核 卵 母 细 胞 的 透 明 T a c h i b a n a等 从 研究 志愿者 体 内获得 了 1 0 6个 人 卵 带下 ,推 出分离 的纺锤 体 。然 后 ,将 受 核 卵母 细 胞 母 细胞 ,他 们 把 一 个 未 受 精 卵 母 细 胞 的 细 胞 核 移
MⅡ期 人 类 卵 母 细 胞 置 于 培 养 基 中 备 用 。 G V及 MI 期 人 类 卵 母 细 胞 在 体 外 成 熟 培 养 ,约 2 4 h后 观 察 是 否 排 出第 一 极 体 ,将 排 出第 一 极 体 的 M Ⅱ
人 类 卵 母 细 胞 备 用 。人 类 卵 母 细 胞 培 养 箱 的 培 养 条件为 3 7℃ 、5 %C O 2 、5 %0 2 、9 0 %N 2 和 1 0 0 % 的湿 度 。 2 .供 、受核 卵母 细胞之 间 的纺锤体 移植
置于预先制 备 的 G 1 . 5微 滴 培 养 系 统 中继 续 培 养 除 ,然后 用 另一 个 供 体 卵 母 细 胞 的细 胞 核 代 替 它 。
2 h。
这些交换 含有 线粒 体 的细胞 质 的卵母 细 胞带 有 供 体
察 这些 细胞 能够正 常发 育并 形 成 胚胎 干 细 胞 系 ,证
然剩余双折射性 的残余纺锤体 ,以确认去核是否完
T a c h i b a n a等 已经 在 非 人 灵 长 类 动 物 恒 河 猴
整 。将 去核后 的人类 卵母 细胞 置于 培养箱 中培养 1 h 研究 中将 一 个 细 胞 的 细 胞 核 转 移 到 另 一 个 细 胞 之
Baidu Nhomakorabea
左右,待去核人类卵母细胞 ( 受核卵母细胞 )的细 中 ,冷冻 复苏后 的恒 河猴 卵母 细 胞 中 的线 粒体 被 替 胞膜 恢 复 。再 次 将 受 核 卵 母 细 胞 置 于 显 微 操 作 仪 换后 经过 I V F . E T导 致 一 只 健 康 的 小 猴 出 生 。这 种

6 O ・
妇产与遗传 ( 电子版 ) 2 0 1 3年 6月第 3卷第 2期 O b s t e t r i c s - G y n e c o l o g y a n d G e n e t i c s , J u n e 2 0 1 3 , V o 1 . 3 , N o . 2
置于 3点钟 位置 ,用 z i l o s 激光 打孔仪 在 3点 钟位 置 是 进行 卵母 细胞质 的交 换 ,而 纺锤 体 移 植 能够 改 变 的透 明带 上 打 孔 ,使 用 去 核针 ( 内径 1 8—2 O m) 几 乎所 有 的细胞 质 ,移 植 的纺 锤体 由受 体 卵母 细 胞 缓慢 吸 出纺锤体 ,在 去核 的过程 中观察 纺 锤体 是 否 质控制 ,因此 这是 改善 卵母 细胞 质 量 的有 效 途 径 , 在去 核针 内 ,去核完 成后 观 察核 体 内是 否存 在有 双 有望 在临 床治疗 上 用 于母 亲 m t D N A突 变体 的遗 传 , 折射 性 的纺锤体 ,同时观 察 人类 卵 母 细胞 内是 否仍 对有 可能遗 传线 粒体疾 病 的儿童 产生 重要 的影 响 。 。
验相 比 ,人类 卵母 细胞经 过 纺锤 体 转移 后 发 生异 常
的培 养 箱 内培 养 1 6— 1 8 h , 倒 置 显 微镜 下 观 察 受 比恒 河猴 卵母 细胞对 这类 操 作更 敏 感 ,与 恒 河猴 实 现象 的机 率 明显 增 高 ,这 可 能是 因为纺 锤 体 转移 操 正常 受精 的胚胎 采用 序 贯 培养 法 培养 至 第 3天 作导 致 了卵母 细胞染 色体 过 早 分离 、应 该 进 入 到极 或第 5天 ( 囊胚 ) ,每 日根 据 卵裂 的速 度 、卵裂 球 体的染色体留在卵母细胞 中。虽然大量 的异常受精
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