丁苯酞对缺血性脑损伤作用的细胞靶点研究

ｐ ｅ ｃ ｒｍｏ ｙｏ ｈ ｏ ｈｏ ｃ ｔｍａ（ Ｃ１ ） ｅｌ ａ ｄｒｔ ｒ ｒ ｎ ｏｈ ｌ １ ｅｌ Ｓ Ｐ ｃ ｌ ｎ ｔ ｙｅ ｄ ｔｅｉ ｌ ＵＶＲＡＥＣ ａ ｄｔｅｅｆｃ ｆ 一 ２ ｓ ａａｅ ａ ｃ ｓ（ ） ｎ ｆ ｔ ｈ ｅ ｏ ＤＬ
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方法 分别使用大鼠肾 腺髓 质嗜铬细胞瘤细胞 （ ａ ａｒ ａ ｐｅｃｒ ｅ ｔ ａ Ｐ １） 上 Ｒ ｔ ｄ ｎｌ ｈｏ ｏ ｃ ｏ ， Ｃ２ 和大 鼠动 ｅ ｈｍ ｙ ｍ
作者单位
５ ０ ０广 东省 广 州 市 １ ８ ０ 中 山 大 学 附 属 第一 医 院
神 经 科
脉 内皮细胞 （ ｔ ｒ ｒ ｅｄ ｈｌｌｃｌ ＳＶ Ａ Ｃ 构建氧气葡萄糖剥夺一 ｒ ａ ｅ ｎｏ ｅ ｅｓ ＵＥ Ｅ） ａ ｔｙ ｔ ｉ ｌ， ａ 再灌注损伤模型， 通过噻
１ 材料与方法
１ ． 丁苯酞对细胞的毒性作用研究 Ｐ １和 ．１ ３ Ｃ２
１１ 细胞培养 采用大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞 Ｓ ＶＲＡ Ｃ ． Ｕ Ｅ 分别分成空白对 照组、 丁苯酞小剂 瘤细胞 （ ｔ ａ ｒｎ ｌ ｈ ｏ ｈ ｏ ｃ ｔｍａ 量 （ ｒ ｄ ｅ ａ ｐ ｅ ｃ ｒ ｍｏ ｙ ｏ ， ａ １ ｍｏ／ ） 丁苯酞 中剂量 （０ ｌＬ 、 １ ｍｏ／ ） ｌＬ 、 Ｐ ２ 来源 自Ｂ ｏ ｒ 细胞 库 ， Ｃ１ ）（ ｉＭａ ｔ 细胞 库号 丁苯酞 大剂量 （Ｏ ｍｏ／ ） １０ ｌＬ 。
Ｒｅ ｕ ｔ Ｄｉ ｅ ｅ ｔｃ ｎ ｅ ｔａｉ ｎ ｆ ｓｉ ｓ ｉ ｆ ｒ ｎ ｏ ｃ ｎ ｒｔ ｓｏ 一 一 — ｕ ｙＤ ｔ ａ ｉｅ（ ／ ０ １ Ｏ ｍｏ ／ ｄ ｄ ｎ ｔ ａ ｅ ａ ｙ ｏ ＤＬ ３ ｎ ｂ ｔ １ ｈ ｈ ｌ ｄ １１ ／ Ｏ Ｂ ｌ Ｌ） ｉ ｏ ｖ ｎ ｈ
Ｉｃ ｅ ｃ ｒ ｉ Ｉｊｒ Ｚ Ａ ｉ Ｌ ｉｇ Ｐ ｌபைடு நூலகம்ｈ ｎ ， ｔ １ Ｄｅ ａｔ ｎ ｏ ｅｒｌｇ ｓｈ ｍｉ Ｂ ａｎ ｎｕ ｙ Ｈ ０ Ｊｎ ． Ｉ ｎ ， Ｅ ｏｇ ｅ ．＊ ｐ ｒ Ｌ Ｚ ａ ｍｅｔｆＮ ｕｏｏｙ Ｔ ｅ ｉ ｔｆ ｌ ｔｄ ｓｉ ｌＳｎＹｔ ｅ ｎｖｒｉ， ｕ ｎ ｚｏ １ ０ ０ Ｃ ｉａ ｈ ｒ ｉ ｅ ｐｔ ， ｕ ａ— ｎＵ ｉ ｓｙ Ｇ ａｇ ｈ ｕ ０ ８ ， ｈｎ Ｆ ｓＡ ａ Ｈｏ ａ ｉ Ｓ ｅ ｔ ５
１ ｉ ｅｙ＿２ ｉｙｈｄａｙ， Ｐ Ｈ 一ｄＤ ｎ ｌ 一ｐ ｒ】 ｒｚＩＤ Ｐ ）法检 测 自由基 清除活性 。 ｈ ｃ ｙ
广 州 医 学 院 第 二 附 属 医
院
昆 明 市延 安 医院
通信作者
黄 如 训
结果 丁苯酞各 剂量 组对Ｐ １和ＳＶ Ａ Ｃ Ｃ２ ＵＢ Ｅ的细胞活性 均无明显影响 ， 均不能抑制 自由基 离 丁苯 子。 酞处理使经受氧气葡萄糖剥夺一 再灌注损 伤的ＳＶ Ａ Ｃｅ ＵＲ Ｅ￣胞活性 增加约１％， ０ 的细胞活性得到 ５ 约９％ 有效保护， 并具有剂量依赖性 ； 而对Ｐｉ的细胞活性 则无明显作 用。 Ｃ２ 结论 丁苯酞对Ｐ １和ＳＶ，Ｅ． Ｃ２ ＵＲ Ｃ Ａ ￣无毒性作 用， 不具有直接 清除 自 由基的能力； 丁苯酞主要 作用于
・ 卒｝ 志２ （ ２ 第 卷第期皿 ｝ 】 ｌ 杂 ０ 年 ， ５ ２ 】 国 １ ｛ ）
・
论著 ・
丁 苯酞 对 缺 血性 脑 损 伤作用 的 细胞靶 点研 究
一赵嘉 李玲 裴中 张波 魏 欢 黄￣ＯＩ ， ， ， ， ， ｎＩ
【 摘要】 目的 研 究丁苯酞对缺血 性脑损伤产生作 用的准确细胞类型 。
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３ｍｍｏ ／ ＫＣ ０ ２ ４ｇ １ ６ｍｍｏ ／ Ｎａ １ １ ４ １ 细 胞 活 性 检 测 一一 噻 唑 蓝 ［ 一 （ ， ｌＬ １ ．２ ． ５ ｌＬ Ｃ ． ． ３ ４
血 管内皮细胞 ， 而对神经元 的作用相对较 弱。 【 关键词 】 丁苯酞 ； 中； 卒 神经 元； 内皮细胞
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Ｄ ＭＺ Ｐ 一 ２ 作为体外研究神经元的细胞 １３２ 丁苯酞 对细胞 氧气葡萄糖 剥夺一 灌 Ｓ Ｃ １） ．． 再
１ 细胞活性检测： Ｃ ２ Ｐ １ 体系， ５ ＲＰ ６ ０ ８％ ＭＩ１４ 培养基＋ ０ ｌ％马血清＋ ％ 注损伤的作用研究 （） ５ 胎牛血清于３ ￣ ５ Ｃ ， ７ ％ Ｏ 培养箱孵育； Ｃ 采用大鼠 和 Ｓ ＵＶＲＡＥ Ｃ分 别分 成 空 白对 照组 、 氧 缺 丁苯酞小剂量 （ １ ｍｏ／ ） 缺氧组 、 ｌＬ ＋ 丁苯 动脉内皮细胞 （ａ ａｔｒ ｎ ｏｈ ｌ ｌｃｌ ， 组 、 ｒｔ ｒｅｙ ｅ ｄ ｔｅｉ ｅｌ ａ ｓ Ｓ ＶＲＡ Ｃ 来源 ￣ ｉ ｒ细胞库， Ｕ Ｅ ）（ ｔ ｏ Ｂ Ｍａ ｔ 细胞库 酞 中剂量 （０ １ ｍｏ／ ） 缺氧组、 ｌＬ ＋ 丁苯酞大剂 号Ｄ ＭＺ Ａ Ｃ Ｓ Ｖ） Ｓ Ｃ － Ｕ 作为体外研究脑血管内 量 （ ０ １ ｍｏ／ ） 缺氧组；（） ０ ｌＬ ＋ ２ 细胞凋亡检测： 皮的细胞体系， ０ Ｐ ６ ０ ９％Ｒ ＭＩ １４ 培养基＋ ０ 胎 Ｐ １和Ｓ ＲＡ Ｃ １％ Ｃ ２ ＵＶ Ｅ 分别分成空白对照组、 缺氧 丁苯酞有效剂量 （ ０ １ ｍｏ Ｌ ＋ ０ ｌ ） 缺氧组。 ／ 牛血清于３ ￣ ５ ０ 培养箱孵育。 ７ ％Ｃ ， Ｃ 待细胞生长 组、 至７％－８％ ０ ０ 用于实验 。
唑蓝 ｆ （， 一 ｊｅ ｙ ａ Ｉ 】－ ， ｂ ｈｎｌｔ ｒｚ ｉ ｒ ｉ ， Ｔ ］ ５ ４ ５ ｄ ｔ ｚ ｅ ｙ ２ ５ ｉ ｅ ｅ ａｏ ｍ ｂ ｍ ｅ Ｍ Ｔ 进行 细胞活性检 测， ｍ ｈ ｏ ２ ） ｐ ｙ ｔ ｌ ｕ ｏｄ 观 察单 纯损 伤细胞 与各 剂量 丁苯 酞处理 后的细胞活性 。 同时， 采用１ １二 苯基－ 苦基偕腙肼 （ ， ２ １ ，
尤其是作用的确切靶点仍未 阐明。 多个临床试验结果显示丁苯酞对急性缺血 然相当有限， 性卒中具有显著疗效 。 同时， 大量的动物实验 因此， 我们用模拟急性脑缺血 的离体氧气葡萄 也证实其对急幔性脑缺血有治疗及预 Ｊ 用Ｈ 。 糖剥夺一 再灌注模型来研究丁苯酞的效应靶点 已有的实验表明丁苯酞对脑缺血损伤有多方面 及可能通路， 从而推断其产生抗缺血损伤作用的 的影响， 但对其主要作用部位和机制的研究依 准确部位， 为临床治疗提供更多理论依据。
［ ｓｒ ｃ］ Ａｂ ｔａｔ
０ｂｅ ｔ ｅ Ｔ ｖ ｓ ｇ ｔ ｔ ｏｅ ｔ ｌ ｅ ｐ ｓｆｒ ｅ ｒｐ ｏ ｃ ｏ ｆ Ｌ ３ｎｂ ｔ ｐ ｔａ ｄ ｊｃｉ ｏ ｉ ｅ ｔ ａ ｅｐ ｔ ｉ ｌ ｔ ｅ ｏ ｕｏ ｒ ｔ ｔ ｎｏ 一一—ｕｙ ｈ ｌ ｅ ｖ ｎ ｉ ｅｈ ｎ ａ ｃ ｌｙ ｎ ｅｉ Ｄ ｌ ｈ ｉ
１３３ 丁苯 酞 清除 自由基 的活性 研究 分为 ．．
溶 丁 １２ 离体氧气葡萄糖剥夺一 灌注模型的建立 空 白对 照组 、 剂 对 照 组 、 苯 酞 小 剂 量 ． 再 把 生长状 态良好的Ｐ １及Ｓ Ｃ ２ ＵＶＲＡＥ 分别接 （ Ｃ １ ｍｏ／ ） 丁苯酞 中剂量 （０ ｌＬ 、 １ ｍｏ／ ） 丁 ｌＬ 、 种于９ ：板 ， ６ Ｌ 待其生长至７％～８ ％ ｛ ０ ０ 时将其正常 苯酞大剂量 （０ ｍｏ／ ） １０ ｌＬ 。 培养基换成缺氧液 （ ２ ｍｍｏ Ｌ Ｃ Ｃ２０２ １ ， １４ 方 法 ｌ ａ １ ．２ ． ／ ｇ
ｎ ｇ ｔｖ ｆｅ ｔｏ ｅｌ ｖｉｂｉｉ ．Ｄ Ｐ ｅ ａ ｉｅ ｅ ｆ ｃ ｎ ｃ ｌ ａ ｌｔ ｙ ＰＨ ｓ ｙ ｄｄ ｎｏ ｅ ｅ ｌａ ｙ ｄ ｒ ｃ ｒ ｅｒ ｄｉａ ｃ ｖｅ ｇｉｇ ａｓａ ｉ ｔｒ ｖ ａ ｎ ｉｅ ｔｆｅ —ａ ｃ ｌｓ ａ ｎ ｎ