小鼠肝脏细胞线粒体活体染色

姓名系年级2011级临八组别同组者
科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体染色学号
【实验目的】
1、掌握细胞器活体荧光标记技术。

2、观察和了解活细胞内线粒体等的形态与分布特点。

【实验原理】
对细胞的结构及功能的研究历来是细胞生物学的主要内容。

活体染色是指使生活有机体的细胞或组织着色但对其又无毒害作用的一种染色方法。

它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的的生命活动。

根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染和体外活染两类。

体内活染是将胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，使这些特殊结构易于识别。

体外活染又称超活染色，它是将活的动植物的分离出部分细胞或组织小块，用染料溶液浸染。

染料被选择性的固定在活细胞的某种结构上面显色。

随着细胞生物学的实验研究技术发展，对细胞的研究正经历着从简单到复杂，静态到动态，从单维度到多维度的发展。

其中，细胞器的活体荧光标记技术是现代细胞生物学研究常用的重要试验技术。

这种技术可以从分子水平上动态的研究活细胞中的各种生理活动，极大地增强了人们对细胞的认识能力。

这种技术能够用来分析细胞的信号转导、物质运输、能量代谢和膜电位的变化等。

现在。

已经有许多细胞器的特异的商业化荧光染料。

本节课所需的线粒体特异活体染色剂是詹纳斯绿B（Janus green B）。

由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，是该染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色。

【实验材料】
人口腔黏膜上皮细胞、小鼠干细胞、Ringer液、0.02%詹纳斯绿B水溶液
【实验步骤】
1、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的活体染色与观察
（1）取干净的的载玻片，滴加两滴0.02%詹纳斯绿B染液。

（2）用干净的牙签在自己的口腔粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放放入载玻片上的染液中，染色10~15敏，盖上盖玻片，用吸水纸吸去周围溢出的染液，
在于光学显微镜下观察。

2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色与观察
（1）用脊椎脱臼法处死小鼠，至于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块（0.5cm2 ），放入小烧杯中。

用习惯吸取Ringer液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去
血液。

（2）在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加0.02%詹纳斯绿B染液，再将肝组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没，要是组织块上半部分露在染液外，易于染色。

当组织块边缘被染成蓝绿色即可（20~30min）
（3）吸去染液，滴加Ringer液，用剪刀将组织块染色部分剪碎，使细胞或细胞群散出，然后，用吸管吸取分理出的细胞悬液，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片进行观察。

（4）在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜下观察，可见许多被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。

姓名系年级2011级临八组别同组者
科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体染色学号
【实验结果】
实验过程中对小鼠肝脏组织进行了25min至40min的染色。

使用剪子剪碎染色后组织后仍存有部分肉眼可见的粒状细胞团，稍沉淀后去上层细胞悬液进行镜检得到染色结果。

结果显示，细胞悬液中主要含有两种细胞，小鼠肝细胞（体积较大，视野下呈圆形，内容物清晰）和红细胞（体积小，视野下呈圆形或饼形，内容物不明显），后者数量较前者多。

这是由于肝脏具有重要的储血功能，而前期对肝脏的处理并不能彻底除去其中的血细胞成分。

对肝细胞的观察：可看到肝细胞与红细胞的显著不同在于其中有被染成蓝绿色至深灰色的粒状细胞器，判断即为线粒体。

难以准确计数每个肝细胞内线粒体的数量，但可以分辨大约有5至10个密集染色团块。

部分细胞未能被染色。

姓名系年级2011级临八组别同组者
科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体染色学号
视野中尚出现了部分细胞碎片等杂质。

【实验结果分析】
姓名系年级2011级临八组别同组者
科目细胞生物学实验题目小鼠肝细胞线粒体染色学号实验的预期目的基本达成，能够观察到较清晰的被染色肝细胞和内部线粒体。

存在以下几点不足：
1.染色不如预期效果鲜明，蓝绿色区域较少而模糊，部分细胞可能由于染色程度不适宜而导致未着色或着色过深。

应该严格控制染色时间，或采取分染色时长进行观察的手段。

2.视野中存在细胞碎片等杂质。